Achr receptor

目的 研究克霉唑联合维selleck SCH727965生素D治疗孕早期念珠菌性阴道炎的疗效及对妊娠结局的影响。方法 选取2017年5月～2020年5月本院收治孕早期念珠菌性阴道炎患者100例。按治疗方式的不同分为对照组（n=50）和观察组（n=50）。对照组给予克霉唑阴道片治疗,实验组在对照组的基础上,同时每天口服维生素D胶囊。比较selleckchem CH-223191两组疗效。结果 观察组患者总有效率显著高于对照组（P <0.05）。治疗前两组CRP、TNF-α、IL-6、25-羟维生素D水平比较,P>0.05,与治疗前相比,治疗后两组CRP、TNF-α和IL-6水平均显著降低（P <0.05）,25-羟维生素D水平显著上升（P<0Biotinidase defect.05）,观察组CRP、TNF-α和IL～6水平显著低于对照组（P <0.05）,观察组25-羟维生素D水平显著高于对照组（P <0.05）。结论 克霉唑联合维生素D治疗孕早期念珠菌性阴道炎的疗效较为显著,可降低炎症反应及妊娠不良结局发生率。

光学成像,如近红外荧光成像,能够以高灵敏度和特异性实现疾病相关生物标志物的非侵入性和实时可视化。然而,近红外荧光成像的穿透深度通常有限,使得光学成像只能观察到浅表的疾病相关分子的变化。尽管荧光成像的穿透深度有限,但和光声技术结合,可以解决穿透深度有限的问题。因此,具有荧光和光声效应互补优势的近红外荧光/光声双模成像有望改善活体疾病相关生物标志物的成像输出。此外,组织自身荧光、光漂白和探针浓度的变化会引起一定的假信号,这使得仅在单通道开启近红外荧光或光声成像不可靠。比率型的检测通过引入参考信号代替绝对的信号输出,极大地提高了信号的稳定性和准确性,对活性分子的准确定量检测具有很大的潜力。因此,近红外荧光/光声双比率分子探针是活体定量分析检测的强有力分子工具。然而,由于以下原因,目前常用的近红外染料还远远不能成为开发高性能近红外荧光/光声双比率型分子探针的理想支架:(1)普通荧光/光声性能易调控的近红外染料,如含氧半花菁,其吸收和发射波长不够长,在构vitamin biosynthesis建近红外双比率探针时无法与目前商业化的活体荧光成像和光声成像仪器相匹配;(2)很多近红外染料是高荧光发射分子,然而其荧光产生途径(辐射跃迁)和光声产生途径(非辐射跃迁)总是相互竞争的,这将不可避免地影响荧光信号与光声信号的输出,所以很难在单个近红外染料母体中平衡荧光与光声的能量分布。本文针对以上近红外荧光/光声双比率分子探针所面临的棘手问题,通过平衡辐射跃迁与非辐射跃迁的能量分布以及增加染料分子的吸收和发射波长,构筑了一系列双比率近红外荧光/光声染料支架,并设计了近红外荧光/光声双比率分子探针用于肿瘤乏氧的定量检测、肿瘤诊疗与定量预测研究。主要内容如下:(1)针对单个近红外染料所吸收的激发能是固定的,其荧光产生途径(辐射跃迁)和光声产生途径(非辐射跃迁)总是相互竞争的问题,本工作提出能量平衡策略,在经典含氧半花菁染料分子结构中,通过硫取代氧原子的简单设计,巧妙地调控了荧光辐射跃迁和光声非辐射跃迁之间的能量平衡,构建双比率型近红外荧光/光声染料支架。由于硫原子取代氧原子,使得该类半花菁染料,展现出双比率型近红外荧光/光声性能;与经典的含GDC-0973分子量氧半花菁染料相比,其吸收与发射波长明显红移,且荧光量子产率明显下降和光声性能明显上升,这一升一降显示探针分子中荧光的辐射跃迁与光声的非辐射跃迁之间达到能量平衡。(2)基于第二章优化此网站的新型含硫半花菁支架,本章设计合成了近红外荧光/光声双比率型硝基还原酶探针AS?Cy?NO_2,这使得肿瘤乏氧在体内的深度定量可视化成为可能。探针AS?Cy?NO_2,由一个新的近红外荧光/光声硫杂半花菁(AS?Cy?1)和一个4?硝基苯部分组成,当被与肿瘤乏氧相关的生物标志物(硝基还原酶)激活时,表现出10倍的近红外荧光信号增强(I_(773)/I_(733))和2.4倍的光声信号增强(PA_(730)/PA_(670))。体内实验结果表明,通过比率光声的3D最大强度投影光声图像对异种移植乳腺癌模型中精确区分实体瘤中高度异质性的氧分布,展示出双比率近红外荧光/光声在活体成像定量分析方面的可行性。(3)从单分子诊疗一体化探针出发,针对单个近红外染料分子的高效光热治疗功能与荧光成像产生路径相冲突的问题,本章在近红外荧光/光声双比率染料骨架中引入对光吸收增强的分子转子用于同时增强其光热、光声性能和保留荧光性能,设计合成了一系列近红外荧光/光声双比率诊疗一体化分子染料。