Achr receptor

苋菜(Amaranthus tricolor L.)是石竹目苋科(Amaranthaceae)苋属(Amaranthus)一年生双子叶草本植物,营养价值丰富,种植面积广,种植历史悠久,近年来受到广泛关注。当前,土壤盐渍化是限制植株生长发育的主要非生物胁迫之一,一直是全球研究热点。因此,探究植物耐盐机制,挖掘耐盐关键基因,增强植物的耐盐能力尤为重要。TCP基因主要调控植物花、芽和叶片的生长发育,并响应盐胁迫。NHX基因介导Na+/H+交换,维持细胞内外离子平衡,减少Na~+积累造成的毒害作用。由于苋菜响应盐胁迫的生理及分子机制尚不明确,本研究以‘苏苋1号’苋菜为试验材料,研究不同浓度Na Cl溶液对苋菜营养生长与主要营养物质、光合特性及生理生化指标的影响,及利用q RT-PCR技术检测AtrTCP和AtrNHX基因对盐胁迫的响应,并通过转化拟南芥验证AtrTCP1和AtrNHX11的功能。试验结果如下:1.盐胁迫对苋菜生长及营养物质的影响对3叶期苋菜幼苗进行不同浓度盐胁迫(0 mmol·L~(-1)、50mmol·L~(-1)、100 mmol·L~(-1)和200 mmol·L~(-1)Na Cl)处理。结果表明,50mmol·L~(-1)Na Cl处理下的苋菜植株高度高于其余浓度Na Cl处理,且有利于根系伸长和须根数量增加;200 mmol·L~(-1)Na Cl处理下的苋菜植株长势矮小,且抑制根系伸长和须根数量增加。对苋菜主要营养物质研究发现,50 mmol·L~(-1)NaCl处理下苋菜植株类黄酮含量最高,200 mmol·L~(-1)Na Cl处理下含量最低。随着时间的延长,不同浓度Na Cl处理下类黄酮含量差异更显著。而甜菜色素含量变化趋势与类黄更多酮相反,200 mmol·L~(-1)Na Cl处理下甜菜色素含量最高。2.盐胁迫对苋菜光合特性及生理生化指标的影响对盐胁迫处理下苋菜叶片叶绿素含量测定发现,总叶绿素含量呈现先上升后下降的趋势,100 mmol·L~(-1)Na Cl处理下的苋菜叶片总叶绿素含量最高,200 mmol·L~(-1)Na Cl处理下的苋菜叶片总叶绿素含量最低。对盐胁迫处理下苋菜叶片叶绿素荧光分析发现,随着盐溶液浓度的增加,叶绿素荧光参数呈下调趋势。对根系活力测定发现,50 mmol·L~(-1)NaCl处理下的苋菜植株根系活力最强。对各项生理生化指标测定发现,随着Na Cl浓度的增加,过氧化物酶活性和丙二醛含量显著增加,200 mmol·L~(-1)Na Cl处理下达到最大值;过氧化氢酶活性在100 mmol·L~(-1)Na Cl处理下最高。3.苋菜AtrTCP基因家族鉴定及盐胁迫下基因表达谱苋菜AtrTCP基因家族有14个成员,全部定位于细胞核;AtrTCP蛋白质长度在230-721 aa区间内,预测相对分子量为25.25-78.57 k D,等电点为6.15-9.45,包含15个保守基序;除AtrTCP11为稳定蛋白外,其余均为不稳定蛋白;mi RNA预测到两个AtrTCP家族成员AtrTCP2和AtrTCP6为mi R319靶基因。q RT-PCR结果显示:在不同浓度盐胁迫处理下,该基因家族具有不同的表rifamycin biosynthesis达模式;其中,AtrTCP1在50 mmol·L~(-1)Na Cl处理下表达量最低,在200mmol·L~(-1)Na Cl处理下表达量最高。在苋菜各部位进行q RT-PCR分析发现:AtrTCP3和AtrTCP12在叶片中高表达,其余家族成员均在根部的表达量较高。4.苋菜AtrNHX基因家族鉴定及盐胁迫下基因表达谱基于苋菜转录组数据,筛选得到12个AtrNHX家族成员基因,该家族成员分子量在15.45-61.04 k D之间;等电点在5.30-9.28之间;该基因家族成员全部为不亲水性蛋白。对其亚细胞定位发现,12个基因全部定位在液泡上。苋菜AtrNHX7和拟南芥At NHX3亲缘关系较近,苋菜AtrNHX2和AtrNHX11与拟南芥At NHX4关系较近。利用qRT-PCR分析不同浓度盐溶液处理苋菜NHX家族成员表达模式,AtrNHX11在100 mmol·L~(-1)Na Cl处理下表达量最高,其余成员均在50 mmol·L~(-1)Na Cl处理下表达量最高。