Achr receptor

目的：评价加味香砂六君子汤联合标准四联疗法治疗幽门螺杆菌（Hp）感染相关性胃炎的临床效果。方法：选择2020年5月—2021年5月在我院接受治疗的Hp感染相关性胃炎患者130例进行观察，按随机数表法分成观察组及对照组，各65例。对照组采取标准四联疗法治疗，观察者应用加味香砂六君子汤联合标准四联疗法。两组均治疗1个月，对比https://www.selleck.cn/products/PLX-4032.html两组疗效、症状积分以及Hp清除率。结果：观察组总有效率（98.46%,64/65）明显高于对照组（86.15%,56/65）(P<0.05)。治疗后两组症状积分明显低于治疗前，且观察组较对照组更低（P<0.05）。观察组Hp清除率（96.92%,63/65）明显高于对照组（83.08%,54/65）(P<0.0Ferrostatin-1作用5)。结论：加味香砂六君子汤联合标准四联疗法治疗幽门螺杆菌感染相关性胃炎，临床效果优于单纯四联疗法，且可明显改善临床症状，并能提升Hp清除率，值得临床Rational use of medicine推广。

目的:本研究探讨2型糖尿病(Type 2 diabetesinfections in IBD patients,T2DM)患者血清铁蛋白(Serum ferrition,SF)水平与非酒精性脂肪肝疾病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的相关性,为临床上T2DM合并NAFLD患者的诊治提供思路。方法:本研究选取2021年7月至2022年9月于兰州大学第一医院内分泌科住院的974名T2DM患者,收集T2DM患者SF水平、一般资料及其它生化指标,腹部超声评估NAFLD情况。T2DM患者根据是否伴有NAFLD分为NAFLD组和no-N AFLD组,比较不同性别、年龄、BMI水平的患者两组之间SF水平的差异。其次,将T2DM患者分为高铁蛋白组和非高铁蛋白组;最后,根据SF四分位水平,将T2DM患者分为T_1-T_4组,比较各组患者之间NAFLD患病率的差异;二元Logistic回归分析SF与T2DM患者发生NAFLD风险的独立相关性。结果:(1)T2DM患者NAFLD组SF水平高于no-NAFLD组[167.65(98.78,266.50)ng/m L vs.134.90(75.20,224.88)ng/m L,P<0.05]。随着SF水平的增加,NAFLD的患病率呈上升趋势。以NAFLD为因变量,以T_1组为参照组,二元Logistic回归分析提示,调整混杂因素后,T_3组和T_4组患者SF与NAFLD的发生风险显著正相关[OR=1.613,95%CI(1.053,2.472)、OR=1.567,95%CI(1.003,2.448),P均<0.05]。(2)男性T2DM患者NAFLD组SF水平高于no-NAFLD组[200.00(121.40,323.00)ng/m L vs.150.60(85.90,260.00)ng/m L,P<0.05]。随着SF水平的增加,NAFLD患病率逐渐升高。以NAFLD为因变量,以T_1组为参照组,二元Logistic回归分析提示,调整混杂因素后,男性T2DM患者T_2、T_3组和T_4组SF与NAFLD的发生风险显著正相关[OR=1.834,95%CI(1.048,3.209)、OR=1.886,95%CI(1.068,3.332)、OR=1.909,95%CI(1.054,3.459),P均<0.05]。(3)青年、中老年男性T2DM患者NAFLD组SF水平[334.00(194.00,633.00)ng/m L、195.90(108.23,295.00)ng/m L]均高于no-NAFLD组[126.85(85.20,287.25)ng/m L、154.00(85.90,260.00)ng/m L,P均<0.05];青年男性NAFLD组SF水平高于中老年男性N AFLD组[334.00(194.00,633.00)ng/m L vs.195.90(108.23,295.00)ng/m L,P<0.05]。