实验结果证明分子转子的引入能有效提高半花菁染料的摩尔消光系数(PBS中ε_(max)=6.7×10~4,提高了1.9倍相比于对照PBS中ε_(max)=3.5×10~4)。通过测试这些染料的光热与荧光性能,结果表明,相比于对照染料,修饰改造后的染料如AF?1F的光热转化效率(photothermal conversion efficiency,PCE)提高了1.4倍(63%,对照染料BS?Cy?1,45%);荧光量子产率不变(PBS中AF?1F,Φ=0.019;BS?Cy?1,Φ=0.020)。幸运的是,p H诱导的吸收光谱和发射光谱的最大吸收和发射波长都发生了相应的红移,这将为实现荧光/光声双比率成像提供良好的前提条件。设计合成的双比率单分子诊疗探针在肿瘤精准治疗方面具有潜在的应用前景。(4)基于设计合成的双比率单分子诊疗探针,本章报道了首个特异性激活其比率荧光(FL_(850)/FL_(750))、比率光声(PA_(770)/PA_(670))和光热信号的单分子诊疗探针(AF?1F?NO_2),响应肿瘤过表达酶(硝基还原酶)启动光热治疗并定量评估光热治疗在体内的疗效。利用FL_(850)/FL_(750)和PA_(770)/PA_(670)对硝基还原酶反应的不同开关,AF?1F?NO_2可以实现体内硝基还原酶的非侵入性和定量双模成像,确认乏氧诱导光热治疗后4T1肿瘤中硝基还原酶水平的降低。特别是探针的三维(3D)图像可以精确地验证光热治疗后4T1荷瘤小鼠中较小的非均匀性氧分布。通过协同调控平衡策略构筑双比率型诊疗分子探针为精准医学其他治疗方式的体内诊断、治疗和疗效定量预测提供了新的思路。

目的:本研究旨在探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins,GSP)的不同干预时长对孤独症(autism spectrum disorder,ASD)模型鼠的行为以及海马中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-protein kinase,PI3K)、蛋白激GSI-IX核磁酶B(protein kinase B,PKB或AKT)及其磷酸化水平的影响,探究葡萄籽原花青素改善孤独症模型鼠行为的最佳干预时长及潜在的药物作用机制,从而为葡萄籽原花青素治疗ASD提供新思路和新方向。方法:本研究选取30只清洁级Wistar大鼠(其中雄性大鼠10只,雌性大鼠20只),在参考了Schneider孤独症模型鼠的造模方法之后,以雌雄2:1的比例进行合笼,次日清晨以查到阴栓记为妊娠第1天(E1),随后分笼单独饲养。对怀孕12.5天的Wistar大鼠腹腔注射丙戊酸钠(valproic acid,VPA),剂量为600mg/kg(依250g/L溶于生理盐水中),从而来进行孤独症模型鼠的制备,正常组腹腔注射等量生理盐水。通过记录仔鼠的发育学与行为学来对大鼠进行鉴定。采用随机数字表法,将14日龄仔鼠模型组仔鼠随机分成葡萄籽原花青素干预组GSP-I组、GSP-II组以及孤独症模型对照组VPA-I组、VPA-II组,将正常组大鼠随机分成NS-I组、NS-II组。GSP-I组与GSP-II组从P14开始每日灌胃葡萄籽原花青素100 mg/kg(葡萄籽原花青素用生理盐水配成10mg/m L的溶液),分别持续14天和21天;分别对模型对照组(VPA-I组、VPA-II组)和正常组(NS-I组、NS-II组)每日灌胃等量生理盐水,每组内两小组分别持续14天和21天。各组所有仔鼠均在相同环境下给予充足的饲料和水进行饲养,观察并记录生长发育及行为学数据。于P28、P35进行发育与行为学检测,采用HE染色检测海马神经元形态学变化,应用免疫荧光进行PI3K、AKT蛋白定位和定量的检测,采用蛋白质印迹法WB来检测海马PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达情况。结果:1.孤独症模型组孕鼠产LY2835219浓度仔数量减少,且存在流产现象;2.模型组与正常组相比,各日龄体重均较低;睁眼时间较晚,出现延迟的情况,并且完成方向趋向性测试所需的时间较长。模型组与正常组相比,出现重复刻板行为、社会交流、社会交往障碍以及学习记忆障碍,逃避潜伏期增加,但穿越平台次数无明显差异。与正常组相比,VPA-I组仔鼠海马组织CA3区神经元细胞肿胀,出现空泡情况,杂乱无序,排列疏松;VPA-II组散在个别海马神经元细胞肿胀,排列无序。