在苋菜各部位进行q RT-PCR分析发现:多数家族成员在根部或茎部的表达量较高。5.苋菜AtrTCP1和AtrNHX11基因功能验证对野生型和转基因拟南芥T2代种子进行种子萌发试验,结果发现,非盐胁迫处理下,转化植株种子提前萌发,且发芽率和发芽势均高于野生型。盐胁迫下野生型拟南芥发芽率受抑制程度更显著。种子萌发14 d时,非盐胁迫处理下35S::AtrTCP1转化植株与野生型根系长度无较大差异;35S::AtrNHX11转化植株根系长度小于野生型。盐胁迫处理野生型、35S::AtrTCP1和35S::AtrNHX11转化植株根系长度小于非盐胁迫处理。拟南芥长至6片叶时,使用150 mmol·L~(-1)NaCl处理野生型和拟南芥转基因植株,所有处理的植株比较矮小,叶片大小和叶片数量也小于非盐胁迫处理。盐胁迫下,35S::AtrNHX11转化植株在处理后第8.8 d长至10.2片叶时开花;35S::AtrTCP1转化植株在处理后第16.2 d长至21.8片叶时开花;而野生型在第18.4 d长Ceralasertib分子式至21.6片叶时开花。非盐胁迫处理下,35S::AtrNHX11转化植株在继续培养第9.2 d长到9.8片叶时开花;35S::AtrTCP1转化植株在继续培养第13.2 d长到16.2片叶时开花;而野生型在继续培养第13.8 d长至16.6片时开花。盐胁迫处理野生型拟南芥叶绿素含量显著低于非盐胁迫处理;而35S::AtrTCP1和35S::AtrNHX11转化植株的叶绿素含量显著高于非盐胁迫处理下。盐胁迫及非盐胁迫下,35S::AtrTCP1和35S::AtrNHX11转化植株的叶绿素含量均高于野生型。盐胁迫对拟南芥转化植株中相关基因表达分析结果显示,盐胁迫下GUS基因在35S::AtrTCP1和35S::AtrNHX11转化植株的表达量显著高于非盐胁迫下;盐胁迫下,目的基因在野生型、35S::AtrTCP1和35S::AtrNHX11转化植株的表达量显著高于非盐胁迫下。对盐胁迫下转基因相关性分析发现,AtrTCP1与盐浓度呈现极显著正相关,AtrNHX11与盐浓度呈现显著正相关;AtrTCP1和AtrNHX11呈现显著正相关。

目的 探讨穿心莲内酯(AG)能否通过激活铁死亡中的SLC7A11/GPX4轴减轻脓毒症患者肠损伤。方法 将40只大鼠随机分为假手术组(sham组)、脓毒症组(CLP组)、AG低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg);HE染色观察肠道病理变化；ELISA法测定白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸含量；以AG高剂量组(AG20组)探讨铁死亡机制，40只大鼠随机分为sham组ICI 46474分子式、CLP组、铁死亡抑制剂(Fer-1)组、AG20+Fer-1组；HE染色和透射电镜观察肠道病理变化；试剂盒测定氧化应激MDA、GSH水平和Affinity biosensorsFe~(3+)含量；Western blot检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁重链蛋白1(FTH-1)蛋白水平。结果 与sham组相比，CLP组小肠形态损伤严重，炎症水平、I-FABP及D-乳酸水平明显增高(均P<0.05),AG组逆转上述变化，且呈浓度依赖性(P<0.05)；与CLP组相比，AG2获悉更多0组及Fer-1组小肠病理损伤得到改善，MDA水平、Fe~(3+)含量降低，GSH含量升高，SLC7A11、GPX4、FTH-1蛋白表达升高(均P<0.05),AG20+Fer-1组病理损伤及氧化应激减轻，SLC7A11、GPX4、FTH-1蛋白表达升高更明显(均P<0.05)。结论 AG减轻脓毒症肠损伤的机制可能与铁死亡中的SLC7A11/GPX4轴激活有关。