与非高铁蛋白组比较,青年男性高铁蛋白组NAselleck合成FLD的患病率显著升高(40.7%vs.59.3%,P<0.05);与中老年男性高铁蛋白组比较,青年男性高铁蛋白组NAFLD的患病率显著升高(73.6%vs.43.2%,P<0.05)。SF根据四分位数水平分组后,中老年男性T_3组NAFLD的患病率显著高于T_1组(47.2%vs.27.8%,P<0.05)。以NAFLD为因变量,以非高铁蛋白组为参照组,调整混杂因素后,二元Logistic回归分析提示青年男性高铁蛋白组NAFLD发生风险显著增加[OR=9.001,95%CI(1.518,53.366),P<0.05]。以NAFLD为因变量,以T_1组为参照组,调整混杂因素后,中老年男性T_3组SF与NAFLD的发生风险显著正相关[OR=1.828,95%CI(1.017,3.286),P<0.05]。(4)BMI<24kg/m~2、超重及肥胖的男性T2DM患者NAFLD组SF水平[205.50(102.65,301.50)ng/m L、199.00(123.00,334.00)ng/m L]均高于no-NAFLD组[152.30(82.40,280.50)ng/m L、147.10(89.35,252.00)ng/m L,P均<0.05]。与非高铁蛋白组比较,超重及肥胖男性高铁蛋白组NAFLD患病率显著升高(68.2%vs.50.2%,P<0.05);与BMI<24kg/m~2患者高铁蛋白组比较,男性超重及肥胖患者高铁蛋白组NAFLD患病率显著增加(68.2%vs.25.6%,P<0.05);SF水平根据四分位数水平分组后,BMI<24k g/m~2男性T_3组患者NAFLD的患病率显著高于T_1组(40.00%vs.18.00%)、超重及肥胖男性T_2和T_4组患者NAFLD的患病率显著高于T_1组(57.70%和59.90%vs.35.10%,P均<0.05)。以NAFLD为因变量,以非高铁蛋白血症为参照组,二元Logisti c回归分析提示,调整混杂因素后,男性超重及肥胖患者高铁蛋白组NAFLD发生风险显著增加[OR=2.573,95%CI(1.133,5.841),P<0.05];以T_1组为参照组,调整混杂因素后,男性BMI<24kg/m~2T_3组患者、超重及肥胖T_2组和T_4组患者NAFLD发生风险显著增加[OR=2.696,95%CI(1.080,6.733)、OR=2.044,95%CI(1.046,3.995)和OR=2.777,95%CI(1.392,5.543),P均<0.05]。(5)女性T2DM患者NAFLD组SF水平低于男性selleck激酶抑制剂NAFLD组[129.00(82.25,196.00)ng/m L vs.200.00(121.40,323.00)ng/m L,P<0.05];但女性NAFLD组和no-NAFLD组之间SF水平无统计学差异,SF与NAFLD发生风险也无相关性。根据年龄进行分组后,青年女性T2DM患者NAFLD组SF水平[117.00(76.98,222.35)ng/m L]高于no-NAFLD组[24.35(3.10,121.40)ng/m L,P<0.05];与中老年女性高铁蛋白组比较,青年女性高铁蛋白组NAFLD的患病率显著升高(88.9%vs.43.8%,P<0.05)。女性T2D M患者不同BMI水平下NAFLD组和no-NAFLD组SF水平无统计学差异;女性超重及肥胖患者高铁蛋白组NAFLD患病率高于BMI<24kg/m~2组(63.2%vs.33.3%,P<0.05)。结论:男性T2DM合并NAFLD患者SF水平显著升高;随着SF水平增加,NA FLD患病率逐渐升高,SF为男性T2DM患者发生NAFLD的独立危险因素。女性T2DM患者中SF与NAFLD发生风险无独立相关性。