对于PI3K的平均荧光强度,VPA-I组略高于NS-I组,VPA-II组略高于NS-II组,对于AKT的平均荧光强度,VPA-I组与NS-I组相似,VPA-II组略低于NS-II组,但均无Medicopsis romeroi明显差异。与正常组相比,VPA-I组PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT较正常组表达增高,除AKT蛋白表达无明显差异外,其余均存在统计学差异;VPA-II组PI3K、AKT较正常组表达降低,而pPI3K和p-AKT较正常组表达升高,除p-AKT蛋白表达无统计学差异外,其余均存在统计学差异。3.葡萄籽原花青素干预后,与VPA-I组相比,GSP-I组体重增加、重复刻板行为的累计时间缩短,嗅闻社会性液体气味时间增加,逃避潜伏期降低,然而尽管脑重,穿越平台次数,在目标象限停留的时间有所增加,但均无统计学意义;与VPA-II组相比,GSP-II组体重、脑重增加,重复刻板行为的累计时间缩短,嗅闻社会性液体气味时间增加,第1、2天的逃避潜伏期降低,但第3、4天逃避潜伏期均无明显差异,此外,目标象限停留时间增加,穿越平台次数有所增加。4.葡萄籽原花青素干预后,GSPI组海马组织CA3区神经元较VPA-I组细胞间隙减小,排列相对整齐,GSP-II组海马组织CA3区神经元较VPA-II组则无明显区别。在免疫荧光检测中,GSP-I组PI3K的平均荧光强度较VPA-I组略低,GSP-I组AKT的平均荧光强度较VPA-I组高,GSPII组PI3K与AKT的平均荧光强度较VPA-II组略高,但以上均无明显区别。5.葡萄籽原花青素干预后,28日龄时,GSP-I组PI3K、AKT、p-PI3K较VPA-I组降低,GSPI组p-AKT较VPA-I组升高,然而GSP-I组AKT较VPA-I组降低但无统计学意义;35日龄时,GSP-II组PI3K较VPA-II组降低,而GSP-II组AKT、p-PI3K、p-AKT较VPA-II组升高,仅PI3K和p-PI3K存在统计学意义。结论:1.葡萄籽原花青素干预能够改善孤独症模型鼠的重复刻板行为以及学习记忆能力;2.葡萄籽原花青素干预后,孤独症模型鼠海马PI3K蛋白表达降低;3.不同葡萄籽原花青素干预时间对孤独症模型鼠的行为和海马PI3K/AKT的影响也不同,28日龄与35日龄均存在一定的改善效果,本研究中,28日龄对行为以及PI3K的干预效果相对较好。

目的：点击此处探究广西红水河流域长寿人群Smyca基因多态性的分布情况及其对衰老相关代谢指标的影响。方法：使用PCRSanger测序法对广西红水河流域长寿老人95例（长寿组，年龄≥90岁）及当地普通健康老人94例（对照组，年龄60～75岁）的Smyca基因进行多态性检测，使用Haploview分析单倍型的连锁不平衡（LD），并采用Pearson相关性分析方法来分析单倍体携带情况及长寿风险评估。结果：在Smyca基因中共检测出9个多态，其中长寿组rs2594713 AA基因型及等位基因A的频率显著低于对照组，CC基因型及等位基因C的频率则高于对照组（均P<0.05），其他基因型与等位基因频率在两组间的分布无明显差异（P>0.05）。3BVS bioresorbable vascular scaffold(s)个单核苷酸多态性（SNPs寻找更多）;rs2594713、rs7255672和rs62122064位点之间存在较高的LD；长寿组ATA单倍型频率低于对照组（P<0.05）；在长寿人群中，rs2594713、rs7255672和rs62122064位点的野生纯合型携带者甘油三酯（TG）及载脂蛋白B(ApoB)水平均低于突变型携带者（均P<0.05），其他代谢指标在野生纯合型及突变型之间无显著差异（P>0.05）。结论：Smyca某些多态位点的基因型与代谢相关指标存在明显关联，并且Smyca基因的3个SNPs位点之间存在着有遗传意义的单倍型和LD关系，并且单倍型ATA可能会降低长寿的概率。

