Achr receptor

目的:应用新型FOXMElectro-kinetic remediation1抑制剂RCM1选择性抑制FOXM1表达,研究FOXM1在病毒感染诱发哮喘急性发作过程中的作用机制,并研究其对气道上皮细胞分泌黏液蛋白MUC5AC表达及IL-4、IL-13、IFN-γ等炎症因子表达的影响,探讨FOXM1作为哮喘靶向治疗目标因子的可行性,为临床治疗哮喘提供理论支持。方法:将BALB/c小鼠随机分为Saline+Saline+Vehicle组、HDM+Saline+Vehicle组、HDM+Saline+Poly(I:C)组、HDM+VP+Poly(I:C)组、HDM+Poly(I:C)+VP组、HDM+RCM1+Poly(I:C)组和HDM+Poly(I:C)+RCM1组。应用屋尘螨(HDM)构建哮喘小鼠模型,利用病毒类似物Poly(I:C)模拟病毒感染,分别应用Verteporfin(VP)和RCM1选择性抑制YAP和FOXM1的表达。通过乙酰甲胆碱激发试验评估哮喘小鼠气道高反应性。留取小鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)测定YAP、FOXM1、SPDEF、MUC5AC、细胞因子及炎性因子的表达。在Poly(I:C)处理的16HBE细胞实验中,选择性抑制YAP和FOXM1,并通过RT-PCR和Western Blot评估YAP和FOMLN8237抑制剂XM1的表达。结果:1.不同浓度的乙酰甲胆碱刺激下,与对照组相比,HDM组和Poly(I:C)组的气道狭窄指数(enhanced pause,Penh)均显著升高(均P<0.001);每分钟通气量(minute ventilation,MV)均显著降低(均P<0.001)。2.与对照组相比,HDM组小鼠肺组织Yap、Foxm1、Spdef、Muc5ac、IL-4、IL-13m RNA的表达明显增加(均P<0.05),IFN-γm RNA的表达明显降低(P<0.01);与HDM组相比,Poly(I:C)组小鼠肺组织Yap、Foxm1、Spdef、Muc5ac、IL-4、IL-13、IFN-γm RNA的表达明显增加(均P<0.05);应用VP和RCM1后可以显著抑制Yap、Foxm1、Spdef、Muc5ac及细胞因子的表达(均P<0.001)。3.与对照组相比,HDM组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13分泌明显增高(均P<0.001),IFN-γ分泌显著降低(P<0.001),嗜酸性粒细胞及巨噬细胞计数明显增多(均P<0.001);Poly(I:C)组与HDM组相比IL-4、IL-13、IFN-γ、嗜酸性粒细胞及巨噬细胞分泌显著升高(selleckchem均P<0.001);VP和RCM1可以减少BALF中IL-4、IL-13、IFN-γ的分泌(均P<0.001),嗜酸性粒细胞及巨噬细胞计数明显降低(均P<0.001)。4.HE染色结果显示HDM组小鼠气道上皮明显增厚,上皮细胞饱满、黏液颗粒积聚;与HDM组相比,Poly(I:C)组气道上皮增厚更为显著,上皮细胞呈柱状排列;PAS染色显示HDM组小鼠上皮细胞内黏液蛋白积聚,Poly(I:C)组小鼠的改变较哮喘组更加显著;免疫组化染色结果显示哮喘组气道上皮细胞YAP、FOXM1、SPDEF、MUC5A表达明显增强,Poly(I:C)组更为显著;应用VP和RCM1后上皮细胞体积明显减小,气道上皮厚度明显降低,并且显著抑制上皮细胞内黏液蛋白积聚,以及气道上皮细胞YAP、FOXM1、SPDEF、MUC5A表达。5.16 HBE细胞实验结果提示VP可明显抑制Yap及Foxm1表达(均P<0.01),而RCM1可有效抑制Foxm1(P<0.01)表达,但对Yap表达无明显影响;同时在蛋白表达水平上,与对照组相比,Poly(I:C)组YAP、FOXM1蛋白表达显著增高(P<0.001);VP+Poly(I:C)组较Poly(I:C)组显著降低(P<0.001);RCM1+Poly(I:C)组FOXM1蛋白表达较Poly(I:C)组显著降低(P<0.001),YAP蛋白表达未见明显差异(P>0.05)。结论:呼吸道病毒感染通过激活FOXM1通路,诱发气道上皮杯状细胞过度增生及黏液分泌亢进,同时促进哮喘小鼠肺组织炎症因子分泌,加重肺组织炎症,增加气道阻力,导致哮喘发作;而RCM1可以明显减轻哮喘小鼠肺组织炎症及气道杯状细胞增生,缓解了哮喘的发展进程。

