Achr receptor

目的：探讨胰腺癌组织中剪接因子2/选择性剪接因probiotic persistence子(SF2/ASF)的表达，及其与抑癌基因P53(突变型)、增殖标志物Ki67和患者临床病理Tamoxifen采购指标之间的相关性。方法：采用GEPIA数据库分析350例胰腺癌组织和癌旁正常组织中SRSF1基因(SF2/ASF的编码基因)的表达差异，以及SRSF1与TP53和MKi67(Ki67的编码基因)的相关性；采用免疫组织化学法检测60例胰腺癌组织及对应的癌旁正常组织中SF2/ASF、突变型P53和Ki67蛋白的表达，采用Pearson相关性分析研究SF2/ASF与突变型P53和Ki67的相关性，以及SF2/AFS蛋白表达水平与胰腺癌患者临床病理学指标的关系；采用Cox比例风险回归模型进行预后分析。结果：GEPIA数据库分析结果表明，与癌旁正常组织相比，SRSF1基因在胰腺癌组织GDC-0973研究购买中的表达水平显著升高(P<0.01),SRSF1与TP53和MKi67的表达水平均相关(r分别为0.28和0.32，均为P<0.01)；免疫组化检测结果显示，与癌旁正常组织相比，SF2/ASF蛋白、突变型P53和Ki67蛋白在胰腺癌组织中的表达水平显著升高(P<0.01)。Pearson相关性分析结果表明胰腺癌组织中，SF2/ASF蛋白表达水平与突变型P53蛋白及Ki67增殖指数有关(r分别为-0.386和0.275，均为P<0.05)。卡方检验结果表明SF2/ASF在胰腺癌中的表达水平与胰腺癌分化程度、淋巴结转移情况以及有无远端脏器转移有关(均为P<0.01)，与胰腺癌发生部位和TNM分期无明显相关(P>0.05)。Cox风险回归分析表明，SF2/ASF高表达和患者年龄是影响患者总生存期的独立危险因素(均为P<0.01)。结论：SF2/ASF、突变型P53和Ki67蛋白在胰腺癌中高表达，且SF2/ASF的表达与突变型P53和Ki67具有相关性，提示SF2/ASF有望成为胰腺癌诊治的新靶点。

目的:瘙痒是常见于多种疾病的一种顽固症状,严重影响患者健康和生活质量,其治疗和护理已成为重点关注的临床问题。《本草纲目》等典籍记载,构树根皮被广泛用于治疗皮炎、癣症等皮肤病。现代研究亦表明构树根皮具有抗炎、抗菌等多种作用,但其止痒作用及相关机制尚未明确。本研究旨在考察构树根皮的止痒作用,并探讨可能的作用机制,为临床治疗和护理瘙痒患者提供理论依据和新的可能。方法:1.构树根皮的乙醇回流提取及工艺优化采用乙醇回流法提取构树根皮;以总黄酮和多酚为指标,采用响应面法优化构树根皮乙醇提取物的提取工艺。2.构树根皮乙醇提取物的止痒有效萃取部位筛选依次采用乙酸乙酯、水饱和正丁醇对构树根皮乙醇提取物进行萃取;将小鼠分为正常组、模型组、乙醇提取物组、乙酸乙酯萃取物组、正丁醇萃取物组和水部位萃取物组,将不同E7080提取物制备成水凝胶,连续在小鼠皮肤局部涂抹7天。末次给药后,除正常组外,其余组小鼠通过皮下注射4-氨基吡啶(4-Aminopyridine,4-AP)诱导急性瘙痒,观察小鼠抓挠行为变化,记录并统计其30 min抓挠总次数,比较构树根皮乙醇提取物不同萃取部位的止痒效果;采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)和超高液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(Ultra-High performance liquid chromatography and quadrupole time-of-flight mass spectromete,UPLC-QTOF-MS/MS)初步分析有效萃取部位的物质成分。3.有效萃取部位止痒作用的评价及作用机制研究将小鼠分为正常组、模型组和高中低剂量有效萃取部位组,连续局部皮肤涂抹相应水凝胶7天,末次给药后除正常组,其余组小鼠通过皮下注射4-AP和氯喹(Chloroquine,CQ)分别诱发组胺依赖性痒和非组胺依赖性痒,观察小鼠抓挠行为变化,记录并统计其30 min抓挠总次数。