鲷鱼(Pagrosomus major)作为名贵食用鱼类,素有“鱼中之王”的美誉,近年来消费者健康意识及消费水平持续提高,促使我国鲷鱼消费市场快速增长,其产量以近20%的年增速上升,然而其易腐易损问题极大地降低了其食用品质及经济价值。因此,针对性地开发高效的保鲜技术、减少鲷鱼腐败损失尤为重要。优势腐败菌(Specific spoilage organism,SSO)是导致水产品腐败的主因。而SSO自身的群体感应(Quorum sensing,QS)系统能够通过感知其分泌的N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactone,AHLs)等信号分子来调控下游关键致腐因子的表达,从而加速水产品腐败。因此通过阻断QS系统来抑制腐败已成为水产品保鲜的新策略。其中群体感应淬灭(Quorum quenching,QQ)酶能够在不进入细菌胞内的前提下高效降解AHLs,因此其不易引发耐药性,被认为是一种极具潜力的新型生物保鲜剂资源。但目前的QQ酶大多存在底物适应性较差的突出问题,且针对水产品SSO筛选的QQ酶鲜见报道。鉴于此,本研究以鲷鱼为对象,针对性地挖掘了对其SSO中QS系统具有淬灭作用的QQ酶,进一步对QQ酶进行体外表达,探究了其酶学性质,并针对筛选得到的QQ酶底物适应性差的突出问题,利用计算机辅助技术对QQ酶进行了理性设计改造,探究了突变酶的腐败抑制效果及作用机制;针对酶制剂环境敏感性强的应用问题,制备了负载突变酶的p H响应缓释型多糖基水凝胶应用于鲷鱼的保鲜,为创新水产品保鲜策略,促进QQ酶在鲷鱼保鲜中的应用提供新的思路。1.基于鲷鱼腐败抑制的QQ酶的筛选及其生物信息学分析。探究了鲷鱼4℃贮藏过程中的菌相变化,其中肠杆菌目(Enterobacteriales)及气单胞菌目(Aeromonadales)分别为鲷鱼贮藏过程中的优势菌目,其中Aeromonadales在贮藏第10 d占比超过50%,达到绝对优势地位,而Enterobacteriales在贮藏第6 d后占比逐渐下降。进一步明确了鲷鱼SSO为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)BY-8,其主要分泌C_6-HSL、C_8-HSL、C_(10)-HSL、C_(12)-HSL、C_(14)-HSL的中长链AHLs。此外,从56株来源于水产环境中的耐冷性菌株中筛选得到对A.veronii BY-8中QS系统具有显著淬灭效果的QQ菌株荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)PF08,并在其染色体基因组中编号为PF8＿GM002571的编码区(Coding sequence,CDS)中发掘得到一种新型QQ酶PF2571。经生信分析表明其为一种潜在的AHLs酰化酶。2.PF2571酶的体外高效表达纯化及酶学性质研究。对PF2571的密码子进行了优化,使其在Escherichia coli系统下的密码子利用频率高于40,CAI值提升至0.8。进一步构建了基于内源信号肽、外源信号肽以及体外成熟策略的p ET28a-PF2571、p ET32a-PF2571以及p ETduet-PF2571三种表达载体,电泳结果表明在理论分子量区域均出现单一明亮条带,其中p ETduet-PF2571载体在三种表达策略中的单位培养液活性最高,达到0.079 U/m L。对PF2571酶的催化模式进行分析,结果表明PF2571酶能够靶向催化C_(10)-HSL酰基侧链处的酰胺键,Pathologic response产生标志性产物正葵酸,证明其为AHLs酰化酶。酶学性质分析结果表明PF2571酶的最适底物为C_(10)-HSL,最适反应温度为30℃,最适p H为8.0,且PF2571酶具有一定的低温耐受性,5℃下的相对活性能够保持在最适温度下的67.56%,4℃贮藏96 h后其相对活性维持在80%以上。但PF2571酶未检测到C_6-HSL降解活性,对C_8-HSL的催化活性仅为最适底物的20.27%,证明其具有底物偏好性。3.基于序列保守性的PF2571酶活性口袋区域的理性设计。为提高PF2571酶的底物适应性,采用Modeller、Alpha Fold 2、I-TASSER和tr Rosetta四种方法构建了PF2571酶的蛋白模型。拉式图及QMEAN打分结果表明Modeller所构建的模型质量最高。对PF2571酶模型底物结合口袋中24个关键氨基酸进行虚拟饱和突变,结果表明His194>Tyr等12个突变与不同AHLs底物结合的突变能降低。对这些突变进行定点诱变及筛选,结果表明PF2571~(L147Q),PF2571~(N228R),PF2571~(H194Y)及PF2571~(L221R)等对不同AHLs的降解活性增加,进一步对有益突变进行组合突变,结果表明双突变PF2571~(Navitoclax分子量H194Y,L221R)(PF2571~(2MT))对C_6-HSL,C_8-HSL,C_(10)-HSL,C_(12)-HSL及C_(14)-HSL的相对淬灭活性分别为77.62%,76.22%,92.94%,93.25%以及98.52%,与野生型PF2571酶相比首次表现出C_6-HSL降解活性,且对C_8-HSL的降解活性提高了5.7倍。