癌症是当前全球共同面对的持续性危害人类生存健康的重大慢https://www.selleck.cn/products/Cisplatin.html性疾病,早期发现和诊断能够增加治疗和治愈的成功率。与传统肿瘤可视化诊断技术相比,生物光学成像方法因其非侵入性、可视化能力强、空间分辨率高等优点已经成为重要的医学诊断成像方法。然而,单一的生物光学成像方法在肿瘤诊断成像中无法同时实现功能和结构成像的结合、以提供更多准确可靠的生物学信息;此外,大多生物组织结构中都缺少内源性生色团,很难利用生物组织体自身的本征光学特性进行光学成像和病理探测。因Killer cell immunoglobulin-like receptor此,迫切地需要构筑同时结合高穿透深度和高分辨率特征描述深部肿瘤轮廓信息的双模态成像方法,探索并开发出可用于肿瘤双模态成像和光动力治疗的新型联合诊疗试剂。基于上述背景分析,本文选择近红外二区荧光成像/光声成像双模态成像方法NIR-II FLI/PAI,将NIR-II FLI的高信噪比、高灵敏度成像特点,以及PAI的高分辨率、高组织穿透深度成像特点有效结合,设计并制备同时满足双模态成像引导下的多功能“诊疗一体化”纳米团簇(Nanoclusters)作为外源性造影剂,进一步改善肿瘤双模态成像诊断性能、同时提高成像引导的光动力治疗效果。本文的主要研究内容如下:(1)针对现有外源性造影剂荧光发射性能弱、容易光漂白,且生物毒性明显等问题,本文结合以光致发光成像为代表的荧光成像、以光吸收成像为代表的光声成像,合成了钯原子掺杂的双金属金钯纳米团簇Au Pd NCs(Au:Pd=20:1),所制备的纳米团簇具有超小型尺寸(<3 nm);在300-1000 nm之间的紫外-可见光吸收光谱具有宽泛且逐渐递减的近红外光吸收特性;结合荧光发射光谱,发射中心位置较Au NCs从1000 nm红移至1250nm、荧光强度增强了约2.1倍,与光声信号强度均表现出了与Au Pd NCs浓度正相关的变化趋势。实验表明,相较于传统纳米光学探针,Au Pd NCs在具有优异的近红外二区荧光发射性能、宽吸收特性的同时,体现出了高生物安全性与相容性,能够作为纳米光学探针用于双模态成像引导的肿瘤示踪与诊断,为后续构筑NIR-ⅡFLI/PAI双模态成像引导的多功能纳米诊疗平台提供了基础性能保障。(2)针对传统膀胱癌灌注给药所诱发的耐药反应,以及现有外源性造影剂在膀胱部位选择性差、滞留时间短等局限性,本文结合以光致发光成像为代表的荧光成像、以光吸收成像为代表的光声成像,提出并构筑了一种新颖的温度响应型双向纳米递送系统(Au Pd-PNIPAM-FA Nanoprobe Bidirectional Delivery Systems,Au Pd-P-FA NBDs),以钯原子掺杂的Au Pd NCs为核心,通过EDC/NHS偶联反应将聚N-异丙基丙烯酰胺和叶酸修饰于表面。实验表明所制备的Au Pd-P-FA NBDs具备增强的NIR-II荧光发射性能(FL>1200 nm)以及光声吸收性能;激光辐照后的体外光热转化效率仅为12.77%;将Au Pd-P-FA NBDs由尾静脉注射入膀胱癌裸鼠模型后,在膀胱内达到最大聚集的时刻(1.0h)施加激光辐照,局部温度上升激活Au Pd-P-FA NBDs的可逆相变、延长了在膀胱内的滞留时间(>12 h);注射后6.0 h,可观察到膀胱内癌变区域明显的NIR-II FLI/PAI信号。