将小鼠分为正常组、模型组和高低剂量有效萃取部位组,除正常组,其余组小鼠通过局部连续7天涂抹丙酮、乙醚混合液和蒸馏水(Acetone-ether-water,AEW)建立小鼠慢性瘙痒模型,从造模第4天开始连续涂抹相应水凝胶4天,记录并统计实验第1、3、5和7天小鼠1 h内抓挠总次数;拍照记录小鼠背部造模处皮肤外观变化,采用苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色进行皮肤病理组织学分析;采用酶联免疫法检测小鼠血清和皮肤中白介素(Interleukin-4,IL-4)、IL-6、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量;Western blot法分析核因子κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)亚体p65、磷酸化p65(p-p65)和瞬时受体电位香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)的表达情况;在此基础上再次建立AEW诱导小鼠慢性瘙痒模型,分为正常组、模型组、TRPV1抑制剂组和有效萃取部位联合TRPV1抑制剂组,记录统计各组抓挠次数并采用Western blot检测TRPV1的表marine-derived biomolecules达。结果:1.构树根皮乙醇回流提取的最佳工艺构树根皮乙醇回流提取的最佳工艺为:提取温度75°C、提取时间117 min、料液比1:16(g/m L)、乙醇浓度70%。在该条件下,总黄酮、多酚的实际提取量分别为(23.93±0.30)mg/g和(14.69±0.56)mg/g。2.构树根皮乙醇提取物的止痒有效萃取部位对构树根皮乙醇提取物进一步萃取,得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水部位萃取物。与正常组相比,模型组小鼠30 min抓挠总次数明显增多(P<0.05);与模型组相比,构树根皮乙醇提取物组和正丁醇萃取物组小鼠从第10 min开始抓挠行为明显减少,且30 min抓挠总次数显著低于模型组(P<0.05);而乙酸乙酯萃取物组和水部位萃取物组小鼠的抓挠次数与模型组相比没有明显差异(P>0.05)。正丁醇萃取物的指纹图谱中存在10个主要峰,其中7号峰保留面积最大,占36.01%,经UPLC-QTOF-MS/MS分析,该物质为绿原酸。3.有效萃取部位的止痒作用及作用机制在4-AP和CQ分别诱导的两种急性瘙痒模型中,模型组小鼠高频次的抓挠行为明显多于正常组,且25 min后抓挠次数才开始出现减少,其30 min抓挠总次数显著高于正常组小鼠(P<0.05);外用正丁醇萃取获悉更多物中、高剂量后,小鼠抓挠现象明显缓解,第10 min或第15 min抓挠次数开始下降,30 min抓挠总次数均显著低于模型组(P<0.05),且该作用随剂量增加而增强;而低剂量正丁醇萃取物组小鼠的抓挠次数与模型组相比没有明显差异(P>0.05)。AEW诱导的慢性瘙痒实验中,与正常组相比,模型组小鼠7天内抓挠次数持续增加(P<0.05),皮肤干燥起皮且表皮厚度明显增加(P<0.05),同时小鼠血清和皮肤中IL-4、IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05),皮肤中p-p65和TRPV1的表达明显上升(P<0.05)。与模型组比,正丁醇不同剂量干预后小鼠的抓挠次数从第5天开始明显下降,皮肤干燥程度减轻,且表皮厚度明显减少(P<0.05);小鼠血清和皮肤IL-4、IL-6和TNF-α含量也明显降低(P<0.05),皮肤中p-p65和TRPV1的表达明显减少(P<0.05)。与单独使用TRPV1抑制剂组相比,TRPV1抑制剂联合正丁醇萃取物组的小鼠实验末期1 h内的抓挠次数更少(P<0.05),但两组皮肤中TRPV1表达无差异(P>0.05)。结论:1.正丁醇萃取物是构树根皮止痒的有效萃取部位,其含量最高的物质成分为绿原酸。2.构树根皮正丁醇萃取物对4-AP和CQ引起的组胺依赖性及非组胺依赖性急性瘙痒均有抑制作用,同时还可缓解AEW引起的慢性瘙痒,并减轻小鼠皮肤干燥程度和表皮增厚,这可能与抑制NF-κB通路、调节炎症反应,以及减少皮肤TRPV1表达和痒觉传导有关。