构象分析表明Leu221位及His194位的突变在PF2571蛋白底物口袋底部及头部形成了空间位阻,使活性位点Ser172(Oγ)与C_6-HSL的催化靶点羰基碳原子之间的距离从7.48(?)缩短到2.89(?),与C_8-HSL的相关距离从7.04(?)缩短至2.65(?),导致AHLs配体的对接构象更有利于催化反应的进行。4.基于进化偶联位点的PF2571酶远端区域的理性设计。为进一步提高PF2571酶的底物适应性,利用进化偶联位点分析确定其潜在关键远端氨基酸,结果表明在PF2571序列中预测得到34对ECs打分>1的残基对,根据其空间分布分析获得Agr14/Gln40,Asn84/Glu87等6组潜在关键远端残基。对上述远端残基进行虚拟饱和突变,结果表明Arg14>Lys:Gln40>Asn,Gln116>Cys:Pro134>Met等13个突变与不同AHLs底物结合的突变能进一步降低。对这些突变进行定点诱变及筛选,证明PF2571~(N84T,E87F,H194Y,L221R)(PF2571~(4MT))与野生型酶相比催化C_8-HSL的k_(cat)/K_m值提高了50倍以上,催化长链AHLs的k_(cat)/K_m值提高了1.7倍以上。进一步对不同突变酶进行圆二色谱及分子动力学模拟分析,LY2835219临床试验结果表明Asn84,Glu87,His194及Leu221位突变使蛋白的螺旋比例降低,折叠比例增加,并使PF2571酶与短链AHLs结合时的RMSD值及Rg值增加,增强了蛋白复合物的柔性,提高了残基与AHLs之间的氢键占有率,并显著降低了突变酶与不同AHLs之间的结合自由能及活性中心与相关催化位点之间的平均距离,从而提高了PF2571~(4MT)对不同AHLs的催化效率。5.PF2571突变酶对A.veronii BY-8致腐能力的抑制作用及机制。对突变酶PF2571~(4MT)的生物安全性及其对A.veronii BY-8致腐能力的抑制作用进行了验证,结果表明PF2571~(4MT)酶在1000μg/m L的浓度内对Caco-2细胞的凋亡率无显著影响,具有良好的生物相容性。且其在40μg/m L的浓度下对A.veronii BY-8的生物被膜形成,运动性,碱性蛋白酶、中性蛋白酶、脂肪酶、几丁质酶等胞外酶活性以及藻酸盐与胞外多糖等胞外聚合物的分泌具有显著的抑制作用,抑制率在50%以上。同时,鲷鱼保鲜实验结果表明,PF2571~(4MT)酶显著降低了接种有A.veronii BY-8的鱼片4℃贮藏过程中的挥发性盐基氮值,硫代巴比妥酸值等新鲜度指标及腐败相关酶的活性,延缓了其肌原纤维蛋白的结构损伤,改善了鱼片表面色泽及质构特性,有效提高了鲷鱼的贮藏鲜度及品质。进一步对A.veronii BY-8进行转录组学及荧光定量PCR分析,结果表明PF2571~(4MT)酶处理共造成细菌中420个基因转录水平发生上调,510个基因转录水平发生下调,通过对差异基因进行功能及通路注释,表明PF2571~(4MT)酶能够通过降解AHLs以降低Lux R型AHLs受体蛋白及QS调控因子Rpo S的表达,进而抑制QS系统调控的下游胞外酶等致腐因子以及细菌运动性及生物膜调控蛋白,并通过降低ABC转运系统及产胺关键蛋白的表达抑制致腐因子及胺类物质的分泌,以此降低A.veronii BY-8的致腐能力。6.负载PF2571突变酶的罗望子多糖/聚乙烯醇多功能水凝胶的制备及对鲷鱼的保鲜应用。为了进一步提高理性设计获得的PF2571~(4MT)酶的应用潜力,以苹果酸作为交联剂,罗望子多糖(Tamarind polysaccharide,TPS)和聚乙烯醇(Polyvinyl alcohol,PVA)作为基材制备了负载有PF2571~(4MT)的p H响应缓释型多糖基水凝胶。对制备的水凝胶进行表征,并测定了其对鲷鱼4℃贮藏过程中的保鲜效果。理化结构分析表明水凝胶网络通过苹果酸的羧基和聚合物的羟基形成的酯键及分子间氢键建立,且具有典型的三维网络结构,而当TPS与PVA的质量比为2:1时所制备的水凝胶(TPQH-3)具有更好的机械及流变学性能。水凝胶的性能表征结果表明TPQH-3具有快速自愈能力、良好的组织贴合性、剥离特性、拉伸性能、缓释性能以及冷冻耐受性,能够满足水产品冷藏环境需求。此外,TPQH-3水凝胶在p H为6.0和8.0时PF2571~(4MT)释放率分别达到91.93%和89.00%,而在中性环境中释放率仅为63.74%,具有一定的p H响应性。同时,TPQH-3水凝胶有效抑制了A.veronii BY-8的生物被膜及胞外蛋白酶活性,从而提高了其所包裹的鲷鱼块的新鲜度,并延缓了鲷鱼肌肉组织的品质劣变,且其保鲜效果优于游离PF2571~(4MT)酶。