该类外源性纳米探针结合“类灌注”递送模式和“主动靶向”递送模式,解决了传统膀胱内灌注给药有创模式下的耐药性产生,为NIR-ⅡFLI/PAI引导的膀胱癌早期无创诊断和实时成像提供了全新的机会。(3)针对光动力治疗对肿瘤组织乏氧区域的癌细胞杀伤能力有限、且治疗过程会消耗大量的氧气以及破坏血管结构,使治疗后的肿瘤组织会变得更加乏氧,最终无法达到预期的治疗效果,本文结合以光致发光成像为代表的荧光成像、以光吸收成像为代selleckchem PLX5622表的光声成像,提出并构建了一种新型多功能团簇状纳米诊疗平台(Au Pd-BSA Cluster Nanotheranostics,Au Pd-BSA CNs),在Au Pd NCs的基础上通过静电吸附结合牛血清白蛋白。实验表明所制备的Au Pd-BSA CNs荧光发射光谱中心位于1250 nm,且光声信号强度比模型裸鼠血液高出了约15倍,可用于体内高对比度NIR-II FLI和高空间分辨率的PAI;更重要的是,通过体外自由基标志物的检测和细胞光动力治疗实验证实了Au Pd-BSA CNs无论在乏氧条件还是常氧条件都能实现光动力杀伤过程;将Au Pd-BSA CNs尾静脉注射10 h后肿瘤部位被充分“点亮”,FL信号提升了4倍、PA信号提升了10倍,便于精准定位肿瘤组织的位置、形态的同时,确定最佳治疗时间点;通过I型/Ⅱ型联合PDT、协同类葡萄糖氧化酶催化活性,实现了乏氧环境下NIR-ⅡFLI/PAI双模态成像引导的肿瘤高效杀伤。该类纳米光学探针的提出,为解决乏氧环境下NIR-ⅡFLI/PAI引导的PDT提供了一种著有成效的设计策略。本论文的研究结果为多功能“诊疗一体化”纳米平台的设计和研发提供了一种全新的方向和思路,着重讨论了合金纳米团簇和合金纳米团簇复合物作为多功能纳米诊疗平台的优越性与可行性,为将来NIR-ⅡFLI/PAI/PDT“诊疗一体化”的发展与进步提供了理论依据与实验基础。

目的 探讨α-亚麻酸植物甾醇酯（PS-ALA）对油酸与铁死亡诱导剂（OA/erastin）联合诱导的HepG2细胞铁死亡的改善作用，并基于Nrf2/GPXMK-22064信号通路进一步探索其潜在分子机制。方法 采用1mmol的OA和10μmol的erastin联合诱导HepG2细胞发生铁死亡，同时给予ALA、PS和PSGNE-140核磁-ALA干预。油红O染色观察HepG2细胞脂肪变性程度；Hoechst/PI双染评价铁死亡发生；蛋白免疫印迹检测铁死亡相关蛋白Nrf2、GPX4、HO-1、NQO1及ptgs2的表达水平；荧光探针检测细胞内ROS与脂质过氧化物水平。结果 与Control组相比antibiotic pharmacist，OA/erastin组细胞内有大量脂质沉积，ROS和脂质过氧化物显著增多，发生明显铁死亡。PS-ALA干预显著减轻OA/erastin诱导的HepG2细胞脂质沉积、减少细胞ROS与脂质过氧化物产生，抑制铁死亡。进一步的分子机制研究表明PS-ALA显著上调HepG2细胞Nrf2及其靶基因GPX4、HO-1与NQO1的蛋白表达水平。结论 PS-ALA能有效抑制OA/erastin诱导的HepG2细胞铁死亡，其分子机制可能与上调Nrf2/GPX4通路有关。[营养学报，2023,45(1):63-69]

柑桔皮是柑桔罐头加工业副产物,富含橙皮苷等黄酮类活性化合物,其综合利用对柑桔产业的发展具有重要意义。传统方法从柑桔皮渣中提取橙皮苷需要用到有机溶剂,并进一步利用盐酸等强酸来水解得到具selleck HPLC有更高活性的橙皮素。课题组前期研究发现,基于氯化胆碱/有机酸/H_2O体系的酸性低共熔溶剂(Ac DES)对黄酮类化合物具有很强的溶解作用,且可催化水解其糖苷键生成对应的苷元。目前,尚无基于食品添加剂的葡萄糖/有机酸/H_2O的Ac DES体系物化特性测定和应用的研究。