近年来,随着发病率的持续上升,恶性肿瘤已经成为人类健康的重大威胁。因此,开发具有良好生物安全性、低毒副作用和较好特异性的新型肿瘤治疗策略具有重要意义。基于金属离子在细胞内多种生物过程的重要作用,Talazoparib化学结构研究者们开发出了多种纳米材料用于肿瘤治疗。其中,向肿瘤部位递送具有芬顿/类芬顿活性的过渡金属元素引起了广泛的研究,其可以在肿瘤部位将过氧化氢(Hydrogen peroxide,H_2O_2)转化为活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS),造成凋亡损伤以及促进脂质过氧化物(Lipid peroxides,LPO)累积,诱导肿瘤细胞凋亡/铁死亡。除递送外源性金属元素外,消耗内源性金属离子也是一种潜在的打破胞内离子平衡的有效策略。基于此,本论文构建了一系列复合纳米材料,通过递送外源性金属离子以及消耗内源性金属离子两种途径,打破细胞内金属离子平衡,实现肿瘤的高效治疗。通过充分的理化表征、细胞和动物模型深入评估了纳米材料在肿瘤治疗中的性能和作用机理。具体内容如下:第一部分:为实现外源性金属离子递送,我们制备了一种铜基复合纳米颗粒,通过递送外源性Cu~(2+)的方式,在化疗药物的协助下用于肿瘤细胞治疗。首先,以聚丙烯酸(Polyacrylic acid,PAA)为软模版制备出磷酸铜(Copper phosphate,Cu_3(PO_4)_2)纳米颗粒,在负载阿霉素(Doxorubicin,DOX)和表面修饰羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl chitosan,CMCS)后得到PAA-Cu_3(PO_4)_2-DOX-CMCS复合纳米颗粒。其中DOX的上载量和上载率分别为13.25%和51.37%。制备的复合纳米颗粒可以被肿瘤细胞有效摄取并降解释放出Cu~(2+)和DOX。Cu~(2+)通过打破细胞内氧化还原平衡,消耗谷胱甘肽(Glutathione,GSH)并产生ROS。GSH的消耗TB and HIV co-infection导致谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)失活,促使细胞内LPO的累积,诱导肿瘤细胞铁死亡。DOX在3 h开始富集于细胞核,诱导肿瘤细胞凋亡。根据细胞相对活力实验分析,PAA-Cu_3(PO_4)_2-DOX-CMCS复合纳米颗粒具有良好的肿瘤细胞杀伤性,说明递送外源性Cu~(2+)和DOX可以实现肿瘤细胞的高效治疗。第二部分:为实现外源性金属离子递送,我们进一步制备了一种新型铜基复合纳米片,通过递送外源性Cu~(2+)的方式,在生物酶的协助下实现肿瘤消融。首先,利用碳酸氢铵(Ammonium bicarbonate,NH_4HCO_3)受热易分解的特性,在40℃反应条件下制备出碱式碳酸铜(Basic cupric carbonate,Cu_2(OH)_2CO_3)纳米片。在负载葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GOx)和表面修饰聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl pyrrolidone,PVP)后得到Cu_2(OH)_2CO_3-PDA-GOx-PVP复合纳米片。其中GOx的上载量和上载率分别为28.11%和78.22%。复合纳米片在生理p H条件下具有良好的稳定性,在微酸性条件下具有良好的酸响应降解特性。制备的复合纳米片可以被肿瘤细胞有效摄取并降解释放出Cu~(2+)和GOx。Cu~(2+)通过细胞内氧化还原平衡,消耗GSH并产生ROS,同时GSH的消耗导致GPX4失活;GOx通过催化葡萄糖使肿瘤细胞处于饥饿状态,伴随生成的H_2O_2可以增强Cu~+介导的类芬顿反应,在Cu~(2+)和GOx的协同作用下,最终诱导肿瘤细胞凋亡和铁死亡。体内实验表明,Cu_2(OH)_2CO_3-PDA-GOx-PVP复合纳米片具有良好的生物安全性和抗肿瘤效果。此外,这种制备方式可灵活拓展,用于制备其它过渡金属元素(Fe,Mn,Co…)的单元或多元碳酸盐纳米材料,是一种绿色通用的合成方法,可以为碳酸盐纳米材料的高效制备提供重要的借鉴意义。第三部分:为实现内源性金属离子消耗,我们制备了一种新型“耗-堵”型复合纳米颗粒,通过耗竭细胞内不稳定铁池(The labile iron pool,LIP)诱导肿瘤细胞凋亡。