目的：探讨肽酶M20结构域1(peptidase M20 domain containing 1,PM20D1)在人弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphomas,DLBCL）细胞中的表达及其与缺氧相关性和预后的关系。方法：通过GDC、TCGA、GTEx公共数据库分析PM20D1表达对DLBGSI-IXCL细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其与患者预后的关系。通过对不同分组患者的富集分析及PM20D1与CD274相关性分析验证PM20D1是否为DLBCL的缺氧相关基因；采用ChEA、ENCODE和hTFtarget数据库分析上游调控PM20D1表达的转录因子（TF）和miRNA，以及差异表达PM20D1与化疗药物敏感性的关系。采用WB法检测PM20D1在正常淋巴细胞和DLBCL细胞中的表达水平，通过设计PM20D1的siRNA序列敲减目的基因，并采用qPCR和WB法检测验证SUDHL2和interface hepatitisSUDHL10细胞中PM20D1的敲减效率，采用CCK-8法和Transwell实验分别检测敲减PM20D1对细胞增殖和迁移能力的影响，流式细胞术selleck合成检测细胞凋亡水平。结果：PM20D1在DLBCL组织中高表达且患者预后差（P<0.05或P<0.01）；富集分析显示，PM20D1高表达组与ssGSEA高分组主要涉及细胞电耦合通讯、甘油三酯代谢过程调节和细胞质翻译起始复合物过程，且PM20D1表达与免疫检查点CD274表达呈正相关（P<0.01,r=0.757）。在SUDHL2和SUDHL10细胞中敲减PM20D1后，细胞的增殖和迁移均显著降低（均P<0.05），细胞凋亡明显增加（P<0.05）。结论：PM20D1基因在DLBCL组织和细胞中高表达且与患者预后密切相关；PM20D1可能通过促进DLBCL细胞的增殖、迁移并抑制凋亡，从而促进DLBCL的发生发展。

鱼糜是极其重要的水产食品原料,冷冻贮藏是鱼糜的典型存放方式。但冷冻效应会导致鱼糜蛋白浓缩变性和冰晶生长,致使鱼糜蛋白功能特性和鱼糜品质劣化。一般采用糖类作为鱼糜的冷冻保护剂,抑制蛋白质的冷冻变性。魔芋葡甘聚糖(Konjac Glucomannan,KGM)作为亲水性天然多糖,具备优越的凝胶性、持水性、增稠性,被认为是潜在的鱼糜抗冻剂,但其分子量大、吸水性强,难以均匀分散在食品基质中。酶法降解可显著改善KGM的食品基质分散性,而且KGM酶解产物可对鱼糜肌原纤维蛋白组分发挥冷冻保护作用,从而提升鱼糜品质,但相关机制亟待系统研究。因此,本文采用β-葡聚糖酶制备不同分子量的KGM酶解产物,在明确产物结构与特性的基础上,研究了不同分子量KGM酶解产物添加量对草鱼鱼糜凝胶结构与性质的影响;剖析了不同分子量KGM酶解产物对草鱼肌原纤维蛋白和鱼糜的冷冻保护作用;从KGM酶解产物与肌球蛋白分子相互作用的角度,阐明了KGM酶解产物的冷冻保护作用机制。研究结果可为鱼糜冻藏过程中的品质控制与提升提供理论依据。主要研究结果如下:1.研究了β-葡聚糖酶在不同水解条件下得到的KGM酶解产物的结构与特性。酶解产物分子量在36.48±1.23至149.03±1.91 kDa范围内;随着分子量降低,KGM酶解产物的特征粘度降低、脱乙酰度上升、可溶性总糖含量降低、白度增加;KGM及酶解产物主要呈无定形态,但较低分子量的KGM酶解产物具有少量的结晶结构,酶解产物表面羟基含量随着分子量下降而逐渐增加。而且酶解过程中的脱乙酰作用对KGM的微观形貌具有破坏作用,Zeta电位显示KGM酶解产物的电负性呈上升趋势。2.研究了不同分子量KGM酶解产物添加量对草鱼鱼糜结构与凝胶特性的影响。结果显示,KGM酶解产物在鱼糜凝胶中存在自聚集和延伸两种状态,在鱼糜凝胶基质中KGM酶解产物同步发生自聚集以及与蛋白质分子的相互作用。分子量149.03±1.91和128.7±5.9 kDa的KGM酶解产物的添加有利于增强鱼糜的凝胶强度;当KGM酶解产物添加量为1%时,鱼糜自由水含量增加、凝胶持水性降低;当KGM酶解产物添加量为0.5%时,鱼糜凝胶强度无显著变化,鱼糜具有良好保水性。