因此,本文首先构建了基于葡萄糖/有机酸/H_2O的AMultiplex Immunoassaysc DES体系,完善了三元体系相图,并测定了体系在不同温度下的物化特性和模型参数。其次,以橙皮苷为模型化合物,研究了其在两种Ac DES中的降解动力学和热力学模型参数,阐述了橙皮苷的水解机理和与Ac DES物化特性之间的关系。最后,将Ac DES应用于柑桔果皮渣中提取和制备橙皮素,通过单因素和响应面实验进行了条件优化。论文结果丰富了对葡萄糖/有机酸类Ac DES特性的认识,同时为柑桔皮渣的高值化利用和橙皮素制备过程的绿色化提供了新的方法。本论文的主要研究内容和结论如下:首先,研究了两套基于葡萄糖的Ac DES体系(葡萄糖/柠檬酸/H_2O,葡萄糖/苹果酸/H_2O)的制备及物化特性与模型。三元相图结果显示,在80℃和0.1 MPa条件下,两套体系均相区均靠近在有机酸含量高的区域,而柠檬酸体系的均相区范围比苹果酸体系小。测定了均相区关键组成Ac DES的粘度、密度、酸度和溶剂化显色参数。对不同温度下(T=20、40、60、80℃)粘度和密度数据建模,拟合出了温度-粘度模型和温度-密度模型参数。在25℃下,葡萄糖/苹果酸/H_2O(Glucose-H_2O-Malic)体系H_0范围为2.20±0.05～3.01±0.26、E_T(NR)范围为44.42±0.00～47.68±0.00;葡萄糖/柠檬酸/H_2O(Glucose-H_2O-Citric)H_0范围为2.01±0.00～2.50±0.06;E_T(NR)范围为44.56±0.00～47.76±0.00。在相同水分含量下,Glucose-H_2O-Citric的粘度、密度和酸度均高于Glucose-H_2O-Malic体系,但体系的氢键强度和极性则相反。其次,测定了不同Ac DESs对橙皮苷的溶解和水解特性的影响。通过HPLC法建立橙皮苷和橙皮素的标准曲线,精密度和检出限分别为0.48%和0.20 ng/m L。测定25℃下9个Glucose-H_2O-Malic体系和8个Glucose-H_2O-Citric体系中橙皮苷的溶解度,其中M5(葡萄糖:水:苹果酸=2:15:8)和C6(葡萄糖:水:柠檬酸=3:23:7)溶解度最大,分别为1.20±0.00 mg/m L和1.15±0.05 mg/m L,均高于无水乙醇中的溶解度。溶解度与Ac DES的密度和E_T(NR)相关性最大,所有Ac DESs的溶解度均高于纯水,且苹果酸体系的Ac DESs溶解度高于柠檬酸体系。测定了橙皮苷在M5和C6中不同温度下(70、80、90和100℃)降解动力学和过程的热力学参数。结果显示,两种溶剂中均符合一级反应动力学规律,且降解速率M5>C6。对于M5溶剂体系,t_(1/2)分别为0.35(100℃)、1.99(90℃)、6.17(80℃)、16.43 h(70℃);70-100℃、70-80℃、90-100℃的温度系数Q_(10)分别为3.61,2.66和5.69;过程热力学参数吉布斯自由能ΔG在89.97-93.47 k J/mol范围内。对C6溶剂体系,t_(1/2)分别为0.52(100℃)、2.86(90℃)、8.06(80℃)、29.37 h(70℃);70-100℃、70-80℃、90-100℃的温度系数Q_(10)分别为3.84,3.64和5.51;过程热力学参数吉布斯自由能ΔG在91.18-95.13 k J/mol范围内。橙皮苷在Ac Dhttps://www.selleck.cn/products/d-lin-mc3-dma.htmlES中的降解转化属于需要较高的活化能的吸热反应,是一个利于熵的非自发反应。证明了橙皮苷的降解转化效率与Ac DESs的Hammett酸度与粘度等物性相关性最大,橙皮苷在柠檬酸体系中降解需要更高的活化能。最后,采用Glucose-H_2O-Malic(M5)溶剂从桔皮渣中提取橙皮苷并进一步制备橙皮素。通过单因素实验表明Glucose-H_2O-Malic优于Glucose-H_2O-Citric体系,得率分别为3.326±0.001%和3.060±0.047%。通过响应面法优化的提取条件:溶剂M5、提取时间3 h、提取温度60℃、料液比为1:40 g/m L。进一步将含有橙皮苷的提取液加热转化优化的条件为100℃下加热转化4 h,橙皮素的含量为13.65±0.01 mg/g,转化率为95.58±0.04%。通过DPPH自由基清除率和铁离子还原能力实验,验证了加热转化后橙皮素提取物抗氧化能力优于橙皮苷提取物。