首先,通过双乳液法将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(Poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)、乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)以及依布硒(Ebselen,EBS)合成为PLGA-EDTA-EBS复合纳米颗粒。该复合纳米颗粒可以被肿瘤细胞有效摄取,并酸响应释放出EDTA和EBS,EDTA可以通过与LIP中的Fe~(2+)形成螯合物EDTA-Fe,快速消耗肿瘤细胞内的铁元素;EBS通过与二价金属转运蛋白1相互作用使肿瘤细胞无法从胞外补充铁元素。通过这种策略造成的细胞内铁元素耗竭,一方面导致核糖核苷酸还原酶的活性降低,使DNA的合成受阻从而抑制肿瘤细胞增殖,直接表现为细胞周期处于G1期和G2/M期的细胞数量明显减少,处于S期的细胞数量明显增加,细胞周期相关蛋白(Cyclin A2、Cyclin E1以及CDK2)AZD2281下调;另一方面导致铁硫簇含量下调,使线粒体功能异常,直接表现为线粒体膜电位降低,细胞内ATP合成以及乳酸外排减少,最终诱导肿瘤细胞凋亡。体内实验表明,PLGA-EDTA-EBS复合纳米颗粒具有出色的生物安全性和体内抗肿瘤效果。这种基于肿瘤细胞内铁元素耗竭实现肿瘤消融的策略,可以为未来制备高效且安全的纳米材料提供重要的借鉴意义。

目的 探讨干扰素-γ(interferon-γ,IMulti-functional biomaterialsFN-γ)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)对巨噬细胞病毒(macrophage virus, CMV)阳性青光眼睫状体综合征(posner schlossman syndrome, PSS)患者更昔洛韦疗效的预测价值。方法 选取2019年3月～2021年3月本院收治的86例接受更昔洛韦治疗的CMV阳性PSS患者，治疗4周后，根据治疗效果分为有效组和无效组。比较2组患者入院时血清IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4,比较治疗有效患者与治疗无效患者临床特征，采用Logistic回归分析影响CMV阳Adavosertib体内实验剂量性PSS患者更昔洛韦治疗效果的因素，采用受试者工作特征曲线(receiver operatingcharacteristic curve, ROC曲线)分析入院时血清IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4预测CMV阳性PSS患者更昔洛韦治疗效果的价值。结果 86例接受更昔洛韦治疗的CMV阳性PSS患者，治疗4周后，共有64例治疗有效，22例治疗无效；有效组入院时血清IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4均高于无效组(P<0.05),IL-4水平低于无效组(P<0.05);有效组入院时角膜后沉着物、眼压与无效组比较，差异均有统计学意义(P<0.05);Logistic多因素回归分析显示角膜后沉着物、NVP-TNKS656价格血清IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4均是影响CMV阳性PSS患者更昔洛韦治疗效果的相关因素(P<0.05);ROC分析显示，血清IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4预测CMV阳性PSS患者更昔洛韦治疗效果的最佳截断点分别为3.06 pg/mL、38.05 pg/mL、8.43%,灵敏度分别为85.94%、78.12%、84.37%,特异度分别为68.18%、81.82%、90.91%,曲线下面积(area under the curve, AUC)分别为0.730、0.806、0.848,IFN-γ/IL-4预测价值最高。结论 接受更昔洛韦治疗的CMV阳性PSS患者中，治疗有效患者入院时血清IFN-γ/IL-4高于无效患者，且血清IFN-γ/IL-4是影响更昔洛韦治疗效果的相关因素，临床采用IFN-γ/IL-4预测CMV阳性PSS患者更昔洛韦治疗效果具有较高的价值。