经过多年的科学研究人们发现,天然药用植物抗菌成分与化学抗菌剂相比具有效果显著、毒副作用小、不易产生耐药性、抗菌靶点多样等优势。本论文利用琼脂糖为基质材料,加入一种近红外光(NIR)吸收剂鞣酸铁和药用植物抗菌成分盐酸小檗碱,构建了一种具有光热效应协同抗菌的盐酸小檗碱抗菌复合水凝胶(ATB复合水凝胶)。该ATB复合水凝胶制作方法操作简单,工艺条件温和,采用常规设备即可制备获得,具体研究内容及结果如下:(1)本研究利用SCH772984采购了一种天然高分子材料琼脂糖为ATB复合水凝胶的基质成分,并将鞣酸、三氯化铁与盐酸小檗碱共同组合,构建了一种以盐酸小檗碱为抗菌剂的复合水凝胶敷料用于伤口感染部位的抗菌性能研究。筛选鞣酸与Fe~(3+)的比例后制备的ATB复合水凝胶具有较好的弹性和丰富的可加工性,扫描电镜和傅里叶红外光谱分析实验显示ATB复合水凝胶已成功构建,并且负载盐酸小檗碱并不会对水凝胶本身产生不利影响。对ATB复合水凝胶的溶胀性能、药物释放、光热性能、溶血性相继进行了研究,实验结果表明,ATB复合水凝胶具有优良的溶胀性能,在不同p H条件下的PBS中溶胀率最高能达到2510倍。其次,加入近红外光照可以实现类似于“开/关”的作用达到对ATB复合水凝胶中盐酸小檗碱的可控释放。在近红外光照下10 min,ATB复合水凝胶组分中的光吸收剂便能将光能进一步转化为热能,将温度快速提高到53℃以上,以此达到对细菌的物理损伤(热破坏)。更重要的是,ATB复合水凝胶的溶血率符合国家对生物材料的安全标准。因此,此ATB复合水凝胶可作为伤口敷料材料进一步应用。(2)通过平板涂布法和形态学表征法对ATB复合水凝胶的体外抗菌性能进行研究,实验结果表明,经ATB复合水凝胶组处理的菌落数与对照组相比减少了76.85%,加入近红外光照射的ATB+NIR复合水凝胶组处理的菌落数减少了97.15%,展现出非常显著的体外抗菌效果,而且近红外光照射明显提升了ATB复合水凝胶的抗菌效果。对ATB复合水凝胶处理过的金黄色葡萄球菌进行扫描电镜分析,分析结果表明,用ATB复合水凝胶处理后的金黄色葡萄球菌发生了明显的形变,能清楚地观察到许多皱缩破裂的菌体,加入近红外光照射的ATB+NIR复合水凝胶组与其他几组相比显示出最好的抗菌效果,金黄色葡萄球菌菌体基本解体破碎,完整度Medicare Provider Analysis and Review最少。从体外抗菌实验的结果可以看出本实验制备的ATB复合水凝胶具有较好的光热协同增强抗菌的作用。(3)对ATB复合水凝胶进行动物伤口感染抗菌实验,实验结果表明,ATB复合水凝胶可以有效减少伤口处的金黄色葡萄球菌感染并且还能促进皮肤创面的愈合。由于近红外光照射能够实现ATB复合水凝胶对盐酸小檗碱的控释,实际应用中能够根据具体需求进行可控释放的调整,这样可以有效减少持续释放导致的伤口处有效药物局部积累。其次,组织学分析结果显示此ATB复合水凝胶不会对小鼠的主要器官造成任何损伤或者病变。由此可见,NSC 127716价格这种ATB复合水凝胶在治疗金黄色葡萄球菌引起的感染、促进皮肤创伤愈合方面具有显著效果,可运用于功能敷料、载药水凝胶等领域,有望为智能光热抗菌敷料的研发提供新的思路和方法。

本研究以荞麦蛋白胶体颗粒为乳化剂制备了不同藜麦皂苷添加量、不同油含量的Pickering乳液。首先对九组乳液的性质NSC125066配制进行表征,探究皂苷添加量和油含量对乳液性质的影响。选择了不同皂苷添加量的三组乳液,以粒径、流变特性、包埋率、乳析指数和微观结构为指标,探究温度、盐浓度、p H和贮藏条件等对乳液稳定性的影响。模拟体外消化试验筛选出最佳的缓释递送乳液体系。通过体外抗菌试验探究负载藜麦皂苷Pickering乳液经过消化后对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌的抗菌特性。其结果如下:1.负载藜麦皂苷Pickering乳液的制备及性质分析以荞麦蛋白胶体颗粒为固体乳化剂制备了皂苷添加量分别为1%、3%、5%(w/v)且油含量分别为60%、70%、80%(v/v)的九组Pickering乳液,并对乳液的包埋率、色度、粒径、微观结构、流变特性、Zeta电位和苦味变化进行了表征。结果发现油water remediation含量80%的三组乳液包埋率较高,具有较好的类固体特性、凝胶结构和粘度。九组乳液的粒径均较小,其中皂苷添加量1%,油含量80%(1-80%)的乳液的粒径最小(2.76μm)。乳液的微观结构随油含量和皂苷添加量的变化而变化,其中1-80%组乳液的微观结构最均一、致密。皂苷添加量少、油含量多的乳液具有较高的Zeta电位值。