慢性阻塞性肺疾病(COPD)为多发的、可预防与治疗的慢性气道病症,以持续存在的气流受限与相应的呼吸系统表现为主要的病理学特征。COPD多发生于老年群体,而近年,伴随人口老龄化进展的加速,促使该病的发生率不断增长。肺心病是由于支气管、肺、胸廓或者肺部血管发Fer-1说明书生病变导致肺血管阻力上升,造成肺动脉压力上涨,最终引起右心室结构和Medical microbiology(或)功能改变的病症。COPD迁延难愈,MK-4827临床试验是引起肺心病的重要原因。高原地区是一个低氧、寒冷、干燥的特殊环境,且空气稀薄,大气压与氧分压降低,在多种因素的共同影响下,使得高原地区的老年COPD合并肺心病患者的病情较平原地区患者更为复杂,病死率更高。为此,本文从高原地区老年COPD合并肺心病患者的临床特征、吸氧治疗等层面进行综述,探寻此类患者的个体化诊疗措施。

为探究超声波辅助定量卤制对茶香味配方的牛肉品质的影响，本文设置不同超声功率（0、600、800、1000、1200 PCI-32765W）辅助定量煮制方法卤制茶香味牛肉，测定了牛肉的出品率、肉色、质构、电子鼻、游离氨基酸以及呈味核苷酸等。结果表明，超声波辅助定量卤制可以提高茶香味卤制牛肉的出品率，其中800 w的超声功率处理的牛肉出Community paramedicine品率达到80.77%，且改善了卤制牛肉的质构特性，对卤牛肉的a~(*)值和b~(*)值无影响（P>0.05）。当超声功率大于800 W时会www.selleck.cn/products/elexacaftor使卤牛肉的a~(*)值和L~(*)值显著减少，b~(*)值显著增加（P<0.05）。此外，电子鼻的主成分分析表明超声处理和未经超声处理之间的香气风味存在差异(P<0.05)，不同功率处理组的茶香味卤煮牛肉风味也各有特色。不同超声功率处理卤牛肉中甘氨酸含量随超声功率的增加呈增加趋势，精氨酸随超声功率的增加呈先上升后下降的趋势，且在1000 W时达到最大值。超声处理对茶香味卤煮牛肉的呈味核苷酸含量存在显著影响（P<0.05），尤其是肌苷含量在800 W时达到了最大值。另外，800 W超声处理组的感官评价得分也高于其他组别。综上，在超声波功率800 W时，定量卤制的茶香味卤牛肉具有最好的品质。

目的:艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染引起的一种广泛传播且无法治愈的疾病,可逐渐破坏宿主的免疫系统。随着新型抗逆转录病毒药物的不断开发,抗逆转录病毒疗法(ART)可将艾滋病患者血浆病毒载量抑制到无法检测的水平,极大地降低了艾滋病相关的发病率和死亡率。但是,由于病毒储存库的存在,中Ipatasertib供应商断抗逆转录病毒治疗可导致病毒载量迅速反弹,因此患者需要终生服药。同时,这将会引起耐药性的问题。ART的主要靶点是HIV-1编码蛋白中的三种酶:逆转录酶、整合酶和蛋白酶,目前流行的耐药毒株上的耐药位点也主要位于这三种酶的基因编码区。基于此,寻找具有治疗STM2457抑制剂潜力的新靶标,特别是那些HIV-1特有,且在其生命周期中起到重要作用的酶或蛋白,针对其研发与现有药物具有不同机制的新型药物来丰富临床治疗手段,是解决目前耐药问题的最佳途径。HIV-1 Tat(transactivator of transcription)蛋白是逆转录病毒特有,由病毒基因编码的HIV-1转录调控蛋白,一般由86-102个氨基酸组成,可反式激活HIV-1的5’长末端重复序列(LTR)上的转录启动子,开启病毒转录,对病毒的感染、复制和再cognitive biomarkers激活起到至关重要的作用。此外,Tat蛋白在病毒感染细胞后最先被合成。即使在未感染细胞中,Tat蛋白也可以通过旁分泌的方式反式激活基因,导致HIV-1感染,而阻断Tat蛋白的功能,就能在极大程度上抑制HIV-1的复制,同时因其只激活病毒特有的转录启动子,对宿主细胞的影响很小。因此,寻找一种新型的Tat蛋白抑制剂具有重要的学术价值和潜在的临床意义。本研究试图从化合物库中筛选出可以特异性抑制Tat蛋白的化合物,进而抑制HIV-1复制,为艾滋病的治疗和预防提供新思路。方法:首先,本研究利用稳定表达的B亚型和CRF01＿AE重组型Tat蛋白的单克隆细胞株建立靶向Tat蛋白的HIV转录调控因子高通量筛选平台,并对其进行稳定性验证。