目的:分析1.5T磁共振成像检查应用于膝关节退行性骨关节病患者中的临床价值。方法:回顾性分析2021年1月—2023年7月期间东莞市谢岗医院收治的80例膝关节退行性骨关节病患者资料,所有患者均行CT/DR和1.5T磁共振成像检查,CL 318952 NMR以关节镜手术结果为金标准,对比两种检查方式对不同病变的检出率。结果:1Sulfonamides antibiotics.5T磁共振成像和CT/DR检查在软组织肿胀、游离体、骨质增生和关节腔变窄检出率方面,差异无统计学意义(P> 0.05);1.5T磁共振成像检查方式对关节积液、韧带、软骨病变、半月板变性损伤、内膜增厚以及关节面不平方面selleck产品的检出率高于CT/DR检查,差异有统计学意义(P <0.05)。结论:临床在对膝关节退行性骨关节病患者的检查中,1.5T磁共振成像检查相比于CT/DR检查更有助于检查人员全面掌握患者膝关节病变情况,进而准确判断患者病情进展,提升诊断准确率和后续阶段临床治疗效果。

目的 研究基线全血细胞计数参数(白细胞计数、红细胞分布宽度、血小板参数)与尘肺患者肺动脉高压发病风险的关联。方法 本研究是一项回顾性队列研究，收集2012年1月至2021年11月四川省某职业病医院尘肺住院患者病Y-27632历资料，通过Cox比例风险回归分析探索白细胞计数、红细胞Vancomycin intermediate-resistance分布宽度、血小板参数与尘肺患者肺动脉高压发病风险的关联，其他全血细胞计数参数由于数据缺失未纳入分析。结果 共有896名尘肺患者被纳入研究，随访期间共有202名患者发生肺动脉高压。多因素Cox比例风险回归分析显示，基线时红细胞分布宽度(HR=1.53,95%CI:1.14～2.05),血小板计数(HR=1.48,95%CI:1.11～1.98)和血小板压积(HR=1.34,95%CI:1.00～1.80)高于中位数的尘肺患者发生肺动脉高压的风险更高。结论 基线较高的红细胞分布宽度、血小板计数和血小板压积与尘EPZ-6438半抑制浓度肺患者的肺动脉高压发病风险较高有关。

目的 研究炎性肠病（inflammatoryboweldisease,IBD）患者凝血相关指标的变化情况，并评估各指标对炎性肠病活动性的诊断价值。方法 选取2019年1月至2022年12月金华市中心医院收治的228例IBD患者作为IBD组，其中又分为溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）组患者118例，克罗恩病（Crohn’s disease,CD）组患者110例。将UC组分为缓解组（n=52）和活动组（n=66）,CD组分为缓解组（n=40）和活动组（n=70）。另选取100名健康成人作为对照组。比较各组的血浆凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thembryonic stem cell conditioned mediumromboplastin time,APTT）、凝血酶时间（thrombin time,TT）、纤维蛋白原（fibrinogen,FIB）、D-二聚体（D-dimer,D-D）、血小板（platelet,PLT）、平均血小板体积（mean platelet volume,MPV）等指标水平。采用受试者操作特征（receiver operator characteristic,ROC）曲线评估各参数对疾病活动性的研究价值。结果 UC组和CD组的PT、APTT、FIB、D-D、PLT均高于对照组，TT、MPV均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。CD组的PLT高于UC组，FIB、D-DCSF-1R抑制剂、MPV均低于UC组，差异均有统计学意义（P<0.05）,UC活动组的FIB、D-D、PLT均高于缓解组，MPV低于缓解组，差异均有统计学意义（P<0.05）。