因此,KGM酶解产物的适宜添加量为0.5%。3.在0.5%的酶解产物添加量下,研究了不同分子量的KGM酶解产物对于肌原纤维蛋白和鱼糜冷冻保护作用。随着冻藏selleck时间延长,盐溶性蛋白含量、酶活性(Ca~(2+)-ATPase酶)、总巯基含量、Zeta电位值降低,表面疏水性和蛋白质粒径升高;随着KGM酶解产物分子量降低,肌原纤维蛋白含量、酶活性(Ca~(2+)-ATPase酶)和总巯基含量逐渐增加,表面疏水性和Zeta电位逐渐减小,芳香族氨基酸残基(色氨酸、酪氨酸)的暴露程度减小;小分子量的KGM酶解产物(EK3)对肌原纤维蛋白的冷冻保护作用最佳。随着冻藏时间延长,鱼糜的持水性、离子键含量、α-螺旋含量逐渐降低,蒸煮失水率、无规卷曲含量逐渐上升,氢键和疏水键含量呈现先上升后下降的趋势;118.75±2.76 kDa(EK2)和36.48±1.23 kDa(EK3)的KGM酶解产物在降低鱼糜蒸煮失水率、改善鱼糜热稳定性、提高疏水键含量、延缓α-螺旋含量下thoracic medicine降等方面均有显著效果,EK2和EK3对鱼糜冷冻保护作用明显。通过研究KGM酶解产物对鱼糜蛋白肽段的氧化作用位点,发寻找更多现冻藏30 d后空白组鱼糜蛋白MHC和Actin条带强度明显降低,肽链的氧化主要与Met有关,而添加EK3可保护原被氧化的大部分肽链;肽段的氧化位点主要位于肌球蛋白头部区域,添加EK3后鱼糜片段在肌球蛋白头部的氧化位点明显减少,杆部的氧化位点数量无差异。因此,KGM酶解产物可能通过保护肌球蛋白头部的易氧化位点来发挥冷冻保护作用。4.结合上述研究,探讨了基于KGM酶解产物-肌球蛋白相互作用的冷冻保护机制。KGM酶解产物(EK)可保护肌球蛋白表面疏水基团,避免暴露;EK-肌球蛋白的相互作用力主要是氢键、范德华力,EK-肌球蛋白形成的氢键较肌球蛋白分子间的氢键更稳定;添加EK能改变肌球蛋白构象,提高肌球蛋白的热稳定性,特别是轻酶解肌球蛋白和重酶解肌球蛋白部分,EK可能与这两个部分结合。不同产物分子量下的研究表明,EK1(149.03±1.91 kDa)与肌球蛋白相互作用的焓变和熵变低于EK2和EK3,EK1对肌球蛋白的吸附作用小于EK2和EK3,EK2和EK3吸附肌球蛋白的质量和厚度无显著差异。分子模拟验证了KGM酶解产物分子链可在肌球蛋白二聚体表面形成的空腔中,与肌球蛋白形成氢键,稳定肌球蛋白结构,这与实验结果相吻合。KGM分子尺寸效应可能体现在EK1和EK2之间,酶解时间延长导致产物分子量下降、脱乙酰度下降、特征粘度下降,使酶解产物分子与肌球蛋白头部充分结合,在冷冻过程中可形成空间位阻,从而抑制肌球蛋白头部的聚集,从而发挥冷冻保护作用。

研究3种外源因子(荧光增白剂FB28、凝集素和灭幼脲)对家蚕围食膜结构、通透性和围食膜蛋白的影响.利用Thermo Scientific Quattro环扫电镜观察围食膜表面结构，尤斯灌流室测量围食膜对不同葡聚糖分子(180 D, 5 kD, 40 kD, 110 kD, 2 000 kD)的透过性，利用蛋白质谱检测围食膜蛋白的变化.结果表明：荧光增白剂FB28、凝集素和灭幼脲均对家蚕围食膜结构和功能有一Galunisertib小鼠定影响，但围食膜形态、表面结构和通透性改变程度有所不同.凝集素使围食膜中部增厚，48 h时观察到膜内表面有球形的电子致密结构，通透性显著增大；灭幼脲处理后，围食膜多层结构异常，层与层之间变得疏松，皱褶增多，通透性降低；荧光Median sternotomy增白剂FB28对围食膜的破坏最为迅速和剧烈，添食4 h时围食膜能透过2 000 kD的葡聚糖分子，6 h后围食膜基本消失.对荧光增白剂FB28处理后的围食膜进行SDS-PAGE电泳检测发现，在2 h和4 h时蛋白条带与对照组相比差异有统计学意义.质谱分析结果表明：处理后的围食膜新增了与免疫(Apolipophorin-Ⅲ, Beta-1, 3-glucanase)、昆虫生殖能力和抗逆能力(Methuselah-like protein 5)和蛋白质结合(60s ribosomal export prNirogacestat使用方法otein NMD3)相关的12种蛋白.