1-80%组乳液能够有效的遮盖苦味且没有苦味回味。油含量和皂苷添加量均会对乳液的性质产生影响。油含量80%的三组乳液具有较好的性质,其中1-80%组乳液最佳。2.负载藜麦皂苷Pickering乳液的稳定性研究制备皂苷添加量分别为1%、3%、5%(w/v),且油含量为80%(v/v)的三组乳液,并进行不同条件的处理。以乳液的粒径、流变特性、包埋率、微观结构和乳析指数为指标,探究三组乳液的稳定性。结果表明皂苷添加量1%的乳液在不同条件下能够保持稳定的状态,具有较好的热稳定性、离心稳定性、盐浓度稳定性、p H稳定性selleck以及贮藏稳定性。3.负载藜麦皂苷Pickering乳液的体外消化及抗菌特性研究制备了皂苷添加量分别为1%、3%、5%(w/v)、且油含量分别为60%、70%、80%(v/v)的九组乳液。通过模拟体外消化试验测定了消化过程中皂苷释放百分比、游离脂肪酸释放和皂苷的生物利用度。结果发现1-80%组乳液释放皂苷缓慢,皂苷最终释放百分比、游离脂肪酸释放量和生物利用度较高,是最适合作为缓释体系的乳液。结合乳液稳定性结果选择1-80%组乳液进行抗菌试验。通过测定抑菌圈直径、最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)、动态杀菌曲线和细胞内容物释放情况验证了负载皂苷的乳液经过消化后对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肠炎沙门氏菌均具有抗菌作用,且抗菌作用具有持久性,其中对金黄色葡萄球菌的抗菌效果最佳。1-80%组乳液在缓释递送和抗菌方面具有较高的应用潜力。

目的 观察链霉蛋白酶联合四联方案在根除幽门螺杆菌(Hp)失败补救治疗中的应用效果。方法 选取Hp感染初始治疗失败的100例患者为研究对象。100例患者分为对照组(50例)和观察组(50例), 2组接受为期14 d的治疗。对照组给予艾司奥美拉唑肠溶片、阿莫西林胶囊、呋喃唑酮片、胶体果胶铋胶囊。观察组在对照组基础上给予链霉蛋白酶颗粒及碳酸氢钠散。计算意向治疗(ITT)分析和符合方案(PP)分析时Hp的根除率。记录2组治疗前后的症状及药物不良反应情况。结果 对照组中18例成功根除，ITT分析根除率为36%, PP分析根除率为36%。观察组中，37例患Right-sided infective endocarditis者的~(14)C呼气试验结果呈阴性，ITT分析的根除率为74%, TT分析根除率为74%。2组根除率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。2selleck化学组依从性比较，差异无统计PF-02341066抑制剂学意义(P>0.05)。2组根除前后腹痛症状改善情况比较，差异有统计学意义(P<0.05)。2组药品的不良反应情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 链霉蛋白酶联合四联疗法的补救治疗方案可提高初次根除失败的Hp感染患者的根除率。

目的:胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤之一,其侵袭能力强,难以完全切除。现有的治疗方法只能适当延长患者的生存期,因此,寻找新的治疗手段已成为当前研究的主要目标。近年来许多的研究selleck NMR表明eEF2k与各种肿瘤的发生发展密切相关,因此,探索eEF2k对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,这或许可为治疗提供新的靶点和思路。方法:(1)选取正常星形胶质细胞HA1800作为对照组,胶质瘤细胞株U87及T98作为实验组,通过实时荧光定量PCR检测正常星形胶质细胞和胶质瘤细胞中eEF2k的m RNA表达情况;通过蛋白免疫印迹法检测正常星形胶质细胞和胶质瘤细胞中eEF2k的蛋白表达情况。(Dorsomedial prefrontal cortex2)利用慢病毒转染胶质瘤细胞株U87及T98,并通过绿色荧光表达丰度检验转染效果、western blot实验来验证转染效率。