CD活动组的PT、FIB、D-D、PLT高于缓解组，凝血酶原活动度（prothrombinactivity,PTA）、MPV低于缓解组，差异均有统计学意义（P<0.05）。UC患者的ROC曲线分析中，FIB和D-D的曲线下面积较大，分别为0.837和0.859,FIB敏感度为70%，特异性为88%,D-D敏感度为86%，特异性为72%。CD患者的ROC曲线分析Docetaxel分子量中，PLT和MPV的曲线下面积较大，分别为0.845和0.802,PLT敏感度为76%，特异性为84%,MPV敏感度为70%，特异性为90%。结论 FIB、D-D是评估UC活动性较好的指标，PLT、MPV是评估CD疾病活动性较好的指标，可用于临床对IBD的评估。

慢性心力衰竭是多种病因导致的心脏疾病终末阶段，心肌细胞损伤是导致心功能恶化的关Serum-free media键。铁死亡以铁过载、脂质过氧化物等过度积累为特征，是一种铁依赖性的程序性死亡方式。研究表明，抑制铁死亡可以对心肌细胞产生保护作用。“亢害承制”理论是经后世医家演变用于阐释人体五行生克制化、病理失衡及指导用药的重要法则。人与天地相参，亦需依赖承制规律维持五脏调和、内腑通利的稳态。慢性心力衰竭铁死亡的发生机制高度契合“承者失制，亢者为害”的过程。心气亏虚、承制不及，无力维持心肌细胞氧化还原系统平衡，为铁死亡的始动因素。五脏受累，津血失布，痰浊、血瘀、水饮留滞经脉，表现为铁及脂质过氧化物蓄积，是铁死亡的加重因素。二者交互影响，反复叠加，呈螺旋式进展，加剧心力衰竭病情。基于铁死亡的中医病机，笔者试以“承而制之，平其所亢”为治疗PD-0332991生产商总则，提出慢性心力衰竭分期论治的总纲。PLX3397使用方法早期以“益气养，兼调五脏，承而制之”为主，中期以“活血化痰，祛邪化浊，平其所亢”为要，晚期以“温阳益气，活血利水，承制平亢”并重。遵守病机特点运用中药干预，可以降低铁蓄积，促进脂质过氧化物的清除，从而抑制铁死亡，改善心功能。

目的：旨Decitabine化学结构在分析Piezo1表达与肿瘤上皮间质转化（EMT）相关蛋白在卵巢癌患者组织中的表达情况和相关性以及研究Piezo1对卵巢癌细胞（SKOV3、A2780）EMT过程的影响。方法：通过生物信息学GSEA法分析Piezo1激活的卵巢癌相关信号通路。采用免疫组化、Western Blot检测正常卵巢组织和卵巢癌组织中Piezo1蛋白及EMT通路相关蛋白E-cadherin、N-cadherselleck HPLCin的表达情况，并分析Piezo1表达量与E-cadherin、N-cadherin表达的相关性、用Yoda1 10μmol/L处理卵巢癌细胞（SKOV3、A2780）2 d，根据转染慢病毒将卵巢癌细胞（SKOV3、A2780）分为sh-NC（转染sh-NC慢病毒）组、sh-Piezo1组（转染sh-Piezo1慢病毒），然后用Western Blot检测各组SKOV3、A2780细胞中E-cadherin、N-cadherin的表达情况。结果：Piezo1的蛋白表达水平在卵巢癌组织中明显高于正常卵巢组织（P<0.05），且通过生物信息学GSEA富集分析发现Piezo1在卵巢癌中显著激活EMT信号通路（P<0.01）,Western Blot及免疫组化结果表明E-cadherin的蛋白水平在卵巢癌组织中显著降低（P<0.05），而N-cadherin的表达水平显著升高（P<0.05）。相关性分析表明在卵巢癌组织中Piezo1蛋白表达水平与E-cadherin蛋白表达水平显著呈负相关（r=-0.731 7,P=0.001 5），而与N-cadherin呈正相关pre-deformed material（r=0.600 7,P=0.003）。Yoda1处理后的SKOV3、A2780细胞中，E-cadherin的表达水平降低（均P<0.05），而N-cadherin的表达水平显著升高（P<0.05,P<0.01）。敲低SKOV3、A2780细胞中的Piezo1后，E-cadherin的表达水平显著升高（P<0.01,P<0.001），而N-cadherin的表达水平降低（P<0.05,P<0.01）。结论：Piezo1的高表达可能与患者的不良预后相关，且可能通过促进上皮间质转化过程参与卵巢癌的发生发展。