目的 观察富血小板血浆在口腔种植骨再生中的应用效果。方法 将80例口腔骨损患者随机分为对照组(人工骨粉行种植体骨增量干预)和观察组(富血小板血浆行骨增量干预)各40例。两组均行常规口腔种植骨，术后均随访观察6个月。术后1天对患者临床疗效进行评估并比较；术后6个月对两组种植骨组织学指标、骨缺损再生指标进行监测并比较。对两组术后6个月内的并发症发生率进行比较。结果 术后1天，观察组临床总有效率高于对照组(P<0.05);术后6个月，观察组骨组织面积大于对照组(P<0.05);两组结缔组织面积、人工骨粉残留面积比较无差异(P>0.05);术后6个月，观察组出血指数、探针深度、附着丧失均明显GNE-140纯度低于对照组，而植骨高度、成骨厚度高于对照组患者(P<0.05);观察组术后6个月内并发症率低于对照组(P<0.05)。结论 富血小板血浆可有效提升PLX4032使用方法口腔种植骨再生效果medical legislation，且降低种植骨并发症率，是提升口腔种植骨疗效及安全性的有效措施。

目的:探讨健脾润肤汤辅助常规西药治疗成人特应性皮炎(AD)的临床疗效及对患者症状改善、皮肤屏障功能的影响。方法:选取某院收治的94例成人AD患者，根据药物host immune response治疗方案不同分为西药组和中药辅助组，每组47例。西药组采用氯雷他定片、他克莫司软膏常规西药治疗，中药辅助组在西药组治疗基础上，采用健脾润肤汤辅助治疗。比较2组临床疗效、治疗前和治疗4周后中医证候积分、症状改善、皮肤屏障功能指标[角质层含水量、皮脂含量、经皮水分丢失(TEWL)、鳞屑中不成熟角质套膜(CE)]、皮肤病生活质量(DLQI)评分、不良反应发生率。结果:中药辅助组临床总有效率(93.62%)高于西药组(76.60%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗4周后，中药辅助组中医证候积分、皮损/瘙痒/皮肤干燥程度评分、DLQI评分、TEWL、CE[腹胀便溏(1.32±0.66)分、乏力(1.28±0.58)分、入睡困难(1.09±0.72)分、皮肤瘙痒(1.23±0.73)分、皮损程度(2.24±0.26)分、瘙痒程度(2.43±0.29)分、皮肤干燥程度(2.38±0.34)分、DLQI(5.78±1.14)分、TWEL(12.63±3.04)g/(h·m~2)、CE(40.22±5.34)%]低于西药组[(1.81±0.71)分、(1.74±0.67)分、(1.68±0.63)分、(1.57±0.68)分、(2.87±0.27)分、(3.01±0.22)分、(3.24±0.35)分、(8.69±2.37)分、(18.49±4.35)g/(h·m~2)、(48.17±6.03)%],差异有统计学意义(P<0.05);中药辅助组的角质层含水量、皮脂含量[(26.34±5.13)%、(91.07±10.22)μg/cm]高于西药组[(20.28±4.76)%、(82.74±11.38)μg/cm],差异有统计学意义(P<0.05);中药辅助组不良反应发生率(8.51%)与西药组(4.26%)比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾润肤汤辅助常规西药治疗成人AD可Adavosertib使用方法进一步提高疗效，有效改善临床症状和皮肤屏障功能，提高患者生活质量，且ROCK抑制剂具有较高的安全性。

