目的:晶体在肾小管上皮细胞的黏附聚集是肾结石形成的重要步骤,细胞损伤和晶体聚集可能是影响晶体在细胞表面黏附沉积的关键。SIRT3在清除组织活性氧和减弱氧化应激损伤中起重要作用,调节细胞坏死性凋亡可能是SIRT3发挥作用的重要途径,而聚乙二醇具有分散剂的特性以及修复细胞的作用,对晶体聚集可能有抑制作用。因此本课题拟探究SIRT3调节坏死性凋亡在草酸钙肾结石形成中的作用及探索聚乙二醇对晶体黏附聚集的干预研究。方法:第一部分采用SIRT3过表达、SIRT3敲除及野生型C57BL/6雄性小鼠,通过乙醛酸bioartificial organs腹腔注射构建小鼠草酸钙肾结晶模型,肾脏标本HE染色,SIRT3免疫组化,Von Kossa染色以及蛋白免疫电泳检测SIRT3、p-MLKL表达水平。第二部分以小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1为研究对象,构建一水草酸钙刺激细胞为模型组,预使用RIPK3抑制剂GSK872后加入一水草酸钙刺激作为抑制剂组,以及加入等量PBS的对照组。观察表面晶体黏附情况,检测细胞活力、细胞毒性、氧化应激水平,以及蛋白质免疫印迹检测RIPK1,RIPK3,p-MLKL表达水平。第三部分以活性氧刺激剂、PEG4000及一水草酸钙多种组合CB-839临床试验刺激TCMK-1,检测细胞活力、细胞毒性及活性氧水平,观测细胞状态及晶体黏附情况。结果:(1)小鼠肾草酸钙晶体沉积诱发肾小管上皮细胞坏死性凋亡明显增加,SIRT3过表达可以调节坏死性凋亡,减轻晶体性肾损伤,并减少肾脏晶体沉积。(2)体外研究表明,当一水草酸钙晶体浓度在低水平(6cm培养皿400ug/ml以下)时,抑制细胞坏死性凋亡可以一定程度地减轻细胞损伤并减少细胞表面晶体黏附沉积。当一水草酸钙晶体浓度超过800ug/ml时,细胞表面晶体聚集形成不定型沉淀,减轻细胞坏死性凋亡细胞损伤不能减少晶体黏附沉积总量。(3)预使用聚合物PEG4000能够使悬液体系中晶体颗粒保持悬浮稳定状态,并能够减轻细胞氧化应激损伤,显著减少细胞表面晶体黏附沉积。结论:肾脏草酸钙晶体沉积涉及RIPK3-MLKL介导的坏死性凋亡,SIRT3通过调节坏死性凋亡能够减轻晶体性肾损伤。体外研究表明减轻肾小管上皮细胞坏死性凋亡可以一定程度减少晶体黏附,但较高的晶体负荷可在细胞表面黏附聚集形成不定型沉淀,LY-188011半抑制浓度预使用聚合物PEG4000能够保持晶体颗粒悬浮稳定,减轻细胞氧化应激损伤,减少细胞晶体黏附。