【研究背景】脑胶质瘤是最常见的中枢神经系统恶性肿瘤,而胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)是其中恶性程度最高、侵袭性最强的一种弥散性肿瘤,平均每年发病人数在25万以上。目前针对GBM患者主要的治疗方式仍是手术切除辅以放化疗的综合治疗,但预后极差,患者的中位生存期<14.6个月,5年生存率只有5.6%。由于人体存在血脑屏障,化疗和免疫治疗在胶质瘤患者中的应用受到限制,对于患者生存期的改善十分有限。放疗在GBM的治疗中占有极其重要的地位,手术切除GBM后放疗可以杀伤残留肿瘤细胞,降低复发率;对于难以手术切除的GBM,也可以通过放疗抑制胶质瘤生长。但GBM对放射容易产生抗性是预后不良的主要原因,因此,寻找新的靶点来为胶质瘤患者放疗增敏以改善治疗效果、延长生存期成为了迫在眉睫的工作。【研究目的】利用CRISPR/Cas9文库筛选GBM放疗抵抗相关基因,系统探索该靶点介导放疗抵抗的功能与机制,并以该靶点为基础,探索基因编辑技术在GBM治疗中的新策略。【研究方法】1.运用全基因组CRISPR文库感染GBM细胞,构建原位GBM模型进行体内筛选,文库测序分析GBM放疗抵抗靶点;2.构建放疗抵抗GBM细胞,RNA测序与文库结果取交集,通过数据分析和实验初步确定GSS是放疗抵抗关键基因;3.构建稳定敲除GSS细胞株和放疗抵抗PDX模型,通过体内外实验,如免疫荧光、Western Blot、CCK-8、平板克隆实验等确定GSS表达水平与放疗敏感性的联系;4.通过分析公共数据库资料和GBM组织芯片,探究GSS与胶质瘤的临床相关性;5.利用免疫荧光和RNA-seq实验分析GSS介导的放疗增敏激活了细胞铁死亡通路;6.数据库分析、流式细胞仪检测脂源性ROS、透射电镜图像、CCK-8实验等方法验证放射与GBM细胞铁死亡之间联系;7.通过免疫组化、WB、代谢组学分析等实验系统阐明GSS在胶质瘤放疗过程中发挥作用机制;8.将Cas9/sgGSS复合物装载入靶向胶质瘤的细胞外囊泡,并在原位胶质瘤模型中验证效果,探索其对放疗敏感性的影响。【研究结果】1.成功进行了体内全基因组CRISPR文库的筛选,数据分析得到放疗敏感基因;2.成功构建了放疗抵抗细胞株,RNA-seq与文库结果取交集得到目的靶点GSS;3.成功构建了稳定敲除GSS细胞株和放疗抵抗PDX模型,免疫荧光、WB等实验证明放疗抵抗模型中GSS蛋白高表达,CCK-8、细胞克隆形成实验等证明GSS敲除增强了放疗效果;4.数据库资料和组织芯片显示,GSS的高表达导致了不良预后;5.根据免疫荧光和RNA-seq结果得出,GSS介导的放疗增敏与DNA损伤修复无关,与细胞铁死亡通路相关;6.放射后,流式细胞仪检测显示脂源性ROS上升,透射电镜、CCK-8实验、数据库分析得出放射诱导GBM细胞铁死亡;7.放疗过程中,敲除GSS抑制了GSH合成,一方面降低了GPX4活性,导致脂质过氧化物累积;另一方面加剧了Fe~(2+)的积累,形DNA/RNA Synthesis抑制剂成了不稳定铁池,引起芬顿反应,产生过量的ROS,加剧铁死亡发生;8.构建Ang/TAT-sgGSS-EV,并在LN229原位模型和GSC原位模型中验证可以有效干扰GSS表达,与放射联合处理显著增强了放疗敏感性,证明在体基因编辑治疗策略成功。【结论】1.通过CRISPR/Cas9文库体内压力筛选出放疗联合致死基因集,联合放疗抵抗细胞株的转录组测序结果,发现了GSS在胶质瘤放疗抵抗过程中发挥了关键作用。2.通过在线数据库资料、组织芯片和临床样本系统证实GSS表达水平与胶质瘤患者分级分期及不良预后密切相关,级别越高的胶质瘤,GSS表达水平越高,预后越差;3.通过细胞学实验Elexacaftor molecular weight、分子生物学实验和数据库资料分析,GSS介导的放疗抵抗机制与铁死亡相关。GSS通过合成还原性谷胱甘肽增强GPX4活性,从而还原脂质过氧化物,减少了亚铁离子的积累,抑制芬顿反应,从而抑制铁死亡。4.在LN229原位胶质瘤模型和胶质瘤干细胞原位模型中,Ang/MSC necrobiologyTAT-sgGSS-EV具有较高的靶向效率和较强的基因编辑能力,能够实现对GSS的体内靶向干预,与放疗联用可显著抑制胶质瘤发展,具有潜在的临床应用前景。