目的:分析老年稳定性心绞痛伴房颤在双联抗血小板治疗过程中拔牙出血的发生率及影响因素。方法:选择我院收治的符合入组标准的120稳定性心绞痛伴房颤患者作为研究对象，随机分为观察者和对照组。观察组患者在拔牙期间不停药，对照组患者在拔牙前后各停药1周。调查分析患者高血压、牙龈指数、牙齿活动度、拔牙位、拔牙时间、双联抗栓治疗时间等临床资料。采用Spearman相关性分析术前停用阿司匹林联合氯吡格雷immune status双联抗血小板治疗与患者拔牙出血的关系，采用Logistics多元回归模型分析拔牙出血发生的影响因素。结果:观察组患者即刻出血、延迟出血和总出血率均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。停用阿司匹林联合氯吡格雷双联抗血小板治疗与患者拔牙手术时的即刻出血、延迟出血和总出血率均成明显正相关关系(P<0.05)。拔牙出血和未出血患者停止双联抗血小板治疗、双联抗栓治疗时间、高血压、拔牙时间具有显著差异(P<0.05)。停止双RSL3溶解度联抗血小板治疗是拔牙出血的独立保护因素，双联抗栓治疗时间长、合并高血压、拔牙时间长是拔牙出血的独立危险因素(P<0.05)。结论:老年稳定性心绞痛伴房颤停止双联抗血小板治疗后拔牙出血率显著降低，且停止双联抗GSK2118436细胞培养血小板治疗、双联抗栓治疗时间、未合并高血压和缩短拔牙时间是拔牙出血的独立保护因素。

目的：探讨胰腺癌组织中剪接因子2/选择性剪接因probiotic persistence子(SF2/ASF)的表达，及其与抑癌基因P53(突变型)、增殖标志物Ki67和患者临床病理Tamoxifen采购指标之间的相关性。方法：采用GEPIA数据库分析350例胰腺癌组织和癌旁正常组织中SRSF1基因(SF2/ASF的编码基因)的表达差异，以及SRSF1与TP53和MKi67(Ki67的编码基因)的相关性；采用免疫组织化学法检测60例胰腺癌组织及对应的癌旁正常组织中SF2/ASF、突变型P53和Ki67蛋白的表达，采用Pearson相关性分析研究SF2/ASF与突变型P53和Ki67的相关性，以及SF2/AFS蛋白表达水平与胰腺癌患者临床病理学指标的关系；采用Cox比例风险回归模型进行预后分析。结果：GEPIA数据库分析结果表明，与癌旁正常组织相比，SRSF1基因在胰腺癌组织GDC-0973研究购买中的表达水平显著升高(P<0.01),SRSF1与TP53和MKi67的表达水平均相关(r分别为0.28和0.32，均为P<0.01)；免疫组化检测结果显示，与癌旁正常组织相比，SF2/ASF蛋白、突变型P53和Ki67蛋白在胰腺癌组织中的表达水平显著升高(P<0.01)。Pearson相关性分析结果表明胰腺癌组织中，SF2/ASF蛋白表达水平与突变型P53蛋白及Ki67增殖指数有关(r分别为-0.386和0.275，均为P<0.05)。卡方检验结果表明SF2/ASF在胰腺癌中的表达水平与胰腺癌分化程度、淋巴结转移情况以及有无远端脏器转移有关(均为P<0.01)，与胰腺癌发生部位和TNM分期无明显相关(P>0.05)。Cox风险回归分析表明，SF2/ASF高表达和患者年龄是影响患者总生存期的独立危险因素(均为P<0.01)。结论：SF2/ASF、突变型P53和Ki67蛋白在胰腺癌中高表达，且SF2/ASF的表达与突变型P53和Ki67具有相关性，提示SF2/ASF有望成为胰腺癌诊治的新靶点。