【目的】为湖南草芍药的油用开发提供理论依据。【方法】分别用茚三酮反应和气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对草芍药籽仁氨基酸和油脂成分等进Fulvestrant溶解度行分析。【结果】湖南草芍药籽仁蛋白质含量为11.20%,其中清蛋白3.42%、球蛋白0.30%、醇溶蛋白2.30%、谷蛋白3.10%。含有17种氨基酸，在7种必需氨基酸中，蛋氨酸的AAS最低，为0.14,属第一限制氨基酸；苯丙氨酸的AAS为0.75,属第二限制氨基酸。籽仁含油率为28.37Medical Doctor (MD)%,含有14种脂肪酸Empagliflozin使用方法，不饱和脂肪酸含量为95.00%,饱和脂肪酸含量为4.05%,其中α-亚麻酸含量最高，为36.70%,其次是油酸和亚油酸，分别为29.02%和28.70%。不饱和脂肪酸含量比‘凤丹’高2.25个百分点，油酸和亚油酸含量分别比‘凤丹’高5.76个百分点和0.09个百分点，α-亚麻酸含量比‘凤丹’低3.70个百分点。【结论】湖南草芍药籽仁油不饱和脂肪酸总含量较高，具有开发为高含量亚麻酸、亚油酸和油酸优质食用油的潜力。

为延缓龙眼退糖及品质劣变的速度，从花后89 d开始，每隔7 d～10 d以500 mL/穗的清水（对照）、20 mmol/L和40 mmol/L钨酸钠连续喷施‘石硖’龙眼果实，并分析各处理对果实退糖特性和抗氧化能力的影响。结果表明，留树至花后130 d，对照和20 mmol/L Na_2WO_4喷施的果实可溶性固形物（total soluble solids,TSS）含量分别下降了8.69%、8.93%，而40 mmol/L Na_2WO_4处理组果实TSS含量仅下降4.10%，退糖被明显延缓。与对照组相比，40 mmol/L Na_2WO_4处理后的龙眼果Cytoskeletal Signaling抑制剂皮总类黄酮含量在花后130 d增加2.32 mg/g，总酚含量增加3.54 mg/g，留树中后期Biosafety protection过氧化物酶（peroxidase,POD）活性明显提高；同时，40 mABT-199mol/L Na_2WO_4处理后的龙眼果肉总类黄酮含量在花后130 d增加0.02 mg/g，总酚含量增加0.12 mg/g，苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia lyase,PAL）活性明显提高。因此，40 mmol/L Na_2WO_4喷施可明显延缓‘石硖’龙眼退糖并维持抗氧化物质的含量。

目的 分析乙醛脱氢酶2(ALDH2)在食管鳞癌中的表达状态，研究基因是否影响放化疗预后，为食管癌预后提供新的生物学指标。方法 收集济南市章丘区人民医院2019-09-01-2021-10-30收治的接受同步放化疗治疗的不可切除局部晚期食管鳞癌患者80例，放疗采用调强适形放疗技术，化疗采用替吉奥联合铂类的方案，在治疗前抽取外周静脉血，采用sanger测序检selleck NMR测ALDH2基因多态性在食管鳞癌中的表达情况，采用生存分析方法分析无进展生存期(PFS)及总生存期(OS)影响因素，应用Kaplan-Meier行单因素分析，Cox回归行多因素分析。