利用该平台,从包含4208个小分子化合物的多样性母核库中筛选出对B亚型和CRF01＿AE重组型的Tat-LTR有调控作用的小分子化合物,通过细胞ATP活性检测实验验证筛选出的调控因子备选物的细胞毒性。其次,使用HIV-1 B亚型毒株NL4-3和CRF01＿AE重组型毒株GX002体外感染MT2细胞,将筛选出的调控因子备选物作用于体外病毒培养体系,通过ELISA和q RT-PCR检测病毒培养上清液中的P24含量和病毒载量,验证WAY-297131和WAY-235035是否可以抑制Tat介导的HIV-1复制。并将不同浓度的化合物作用于染毒细胞,于病毒感染48h后将培养上清液转入稳定转染有LTR-荧光素酶报告基因的TZM-BL细胞,以荧光值为指标绘制化合物对病毒抑制效果的剂量反应曲线,并计算药物对病毒50%抑制活性(IC_(50))与治疗指数(TI=TC_(50)/EC_(50)),以进一步检测调控因子备选物的抗病毒效果。最后,针对筛选出的备选物,我们还通过免疫印迹实验、分子对接、生物膜干涉技术、蛋白酶和溶酶体抑制剂抑制效果检测实验等方法,深入探究调控因子备选物抑制Tat介导的HIV-1转录激活的作用机制。结果:本研究通过高通量筛选平台,对小分子化合物精选母核库进行筛选工作,我们从4208个化合物中筛选到了两种小分子化合物:WAY-297131和WAY-235035可有效抑制HIV-1复制。具体结果如下:1.WAY-297131和WAY-235035以剂量依赖性的方式抑制B亚型和CRF01＿AE重组型Tat蛋白的功能,但它们对B亚型和CRF01＿AE重组型LTR无抑制作用,且在实验浓度条件下不具备细胞毒性。2.体外病毒感染实验显示,WAY-297131和WAY-235035以剂量依赖性的方式抑制Tat介导的HIV-1 B亚型毒株NL4-3和CRF01＿AE重组型毒株GX002的复制。WAY-297131对NL4-3和GX002的IC_(50)分别为0.0799μM和0.0099μM;WAY-235035对NL4-3和GX002的IC_(50)分别为6.573μM和0.0082μM。3.分子对接分析显示WAY-297131和WAY-235035与B亚型和CRF01＿AE重组型Tat蛋白具有明确的结合位点及较低的结合能,说明它们极有可能具有较高的结合能力。4.亲和力实验表明WAY-297131和WAY-235035均可结合Tat蛋白,通过降低Tat蛋白与LTR的亲和力,抑制HIV-1复制。5.蛋白酶体和溶酶体抑制剂抑制效果实验表明WAY-297131和WAY-235035还可通过蛋白酶体途径促进B亚型和CRF01＿AE重组型Tat蛋白的降解,这可能也是其抑制HIV-1复制的机制之一。结论:本研究筛选出两个抗HIV-1病毒小分子化合物WAY-297131和WAY-235035。它们可直接作用于HIV-1 Tat蛋白,降低其与LTR的亲和力,同时通过蛋白酶体途径促进Tat蛋白的降解,以此来抑制HIV-1的复制,且体外实验显示其IC_(50)较低,已接近FDA批准的抗HIV药物的IC_(50),是很有前景的抗HIV-1感染的候选药物。

自然界以精妙的自组装过程将简单的生物小分子构筑成具有复杂结构的生物功能体系。受生物组装体Ipatasertib体内的启发,生物小分子自组装为构建功能材料提供了新的策略,特别是应用于肿瘤治疗的纳米材料。肿瘤治疗仍然是当今世界所面临的重大难题之一,鉴于传统的化疗毒副作用大、易出现多药耐药性等劣势,化学动力学疗法以及光热免疫疗法等新兴手段因靶向性高、毒副作用小、无多药耐药性等优势在精准抗癌领域备受关注。然而,这些治疗手段的核心因素如催化剂以及光敏剂等的缺陷限制了其进一步的临床应用和发展。例如,化学动力学疗法中传统的无机催化剂生物安全性低,肿瘤特异性响应方式单一;光热治疗中光热剂水溶性差,血液半衰期短且在生物透明窗口(800-1000 nm)无吸收。因此,如何通过Dorsomorphin合理的设计和选择生物分子,灵活调控分子自组装过程,构筑具有特定结构和功能纳米药物是解决这些问题的关键。受自然界天然蛋白质结构的启发,我们提出以简单的氨基Oxidative stress biomarker酸、功能短肽为基元,通过分子间弱相互作用的协同,调控自组装过程构筑高催化活性的纳米酶以及具有超大红移的光热纳米纤维,实现有效的肿瘤治疗:(1)受天然辣根过氧化物酶的启发,选择两亲性Fmoc-丝氨酸(Fmoc-S)、Fe~(3+)和化疗药物阿霉素(DOX)通过简单的多组分配位自组装构建金属纳米酶。