目的:瘙痒是常见于多种疾病的一种顽固症状,严重影响患者健康和生活质量,其治疗和护理已成为重点关注的临床问题。《本草纲目》等典籍记载,构树根皮被广泛用于治疗皮炎、癣症等皮肤病。现代研究亦表明构树根皮具有抗炎、抗菌等多种作用,但其止痒作用及相关机制尚未明确。本研究旨在考察构树根皮的止痒作用,并探讨可能的作用机制,为临床治疗和护理瘙痒患者提供理论依据和新的可能。方法:1.构树根皮的乙醇回流提取及工艺优化采用乙醇回流法提取构树根皮;以总黄酮和多酚为指标,采用响应面法优化构树根皮乙醇提取物的提取工艺。2.构树根皮乙醇提取物的止痒有效萃取部位筛选依次采用乙酸乙酯、水饱和正丁醇对构树根皮乙醇提取物进行萃取;将小鼠分为正常组、模型组、乙醇提取物组、乙酸乙酯萃取物组、正丁醇萃取物组和水部位萃取物组,将不同E7080提取物制备成水凝胶,连续在小鼠皮肤局部涂抹7天。末次给药后,除正常组外,其余组小鼠通过皮下注射4-氨基吡啶(4-Aminopyridine,4-AP)诱导急性瘙痒,观察小鼠抓挠行为变化,记录并统计其30 min抓挠总次数,比较构树根皮乙醇提取物不同萃取部位的止痒效果;采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)和超高液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(Ultra-High performance liquid chromatography and quadrupole time-of-flight mass spectromete,UPLC-QTOF-MS/MS)初步分析有效萃取部位的物质成分。3.有效萃取部位止痒作用的评价及作用机制研究将小鼠分为正常组、模型组和高中低剂量有效萃取部位组,连续局部皮肤涂抹相应水凝胶7天,末次给药后除正常组,其余组小鼠通过皮下注射4-AP和氯喹(Chloroquine,CQ)分别诱发组胺依赖性痒和非组胺依赖性痒,观察小鼠抓挠行为变化,记录并统计其30 min抓挠总次数。将小鼠分为正常组、模型组和高低剂量有效萃取部位组,除正常组,其余组小鼠通过局部连续7天涂抹丙酮、乙醚混合液和蒸馏水(Acetone-ether-water,AEW)建立小鼠慢性瘙痒模型,从造模第4天开始连续涂抹相应水凝胶4天,记录并统计实验第1、3、5和7天小鼠1 h内抓挠总次数;拍照记录小鼠背部造模处皮肤外观变化,采用苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色进行皮肤病理组织学分析;采用酶联免疫法检测小鼠血清和皮肤中白介素(Interleukin-4,IL-4)、IL-6、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量;Western blot法分析核因子κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)亚体p65、磷酸化p65(p-p65)和瞬时受体电位香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)的表达情况;在此基础上再次建立AEW诱导小鼠慢性瘙痒模型,分为正常组、模型组、TRPV1抑制剂组和有效萃取部位联合TRPV1抑制剂组,记录统计各组抓挠次数并采用Western blot检测TRPV1的表marine-derived biomolecules达。结果:1.构树根皮乙醇回流提取的最佳工艺构树根皮乙醇回流提取的最佳工艺为:提取温度75°C、提取时间117 min、料液比1:16(g/m L)、乙醇浓度70%。在该条件下,总黄酮、多酚的实际提取量分别为(23.93±0.30)mg/g和(14.69±0.56)mg/g。2.构树根皮乙醇提取物的止痒有效萃取部位对构树根皮乙醇提取物进一步萃取,得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水部位萃取物。与正常组相比,模型组小鼠30 min抓挠总次数明显增多(P<0.05);与模型组相比,构树根皮乙醇提取物组和正丁醇萃取物组小鼠从第10 min开始抓挠行为明显减少,且30 min抓挠总次数显著低于模型组(P<0.05);而乙酸乙酯萃取物组和水部位萃取物组小鼠的抓挠次数与模型组相比没有明显差异(P>0.05)。正丁醇萃取物的指纹图谱中存在10个主要峰,其中7号峰保留面积最大,占36.01%,经UPLC-QTOF-MS/MS分析,该物质为绿原酸。