(3)采用CCK8增殖实验检测U87及T98细胞在不同时间段(0h、24h、48h、72h、96h)增殖能力的变化。(4)通过细胞划痕实验及侵袭实验检测eEF2k对胶质瘤U87及T98细胞迁移能力和侵袭能力的影响。(5)通过体内实验来进一步验证eEF2K对U87胶质瘤细胞成瘤能力的影响:将4周龄的裸鼠饲养一周适应环境后随机分成两组,U87组、U87-sh RNA组,于裸鼠右侧腋下进行注射,每隔5天测量一次瘤体大小,35天后处死剥离瘤体称重。结果:(1)与正常星形胶质细胞HA1800相比,胶质瘤细胞株U87及T98 m RNA和蛋白的表达量有所升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。(2)经过慢病毒转染72h小时后荧光显微镜下可见绿色荧光表达率为80%以上,western blot实验结果显示与sh-con组相比,U87细胞的sh-1组、sh-2组、sh-3组eEF2k蛋白的表达量均明显下降(P<0.001);T98细胞sh-3组eEF2k的表达量下降(P<0.001),而sh-1组、sh-2组细胞与sh-con组相比,蛋白表达无明显差异,且无统计学意义(P>0.05)。(3)CCK8结果显示与sh-con组相比,48h后U87及T98细胞的增殖能力均显著下降,差异具有统计学意义(**P<0.01,***P<0.001)。(4)细胞划痕实验结果显示与sh-con组相比,sh-eEF2K胶质瘤细胞组的划痕愈合率均有所下降,差异具有统计学意义(**P<0.01,***selleckchemP<0.001)。(5)transwell侵袭实验的结果显示sh-con组相比,sh-eEF2K胶质瘤细胞组穿过小室的细胞数量明显减少,差异具有统计学意义(**P<0.01,***P<0.001)。(6)裸鼠成瘤实验敲低eEF2K后和U87组相比,U87-sh RNA组肿瘤的体积及重量均明显减小,差异具有统计学意义(***P<0.001)。结论:eEF2K在胶质瘤细胞中呈高表达,敲低eEF2K能够抑制胶质瘤U87和T98细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

目的 采用网络药理学及分子对接技术探讨寿胎四君子汤调控子宫蠕动波潜在作用靶点和作用机制。方法根据中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）和中药综合数据库（TCMID）筛选寿胎四君子汤的药物活性成分及作用靶点，同Colforsin时利用Gencards和Drug Bank数据库挖掘子宫蠕动波相关Berzosertib生产商靶点，取交集后，得到寿胎四君子汤调控异常子宫内膜蠕动波的潜在作用靶点。利用STRING平台构建潜在作用靶点蛋白相互作用网络，应用Cytoscape软件构建“药物-活性成分-交集靶点-疾病”网络。采用“cluster Profiler”包进行基因本体（GO）功能富集分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。采用Py MOL和Au To Dock软件对核心作用靶点和活性成分单体进行分子对接验证。结果 检索出寿胎四君子汤594个靶点，子宫蠕动波相关靶点90个，得到交集靶点共33个。山柰酚、β-谷甾醇、槲皮素、异鼠李素和7-甲氧基-2-甲基异黄酮为寿胎四君子的主要活性成分单体，内皮型一氧化氮合酶（NOS3）、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、前列腺素合成酶2(PTGS2)、胱天蛋白酶3(CASP3)和前列腺素合成酶1(PTGS1)为核心作用靶点。KEGG通路主要富集在神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、5-羟色胺能突触、肾素分泌、瞬时受体电位（TRP）通道的炎症介质调节、环磷酸鸟苷酸-蛋白激酶G(c GMP-PKG)信号通路和松弛素信号通路等。分子对接显示山柰酚、β-谷甾醇、槲皮素、异鼠李素和7-甲氧基-2-甲基异黄酮均能与核心作用靶点稳定结合。结论 寿胎四君子汤可能靶向NOS3、TRPV1、PTGS2、CASP3和PTGS1等核心基因，调控神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、5-羟色胺能突触、肾素分泌、TRP通道的炎症介质调节、cWestern Blotting Equipment GMP-PKG信号通路和松弛素信号等通路，发挥调控子宫蠕动波的作用。