结果 食管鳞癌患者ALDH2 rs671GG(野生型)和AG(杂合突变型)表达率分别为57.50%和42.50%;ADH1B rs1229984TT(野生型)、TC(杂合突变型)和CC(纯合突变型)表达率分别为40.00%、41.25%和18.75%;所有患者中位随访时间为22.8个月，中位PFS为13.5个月(95%CI为10.022～16.978),section Infectoriae中位OS为22.8个月(95%CI为19.265～26.335)。单因素分析结果显示，影响PFS因素为T分期(P<0.001)、临床分期(P<0.001)、大体肿瘤体积(GTV,P=0.013)、ALDH2 rs671(P<0.001);影响OS因素为T分期(P=0.019)、临床分期(P=0.003)、肿瘤长度(P=0.011)、GTV(P=0.001)、肿瘤部位(P=0.049Captisol供应商)。多因素分析显示，影响PFS的因素为临床分期(HR=4.170,95%CI为1.719～10.114,P=0.002)、GTV(HR=2.087,95%CI为1.069～4.073,P=0.031)、ALDH2 rs671(HR=2.746,95%CI为1.476～5.110,P=0.001);影响OS的因素为GTV,HR=2.834,95%CI为1.295～6.201,P=0.009。结论 表达ALDH2 rs671 AG杂合突变基因型食管癌患者同步放化疗后复发风险高，其PFS与OS较短。ALDH2 rs671可作为接受同步放化疗治疗的不可切除局部晚期食管鳞癌患者预后标志物。

金花葵是锦葵科秋葵属植物,主要功效为清热、解毒、镇痛、抗疲劳、抗衰老、抑制肿瘤、抗氧化等;含有多种代谢产物,其中类黄酮化合物含量丰富。金花葵花中类黄酮含量最高,显著高于其他部位。本研究对金花葵花类黄酮进行了提Amycolatopsis mediterranei取纯化并对其体外抗氧化活性进行了研究,通过转录组与代谢组联合分析对金花葵花苞(HA)与花朵(HB)类黄酮生物合成途径进行了分析,克隆得到类黄酮生物合成途径重要酶基因——F3’H,并对其功能进行了初步分析。具体结果如下:1、金花葵花黄酮提取纯化及体外抗氧化活性研究。采用超声波辅助提取法提取金花葵黄酮类物质,用80%的乙醇浸泡12 h,提取时间为35 min,料液比为1﹕30,黄酮得率为8.17%。采用透析法进行纯化用于后续实验。金花葵黄酮浓度为1.0mg/m L时总还原能力为18.25%,铁离子还原能力为61.2%,羟基自由基清除率为57.41%,DPPH自由基清除率为93.63%。2、对金花葵花苞与花朵进行代谢组学分析,共鉴定到23类459种代谢物,其中酚酸类和黄酮醇类最多。金花葵花中花青素类物质含量最高,占总代谢物含量的73.95%。金花葵花中检出180种黄酮类化合物,共有89个差异代谢物。其中黄酮类差异代谢物21Tofacitinib生产商种。3、对金花葵花苞与花朵差异基因参与的代谢通路进行了富集,33899个差异基因富集在139条代谢通路上,代谢途径上分布的差异基因是最多的。GO功能分类和KEGG通路富集分析表明部分差异基因与类黄酮生物合成途径相关。类黄酮生物合成相关差异基因荧光定量PCR分析结果表明,CHS、CHI、FLS、F3H和F3’H等关键酶基因在HA中表达量高于HB。4、根据KEGG富集结果,选取类黄酮通路、黄酮和黄酮醇通路、异黄酮生物合成通路差异基因与差异代谢物进行联合分析,网络图表明,类黄酮3’-羟化酶基因——F3’H与差异代谢物槲皮素具有相关性。与HA相比,HB中类黄酮生物合成途径相关差异基因表达量降低,类黄酮合成减少。5、通过RT-PCR技术,克隆得到Hm F3’H的c DNA全长为1392 bp,ORF长度为1137 bp,编码378个氨基酸。生物信息学分析预测了其分子量52.14 k Da,等电点7.22,分子式为C_(2344)H_(3716)N_(620)O_(676)S_(23);为稳定的亲水性蛋白;二级结构以α-螺旋为主;Hm F3’HCanagliflozin体内实验剂量蛋白含有细胞色素P450功能区域,是细胞色素P450家族成员之一;亚细胞定位于细胞质;Hm F3’H具有多个磷酸化位点,有信号肽。系统进化分析表明该基因与大豆的F3’H亲缘关系最近。