3.有效萃取部位的止痒作用及作用机制在4-AP和CQ分别诱导的两种急性瘙痒模型中,模型组小鼠高频次的抓挠行为明显多于正常组,且25 min后抓挠次数才开始出现减少,其30 min抓挠总次数显著高于正常组小鼠(P<0.05);外用正丁醇萃取获悉更多物中、高剂量后,小鼠抓挠现象明显缓解,第10 min或第15 min抓挠次数开始下降,30 min抓挠总次数均显著低于模型组(P<0.05),且该作用随剂量增加而增强;而低剂量正丁醇萃取物组小鼠的抓挠次数与模型组相比没有明显差异(P>0.05)。AEW诱导的慢性瘙痒实验中,与正常组相比,模型组小鼠7天内抓挠次数持续增加(P<0.05),皮肤干燥起皮且表皮厚度明显增加(P<0.05),同时小鼠血清和皮肤中IL-4、IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05),皮肤中p-p65和TRPV1的表达明显上升(P<0.05)。与模型组比,正丁醇不同剂量干预后小鼠的抓挠次数从第5天开始明显下降,皮肤干燥程度减轻,且表皮厚度明显减少(P<0.05);小鼠血清和皮肤IL-4、IL-6和TNF-α含量也明显降低(P<0.05),皮肤中p-p65和TRPV1的表达明显减少(P<0.05)。与单独使用TRPV1抑制剂组相比,TRPV1抑制剂联合正丁醇萃取物组的小鼠实验末期1 h内的抓挠次数更少(P<0.05),但两组皮肤中TRPV1表达无差异(P>0.05)。结论:1.正丁醇萃取物是构树根皮止痒的有效萃取部位,其含量最高的物质成分为绿原酸。2.构树根皮正丁醇萃取物对4-AP和CQ引起的组胺依赖性及非组胺依赖性急性瘙痒均有抑制作用,同时还可缓解AEW引起的慢性瘙痒,并减轻小鼠皮肤干燥程度和表皮增厚,这可能与抑制NF-κB通路、调节炎症反应,以及减少皮肤TRPV1表达和痒觉传导有关。

目的：探讨肽酶M20结构域1(peptidase M20 domain containing 1,PM20D1)在人弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphomas,DLBCL）细胞中的表达及其与缺氧相关性和预后的关系。方法：通过GDC、TCGA、GTEx公共数据库分析PM20D1表达对DLBGSI-IXCL细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其与患者预后的关系。通过对不同分组患者的富集分析及PM20D1与CD274相关性分析验证PM20D1是否为DLBCL的缺氧相关基因；采用ChEA、ENCODE和hTFtarget数据库分析上游调控PM20D1表达的转录因子（TF）和miRNA，以及差异表达PM20D1与化疗药物敏感性的关系。采用WB法检测PM20D1在正常淋巴细胞和DLBCL细胞中的表达水平，通过设计PM20D1的siRNA序列敲减目的基因，并采用qPCR和WB法检测验证SUDHL2和interface hepatitisSUDHL10细胞中PM20D1的敲减效率，采用CCK-8法和Transwell实验分别检测敲减PM20D1对细胞增殖和迁移能力的影响，流式细胞术selleck合成检测细胞凋亡水平。结果：PM20D1在DLBCL组织中高表达且患者预后差（P<0.05或P<0.01）；富集分析显示，PM20D1高表达组与ssGSEA高分组主要涉及细胞电耦合通讯、甘油三酯代谢过程调节和细胞质翻译起始复合物过程，且PM20D1表达与免疫检查点CD274表达呈正相关（P<0.01,r=0.757）。在SUDHL2和SUDHL10细胞中敲减PM20D1后，细胞的增殖和迁移均显著降低（均P<0.05），细胞凋亡明显增加（P<0.05）。结论：PM20D1基因在DLBCL组织和细胞中高表达且与患者预后密切相关；PM20D1可能通过促进DLBCL细胞的增殖、迁移并抑制凋亡，从而促进DLBCL的发生发展。