所制备的纳米酶为球形纳米结构,粒径分布均匀,约100 nm。阿霉素负载量较高,超过70%。最重要的是,该纳米酶可以特异性消耗肿瘤细胞中高水平的谷胱甘肽,并将Fe~(3+)转化为Fe~(2+),以类过氧化物酶催化方式将肿瘤细胞内过量的过氧化氢转化为高细胞毒性的羟基自由基。同时,纳米酶也被原位激活,在肿瘤细胞内释放出化疗药物,用于增强治疗。体外和体内评估表明,超分子纳米酶通过联合催化化疗显著抑制肿瘤生长,且无任何全身毒性。(2)受自然界中蛋白质调控色素吸收的启发,选择免疫调节肽胸腺五肽作为组装模块调控酞菁动力学自组装,成功获得了吸收红移大于150 nm的新型J-聚集态纳米纤维。获得的超分子纳米纤维在830 nm处表现出极高的吸收,光热转换效率达到了56.7%。光热效应不仅可以直接消融癌细胞,还可以引起癌细胞免疫原性细胞死亡,产生一系列的信号分子,如暴露在细胞表面的钙网蛋白和分泌至细胞外的高迁移率族蛋白B1。通过结合免疫原性细胞死亡和胸腺五肽的免疫增强作用,可以有效清除原发肿瘤和抑制远处肿瘤的生长,并将不良反应降至最低。通过对自组装过程的调控构建高催化活性的超分子金属酶和具有超大红移的光热纳米纤维,实现了有效的化疗催化治疗和光热免疫治疗。

三阴性乳腺癌(Triple-Negative Breast Cancer,TNBC)是乳腺癌中最具侵袭性的亚型,由于具有高转移性等特性,导致其临床治疗效果不佳,因此迫切需要找到更有效的治疗策略。近年来,将光热治疗与LY-188011免疫治疗相结合的治疗手段已经在癌症治疗中取得很大的进展。光热治疗(Photothermal Therapy,PTT)不仅能有效地杀伤实体瘤,还能通过释放肿瘤相关的炎性蛋白以刺激机体的免疫反应,从而与免疫疗法相结合能够达到协同治疗肿瘤的效果。其中,吲哚菁绿(Indocyanine Green,ICG)介导的光热疗法联合免疫佐剂半乳糖化壳聚糖(Glycated Chitosan,GC)已针对晚期乳腺癌患者开展临床试验,不但可以清除原位的实体瘤,而且可以有效抑制远端转移瘤。但临床治疗中所用ICG与GC采用分别注射的方式,且ICG代谢快极易影响光热效果,同时GC也因分子较大难以有效与细胞作用。因此,针对这些问题,本文通过构建光热免疫一体化纳米颗粒GC@ICG,用于结合光热疗法应用于TNBC的治疗。具体研究内容如下:1.GC@ICG纳米颗粒的制备以及理化表征。首先,引入5β-胆烷酸(5βCA)与GC通过酰胺键偶联得到聚合物(5βCA-GC),并与ICG通过自组装的方式制备得到GC包裹ICG的纳米颗粒。并利用傅里叶变换红外光谱仪、扫描电镜(SEM)等仪器,对纳米颗粒的化学结构、形貌大小、及光热转换性能等进行了评估。结果显示:5βCA的羧基通过酰胺键成功地与GC的氨基结合,并且合成的GC@ICG纳米颗粒呈球状形态,均一性良好,同时具有良好的稳定性和光热转换性能。2.GC@ICG纳米颗粒的体外细胞学评价。采用CCK-8试验检测GC@ICG对细胞的毒性,并通过共聚焦显微镜来分析细胞对GC@ICG纳米颗粒的摄取情况。此外,还测定GC@ICG纳米颗粒在近红外激光的照射下引起的细胞毒性和光热杀伤的效果以及基于GC@ICG纳米颗粒的光热治疗诱导的免疫原性肿immediate early gene瘤细胞死亡的情况。体外研究结果显示:GC@ICG纳米颗粒能够进入肿瘤细胞内部且几乎没有毒性;在激光的照射下,GC@ICG吸收光能产生热能杀死肿瘤细胞,同时定位在肿瘤细胞内的GC能与凋亡过程中产生的抗原结合,进一步增强免疫应答效应。3.GC@ICG纳米颗粒的体内动物学评价。首先,构建了4T1小鼠乳腺癌肿瘤模型;通过监测治疗后各组小鼠的肿瘤大小及体重的变化,以评价治疗的效果;并对治疗后小鼠肺部以及肿瘤部位的组织进行病理切片,进行H&E染色和免疫荧光染色,以分析GC@ICG纳米颗粒在体内引起的特异性抗肿瘤免疫反应。体内研究结果显示:GC@ICG联合光热治疗不仅能够有效地杀伤原位肿瘤细胞,而且能够引发长期的抗肿瘤免疫效应,抑制肿瘤的转移;此外,治疗组远端肿瘤切片的免疫荧光染色结果显示,经过激光+GC@ICG治疗后,能够有效地上调抗肿瘤免疫细胞(CD8~+T细胞)以及下调M2型巨噬细胞和调节性T细胞的IACS-10759纯度数量,发挥了出色的抗肿瘤免疫效应,且对小鼠无明显的毒副作用。综上所述,本课题构建了一种一体化的GC@ICG纳米颗粒,它不仅可以进入到肿瘤细胞内部对原位肿瘤细胞进行有效的杀伤,此外还有效抑制了远端转移瘤的生长。该策略为三阴性乳腺癌的临床治疗提供了新思路。