目的:随着生活质量的日益提高,口感柔和、保健滋补的新型低度酒越来越受到消费者的欢迎。目前市售的五加皮酒,大多是以粮食白酒为酒基,配以多味药材经浸泡、配制、调色等工艺制备而成。当前对于使用传统黄酒酿造工艺制备五加皮酒的研究未见报道,五加皮含有丰富的营养物质和多种功能性成分,开发以五加皮为原料的酿造酒,这既能扩大五加皮的产品用途,还能满足人们日益增强的健康饮酒意识,并且具有较大的经济利益及健康效益。本课题参考《本草纲目》、唐代《外台秘要》对五加皮酒的记载,优化其制备工艺,将制得的五加皮酒进行质量评价,并对其酚类成分含量进行测定,对其抗疲劳、抗炎镇痛作用进行初步研究。方法:1.以浸出物含量和绿原酸含量为指标,选取浸泡时间、溶剂量、提取时间3个因素进行五加皮水提工艺的单因素考察,结合单因素考察结果设计L_9(3~4)正交试验,得到五加皮水提液制备最佳工艺,并对最佳工艺进行验证;以还原糖含量的综合评分为指标,选取加曲量、糖化时间、糖化温度3个因素进行五加皮酒糖化工艺的单因素考察,结合单因素考察结果设计L_9(3~4)正交试验,得到五加皮酒糖化最佳工艺,并对最佳工艺进行验证。2.以前期研究所得最佳工艺制备五加皮酒,对其理化指标糖含量、非糖固形物含量、酒精度、p H值、总酸含量、氨基酸态氮含量和氧化钙含量进行评价;对其主要功能性成分绿原酸、原儿茶酸、咖啡酸、阿魏酸进行含量测定,并进行方法学考察;对其挥发性风味成分进行气质联用仪分析;建立五加皮酒HPLC指纹图谱。3.选择运动耐力、运动所需的能源物质肝糖原以及运动代谢产物血清尿素氮进行动物药理实验,研究五加皮酒对小鼠负重游泳时间、小鼠血清尿素氮含量、小鼠肝糖原含量的影响,探讨五加皮酒对小鼠抗疲劳的作用。4.选用二甲苯致炎和醋酸致痛两个动物模型,对小鼠耳肿胀、小鼠耳组织中抗炎因子和致炎因子水平变化、小鼠醋酸扭体、小鼠血清中镇痛物质和致痛物质水平变化进行研究,探讨五加皮酒抗炎镇痛的药效学特点。结果:1.经单因素考察和正交试验,确定了五加皮最佳水提工艺为加12倍量水,浸泡40 min,煎煮90 min;五加皮酒的最佳糖化工艺为加曲量14%、糖化温度65℃,糖化50 min;经验证,优选的提取工艺提取效率高,重复性好,工艺稳定可行。2.按照国家黄酒标准GB/T13662-2010《黄酒》标准检测了五加皮酒的理化指标。五加皮酒总糖含量为15.5 g/L;非糖固形物含量为116.5 g/L;酒精度为10.3%vol;p H值为3.6;五总酸为8.0 g/L,氨基酸态氮为0.25 g/L;氧化钙含量为0.31 g/L,均符合传统半干型黄酒的要求;对三批五加皮酒中绿原酸、原儿茶酸、咖啡酸、阿魏酸进行含量测定,拟定了五加皮酒中绿原酸、原儿茶酸、咖啡酸、阿魏酸的含量限度,分别为每1m L五加皮酒中绿原酸的含量不低于0.14 mg、原儿茶酸的含量不低于0.024 mg、咖啡酸的含量不低于0.026 mg、阿魏酸的含量不低于0.0073 mg;通过GC-MS联用对五加皮酒挥发性成分进行分析,可知五加皮酒发酵结束初期时含有主要的挥发性物质有35种,其中酯类化合物10种,总含量为14.02%,以乙酯类种类最多;醇类化合物15种,总含量为71.84%,苯乙醇含量最高;建立了五加皮酒的高效液相色谱指纹图谱分析方法,并利用相似度指标对10个批次的五加皮酒进行质量评价;对不同批次的五加皮酒高效液相色谱图进行比较,对组分峰进行筛选,优选得到其中的16个共有组分峰作为特征蜂,指认了4个共有峰,指纹图谱的特征峰选择这16个峰,作为该产品质量鉴别的主要指标之一。