目的：运用血Navitoclax配制氧水平依赖磁共振（BOLD-MRI）评估肾衰Ⅱ号方对原发性肾小球肾炎（PGN）引起的慢性肾脏病（CKD）3-4期脾肾两虚、湿热瘀阻型患者肾组织氧合水平的影响。方法：78例PGN(CKD3-4期)患者随机分为对照组与治疗组，每组39例。两组均给予西医基础治疗，治疗组加用肾衰Ⅱ号方，对照组加用尿毒清颗粒，疗程6个月。两组治疗前后检测双肾皮、髓质的有效横向弛豫时间（T2*）、血肌酐（SCr更多）、血尿素氮（BUN）、肾小球滤过率（eGFR）、血浆白蛋白（Alb）、24 h尿蛋白定量（24 h UP）和血红蛋白（Hb），观察治疗前后中医证候及临床疗效。结果：治疗组临床疗效总有效率为82.35%(28/34)，显著高于对照组的55.88%(19/34)(P<0.01)。治疗组倦怠乏力、气短懒言、食少纳呆等中医证候疗效总有效率显著高于对照组（P<0.01,P<0.05）。治疗组治疗后SCr、BUN、24 hUP均较治疗前显著降低（P<0.01,P<0.05），且SCr、BUN显著低于对照组（P<0.01,P<0.05）；治疗组治疗后Alb、eGFR均较治疗前显著升高（P<0.05,P<0.01），且eGFR显著高于对照组（P<0.01）。治疗组治疗后双侧肾皮质、髓质T2*均较治疗前显著升高（P<0.01），且均显著高于对照组（P<0.05）。治疗组治疗前、后双侧肾皮质及髓质T2*与eGFR存在显著Oncologic safety正相关（P<0.01,P<0.05）。结论：肾衰Ⅱ号方联合西药治疗能显著改善PGN(CKD3-4期)脾肾两虚、湿热瘀阻型患者的临床症状、肾功能和肾组织氧合水平，并且其肾功能改善可能与肾组织氧合水平的提高有关。

背景：幽门螺杆菌（Hp）感染导致medical education胃黏膜活动性炎症，炎症组织一氧化氮（NO）产生增加。呼出气中的NO浓度与胃炎和Hp感染的关系尚不明确BLZ945供应商。目的：探讨Hp感染对气道炎症指标呼出气一氧化氮（FeNO）的影响以及FeNO与胃炎严重程度的关系。方法：连续纳入2021年3月—2021年12月在北京大学第一医院行~(13)C-尿素呼气试验（~(13)C-UBT）、既往未接受过Hp根除治疗的成人患者，排除可能影响FeNO的伴随疾病。于~(13)C-UBT检测后2 d内进行FeNO测定。记录接确认细节受胃镜检查者的内镜和病理诊断。Hp阳性者行铋剂四联方案根除治疗，停药6周后复查~(13)C-UBT和FeNO。结果：共102例受检者纳入研究，其中Hp阴性49例，Hp阳性53例。Hp阴性组与阳性组FeNO检测值差异无统计学意义[(8.14±3.12) ppb对(9.21±4.40) ppb, P>0.05]。在所有患者（r=0.085, P=0.398）、Hp阴性患者（r=-0.232, P=0.108）、Hp阳性患者（r=-0.021, P=0.880）中，FeNO与~(13)C-UBT检测值均无相关性。50例成功根除Hp的患者治疗前后FeNO检测值差异无统计学意义[(9.06±4.28) ppb对(7.94±2.84) ppb, P>0.05]。萎缩性胃炎与非萎缩性胃炎组间、轻度活动性胃炎与中重度活动性胃炎组间FeNO检测值差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论：Hp感染与否以及胃黏膜萎缩和炎症活动度对FeNO检测值均无影响。临床工作中无法通过FeNO预测胃内炎症活动度。

