目的在胆管癌细胞株RBE中,研究LOXL2和Snail位点K98/K137对胆管癌细胞E-cadherin的影响及机制,为胆管癌靶向治疗提供新的实验数据,也为其他肿瘤提供新的治疗思路。方法在胆管癌RBE细胞中通过瞬时转染MU-k98-k137双突变质粒、EX-LOXL2质粒、LOXL2-Sh RNA干扰质粒,设立野生型,EX-LOXL2-MU-S-k98-k137组、EX-LOXL2组、Sh-LOXL2-MU-S-k98-k137组、Sh-LOXL2及相应空载质粒组进行对比,通过q-PCR和Western Bolt实验检测人胆管癌细胞RBE中LOXL2和Snail m RNA表达量及LOXL2,Snail和E-cadherin蛋白量的表达情况,放线菌酮实验检测Snail半衰期变化,分析Snail k98/k137双突变位点对LOXL2调控Ecadherin的影响及机制研究。结果在胆管癌细胞RBE中,采用q-PCR和Western Bolt及放线菌酮实验方法分别从基因和蛋白水平检测可得出以下结果。1.在胆管癌细胞RBE中,瞬时转染EX-LOXL2质粒和LOXL2-Sh RNA干扰质粒。q-PCR和Western Blot实验结果显示两组表达LOXL2 m RNA和蛋白量有统计学差异,验证质粒转染成功。q-PCR实验检测m RNA水平上LOXL2和Snail的关系。与RBE相比,EX-LOXL2组Snail m RNA表达量明显增多,P<0.0001;Sh-LOXL2组表达明显增多更多,P<0.001,Sh-LOXL2组与EX-LOXL2组相比,Snail m RNA量明显减少,P<0.0001。Western Blot实验检测蛋白表达水平上LOXL2和Snail的关系。相对RBE来说,EX-LOXL2组表达Snail蛋白量增多,P<0.001,Shttps://www.selleck.cn/products/s-gsk1349572.htmlh-LOXL2组表达减少,P<0.05;EX-LOXL2组相对Sh-LOXL2组,Snail蛋白量表达增多,P<0.0001。2.在胆管癌细胞RBE中,使用q-PCR和Western Blot实验检测Snail位点k98/k137双突变Snail m RNA和蛋白量的表达,可得出以下结果。EX-LOXL2组与EX-LOXL2-MU-S-k98-k137组相比,Sh-LOXL2组与Sh-LOXL2-MU-S-k98-k137组相比,LOXL2 m RNA和蛋白质表达量无统计学差异,p>0.05。EXLOXL2-MU-S-k98-k137组与EX-LOXL2组相比,Snail m RNA量显著减少,p<0.0001;Sh-LOXL2-MU-S-k98-k137组与Sh-LOXL2组相比无统计学差异,P>0.05。EX-LOXL2组相比于EX-LOXL2-MU-S-k98-k137组,Snail蛋白量增多,P<0.01;Sh-LOXL2-MU-S-k98-k137组与Sh-LOXL2组相比无统计学差异,P>0.05。3.在胆管癌细胞RBE中,使用放线菌酮实验测Snail半衰期。3h后,EXLOXL2-MU-S-k98-k137组Snail降解蛋白含量显著低于EX-LOXL2组,P<0.01。相比于EX-LOXL2组,RBE组和Sh-LOXL2组Snail降解后蛋白含量明显减少,P<0.01。4.在胆管癌细胞RBE中,使用Western Blot实验检测E-cadherin蛋白量的表达。相比RBE来说,Sh-LOXL2组E-cadherin蛋白量表达增多,P<0.05,EXLOXL2组明显减少,P<0.05;EX-LOXL2组相对于Sh-LOXL2组,蛋白量显著减少,P<0.001。EX-LOXL2组相对于EX-LOXL2-MU-S-k98-k137组,ShLOXL2组相对于Sh-LOXL2-MU-S-k98-k137组,E-cadherin蛋白量hepatic tumor减少,P<0.05。结论1.在胆管癌细胞RBE中,LOXL2可正向调控Snail m RNA和蛋白表达,提高Snail的稳定性,LOXL2可促进Snail下调E-cadherin的蛋白表达水平。2.在胆管癌细胞RBE中,Snail位点k98/k137双突变可下调Snail m RNA和蛋白的表达水平,使Snail稳定性减弱,降解速率增快,进而上调E-cadherin蛋白量的表达。