3.在小鼠负重游泳实验中,白酒浸渍五加皮组小鼠负重游泳时间较五加皮酒三个剂量组;阳性对照组的小鼠负重游泳时间显著高于正常对照组(P<0.01),说明阳性药西洋参含片可显著延长小鼠负重游泳时间;同时五加皮酒中高剂量组也较正常对照组存在显著性差异(P<0.01),说五加皮酒中高剂量组可显著延长小鼠负重游泳时间。在小鼠血清尿素氮含量测定实验中,阳性对照组的小鼠尿素氮含量显著低于正常对照组(P<0.01),说明阳性药西洋参含片可显著降低小鼠血清中尿素氮含量;同时五加皮酒中高剂量Emricasan生产商组也均与正常对照组存在显著性差异(PPD0325901化学结构<0.01),说五加皮酒中高剂量组可显著降低小鼠血清中尿素氮含量。在小鼠肝糖原含量测定实验中,阳性对照组的小鼠肝糖原含量显著高于正常组。对照组(P<0.01),说明阳性药西洋参含片可提高降低小鼠体内肝糖原含量;同时五加皮酒中高剂量组也均与正常对照组存在显著性差异(P<0.01),说五加皮酒中高剂量组可显著降低小鼠体内肝糖原含量。4.在二甲苯致炎模型中,阳性药和五加皮酒中高剂量组对小鼠耳片肿胀抑制率分别为38.87%、36.99%、32.96%,与模型组小鼠相比小鼠耳片重量存在显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,五加皮酒中高剂量组能够有效降低机体TNF-α(P<0.001,P<0.05)、组胺(P<0.01,P<0.05)水平,升高机体IL-10(P<0.01)水平。在醋酸致痛模型中,腹腔注射0.6%醋酸后模型组小鼠扭体阳性率为100%,出现典型的扭体动作躯干和后肢因刺激而伸长、腹腔凹陷、臀部高起。五加皮酒低、中、高剂量组扭体潜伏期与模型组相比扭体潜伏期有一定的延长,中、高剂量组有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。与模型组相比,五加皮酒中、高剂量组能提高醋酸扭体小鼠血清中β-EP含量(P<0.01,P<0.05);显著降低醋酸扭体小鼠血清中PGE_2的含量(P<0.01,P<0.05)。结论:本研究优选的五加皮酒制备工艺稳定性好、操作性强,所酿制的五加皮酒理化指标均符合国家GB/T13662-2010《黄酒》标准。初步药效学研究发现五加皮酒高剂量组能显著延长小鼠负重游泳时间、降低运动时小鼠血清尿素氮的含量,增加小鼠肝糖原的储备从而发挥抗疲劳作用;五加皮酒中高剂量组能够有效抑制二甲苯引起的炎症反应,并且能够有效降低机体TNF-α、组胺水平,从而抑制炎症反应,同时提高机体抗炎因子IL-10的含量达到抑制炎症作用;五加皮酒中高剂量组能抑制醋酸扭体小鼠的扭体次数,并且提高醋酸扭体小鼠血清中β-EP的含量,抑制PGE_2的含量。课题对五加皮酒制备工艺、五加皮酒质量研究以及初步药效学3个方面进行了系统研究,确定了其最佳制备工艺,初步队其进行了质量评urogenital tract infection价,药效学研究证明了五加皮酒具有抗疲劳、抗炎镇痛的作用,为五加皮酒的进一步开发奠定了基础。