[背景]“近端肾小管中心学说”是近几年来糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)的研究热点。我们的前期研究也证实,在早期DKD大鼠的肾脏中发现近端肾小管上皮细胞(proximal renal tubular epithelial cell,PTEC)的凋亡早于肾小球细胞,并且发现了 Bim是引起PTEC凋亡的关键靶点。在DKD中,PTEC的损伤机制除凋亡外,还包括上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT),而既往研究也已证实,早期靶向抑制近端肾小管发生EMT可以逆转肾小管间质纤维化(tubular interstitial fibrosis,TIF),保护 PTEC。传统观念一直认为,EMT这一过程能够令PTEC转变成肌成纤维细胞,从而导致TIF的发生。然而,对于肌成纤维细胞的来源是否是PTEC这一观点饱受争议。有学者认为,肾小管上皮细胞在发生EMT的过程中,并未突破基底膜,而是呈现出一种“部分 EMT(partial epithelial to mesenchymal transition,PEMT)”的状态,也就是说肾小管上皮细胞获得了间质细胞的特性及运动表型,但并未完全突破基底膜,转化成肌成纤维细胞。不论是凋亡,亦或是PEMT,他们均是DKD早期近端肾小管细胞损伤的标志性事件。我们前期致力于研究PTEC在DKD中损伤的分子机制,结果发现Bim是介导近端肾小管上皮细胞凋亡的关键因子,明确了 Bim/NFAT2介导的管球交流在DKD中发挥了重要的作用。故,本课题在前期研究的基础上,探讨Bim在介导PTEC凋亡的方向之外是否还参与影响PEMT的发生,进一步完善Bim介导PTEC损伤的调控网络,为防治DKD提供新的思路和方向。[目的]1、利用PTEC条件性敲除Bim小鼠构建DKD模型,体内研究干扰Bim表达后对糖尿病肾病近端肾小管上皮细胞PEMT的影响。2、体外研究明确高糖条件下干扰HK-2细胞中Bim表达后对PEMT的影响。[方法]动物实验:构建PTEC条件性敲除Bim小鼠模型(conditional bim gene knock out,Bim CKO),并与野生型小鼠(未特异性敲除Bim的正常同品系小鼠,wild type,WT)对比观察。采用琼脂糖凝胶电泳鉴定各组小鼠基因。在上述小鼠的基础上构建DKD模型,在体内明确近端肾小管中Bim的表达对糖尿病肾病PEMT的影响。选取6-8周龄雄性小鼠行单侧右肾切除术,术后1周给予腹腔注射50 mg/kg剂量的链脲佐菌素(STZ)连续5天。注射后72h测量血糖,连续两次同一时间段随机血糖≥16.7 mmol/L,视为糖尿病造模成功,将上述Bim敲基因小鼠和野生型小鼠分为以下4组:A:野生型对照组(WT+Con);B:野生型DKD组(WT+DKD);C:Bim 敲基因对照组(Bim CKO+Con);D:Bim 敲基因 DKD 组(Bim CKO+DKD),分别于造模前、造模后4周、8周、12周监测小鼠的体重、血糖和24h尿蛋白,于第12周末处死并取材,检测小鼠血尿素氮和血肌酐的水平。通过免疫组化观察Bim在各组小鼠肾脏中的定位及表达情况。HE染色观察肾组织的病理学改变,Masson染色观察肾组织纤维化程度。免疫荧光染色法观察小鼠肾组织中转化生长因子1(TGF-β1)、间质细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadheriBIBW2992n)相关因子的表达情况。细胞实验:体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),使用慢病毒和嘌呤霉素构建沉默Bim稳转细胞系用于后续实验。并采用高糖(40 mmol/L)干预的方式诱导HK-2细胞发生PEMT。细胞实验分组如下:A:正糖组(5.5mmol/L,NG);B:高糖组(40mmol/L,HG);C:高糖+阴性对照病毒组(HG+BimshNC);D:高糖+Bim慢病毒组(HG+Bim shRNA)。提取细胞总蛋白,通过Western blot法验证Bim沉默效率。上述细胞分别在不同葡萄糖浓度干预72h的条件下,通过免疫荧Pexidartinib配制光染色法观察各组细胞中间质细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和上皮细胞标志物细胞角蛋白(CK-18)的表达情况,以及核转录因子(NFATc1)的核转位情况。Western blot法检测HK-2细胞中转化生长因子1(TGF-β1)、波形蛋白(Vimentin)和细胞角蛋白(CK-18)相关因子的表达情况。划痕实验、Transwell迁移实验分别用来观察HK-2细胞的横向和纵向迁移能力。其中,划痕实验观察时间采用了 24h、48h和72h以便观察HK-2细胞在不同时间点的迁移情况。[结果]1、条件性PTEC敲除Bim能够减轻DKD早期肾损伤。(1)观察小鼠的一般指标和肾功能,结果显示与两组对照组小鼠(WT+Con,Bim CKO+Con)相比较,DKD 两组小鼠(WT+DKD,Bim CKO+DKD)出现体重增加减缓,部分小鼠的体重减轻;糖尿病肾病两组小鼠血糖水平明显高于非糖尿病肾病两组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05);与WT+Con组小鼠相比,WT+DKD组小鼠的血尿素氮以及尿蛋白水平明显升高;在敲除小鼠Bim基因后,Bim CKO+DKD组小鼠的血尿素氮和尿蛋白水平降低,但体重和血糖与WT+DKD组相比无明显差异,说明敲除小鼠Bim基因可以一定程度上改善肾功能损伤。在实验第12周末,我们发现四组小鼠的血清肌酐值水平并未有明显差异,表明肾功能损伤仍处于早期状态。(2)免疫组化结果显示,在糖尿病肾病小鼠(WT+DKD组)的近端肾小管中可见Bim阳性染色增多,但是肾小球中未见阳染。非糖尿病肾病组小鼠(WT+Con)未见Bim的明显表达。另外PTEC条件性敲除Bim基因的两组小鼠(Bim CKO+Con和Bim CKO+DKD)肾组织中均未见Bim表达,证实Bim敲除成功。(3)HE染色结果显示非糖尿病肾病两组小鼠肾组织无明显病变;糖尿病肾病组小鼠肾小球体积明显肥大,在Bim敲基因小鼠中上述病变有所缓解。另外,Masson染色结果显示,WT+DKD组小鼠肾组织中可见明显的蓝色胶原纤维沉积,以上结果证实敲除Bim后的小鼠能够改善DKD带来的肾损伤。2、条件性PTEC敲除Bim能够抑制糖尿病肾病PEMT。动物组织的免疫荧光染色结果显示,相较于WT+Con组,WT+DKD组小鼠肾组织可见vimentin和TGF-β1表达增多,而E-cad表达降低,提示糖尿病肾病组小鼠出现PEMT的表现。然而,敲除Bim后能够逆转上述表现,在Bim CKO+DKD肾组织中vimBiodegradation characteristicsentin和TGF-β1表达减少,E-cad表达增多,证实在动物肾组织中条件性PTEC靶向敲除Bim基因可以抑制糖尿病肾病PEMT。3、下调HK-2细胞中Bim的表达能够抑制高糖诱导的PEMT,降低细胞的迁移能力,抑制NFATc1核转位。首先,通过Western blot结果证实,与转染阴性对照病毒组(Bim shNC)相比较,转染Bim慢病毒组(Bim shRNA)细胞中Bim蛋白表达水平显著降低(P<0.05),证实HK-2细胞中Bim敲降成功,利用敲降成功的细胞系进行后续的体外实验。细胞免疫荧光染色结果显示,经高糖干预后的HK-2细胞内vimentin的表达水平显著增加,而CK-18的表达水平显著减少。此外,Western blot结果显示,与HG组相比,HG+Bim shRNA组细胞中TGF-β1和vimentin的蛋白水平表达减少(P<0.05),而CK-18蛋白水平表达增多(P<0.05),与细胞免疫荧光的结果一致。证实了下调HK-2细胞中Bim表达可以抑制高糖诱导的细胞PEMT。最后,划痕实验和迁移实验结果显示,与HG组相比,HG+Bim shRNA组细胞的迁移能力明显下降(P<0.05),抑制Bim表达可以降低高糖条件下HK-2细胞的迁移能力。最后,还观察到高糖环境下HK-2细胞中NFATcl核转位增加,干扰Bim表达后可以抑制高糖干预下HK-2细胞中NFATcl的核转位。[结论]1、体内条件性PTEC敲除Bim能够降低小鼠的血尿素氮和尿蛋白水平,减轻DKD早期肾功能损伤,抑制糖尿病肾病PEMT水平。2、体外下调HK-2细胞中Bim表达可以抑制高糖诱导的细胞PEMT,抑制细胞迁移能力,并且抑制Bim表达可以抑制HK-2细胞中NFATc1核转位。