Achr receptor

目的 探究社会经济学因素对多发性骨髓瘤（MM）患者预后的影响并构建预测模型评估患者骨髓瘤特异性生存（MSS）。方法 由SEER数据库纳入32 625例2007年1月至2016年12月间诊断为MM的患者。Cox回归模型分析MSS的预测因素，森林图展现多因素亚组分析的结果，多因素Cox分析中确定的显著变量用来构建列线图。曲线下面积（AUC）和校准图评估列线图的预测性能，利用限制性三次样条曲线构建基于列线图评分的风险分层系统。结果 患者按其社会经济地位（SES）的高低分为五组，SES更高的群体中CCRG 81045配制白人、有保险者、已婚人群和城市居民的比例相对更高。单因素及多因素Cox分析表明年龄、性别、种族、婚姻状态、保险状况和SES是患者MSS独立预后影响因素（均P<0.001）。亚组分析显示随着SES降低，MSS风险增加的线性趋势在白人、已婚、有保险和城市患者Autoimmune haemolytic anaemia中最为显著（均P<0.001）。构建的列线图在训练集和验证集中均展现出良好的区分度和准确性，其预测3年、5年和8年MSS的AUC值分别为0.701、0.709和0KD025纯度.722。根据列线图总分和风险比建立了风险分层模型，所划分的三类不同风险等级组别间存在显著的生存差异（均P<0.001）。结论 社会经济学因素如婚姻状态、保险状况和SES等能够对MM患者的生存结局造成明显影响，基于这些因素构建的列线图及风险分层模型能较准确可靠地预测MSS。

背景:随着居民生活水平的提高及饮食结构的改变,结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)的发病率及死亡率逐年增加,其发病率已跃居肿瘤中第三位,死亡率位居第四位。CRC无特异的临床表现,内镜检查和病理诊断是金标准,其它辅助诊断依据包括腹部CT、腹部MRI及癌胚抗原等血清肿selleck激酶抑制剂瘤标志物。腹部CT和MRI对CRC的诊断缺乏特异性,价格高,且存在射线辐射。血清肿瘤标记物适用于CRC的筛查,但其对CRC诊断的灵敏度和特异性一般。腹部CT和MRI对CRC肝脏转移及肺转移的诊断有一定优势,但对CRC腹膜转移诊断的灵敏度和特异性一般。因此,新的CRC特异性标志物及其检测方法在CRC及其腹膜转移的诊断方面拥有广阔的应用前景。Micro RNA-21与CRC关系密切。研究表明,CRC组织中micro RNA-21的含量明显高于癌旁组织,micro RNA-21促进CRC增殖与分化;表达micro RNA-21高的CRC与较晚分期、较差预后、化疗不敏感及较短的生存期密切相关。有研究报道micro RNA-21作为CRC诊断标志物的灵敏度和特异性均高于癌胚抗原。众多关于micro RNA-21与CRC的研究结果表明micro RNA-21与CRC密切相关,可作为CRC诊断及预后评估的标志物。腹膜转移是CRC的晚期表现,其诊断主要依靠手术探查和活检病理。由于腹部CT和MRI等方法对腹膜转移诊断的效果一般,很多腹膜转移直至开腹探查时才被发现,而此时手术及麻醉已给病人造成较大的创伤。因此,在较小创伤或无创伤的情况下诊断腹膜转移至关重要。腹膜转移的CRC病人往往拥有严重消瘦和体重骤减的特点,即腹膜转移病人存在严重的能量代谢紊乱。ATP是能量代谢的产物和标志物,且与CRC关系密切。ATP分为细胞内ATP和细胞外ATP(Extracellular ATP,e ATP)。e ATP是指细胞外的ATP,比如组织间隙和血浆中的ATP。有文献报道,正常组织间隙不含ATP或含有极少量的ATP,而肿瘤原发部位或者转移部位e ATP含量很高,是正常组织间隙中ATP的千倍甚至万倍。高浓度的e ATP与CRC细胞表面的腺苷能受体P2RX7结合,激活信号通路,促进CRC增殖、浸润、转移和耐药的发生。本研究通过构建新的micro RNA-21和ATP检测方法并利用该方法检测病人血液或者体液中micro RNA-21和ATP,从而实现对CRC及其腹膜转移的诊断。国内外学者开发多种检测micro RNA和ATP的方法,但这些方法多存在检测过程复杂、耗时、成本较高、检测限(Limit of detection,LOD)一般及对设备要求高等不足。本研究利用碱基互补配对原则构建基于双发夹连接介导等温扩增反应(Dual hairpin ligation-induced isothermal amplification,DHLA)的micro RNA-21和ATP检测方法。这两种方法具有灵敏度高、特异性好、设计简单、容易操作及设备要求低等优点。使用构建的方法检测细胞系及实际病人血浆中的micro RNA-21和ATP发现CRC细胞系micro RNA-21表达量高于正常结肠粘膜AM-2282细胞系,CRC病人血浆中micro RNA-21的含量高于健康对照者;CRC细胞主动获取培养液中ATP,而正常结肠粘膜细胞分泌ATP至培养液;腹膜转移CRC病人血浆中的ATP含量明显高于早期CRC病人血浆中ATP。上述结果为CRC的诊断及CRC腹膜转移的诊断开辟新的方向。方法:1.构建基于DHLA的micro RNA-21检测,具体方法如下:(1)利用碱基互补配对原则设计检测所用的模板链和引物,使用Nupack在线软件验证。(2)模板链的浓度、模板链之间的浓度比、指数扩增反应温度、连接酶用量及引物链浓度的优化:优化的模板链浓度为60 n M、30 n M、15 n M和3 n M;优化的模板链A和模板链B的浓度比例为2:1、1:1及1:2;优化的引物混合物浓度为1.6μM、1.2μM、0.8μM和0.4μM;优化的指数扩增反应的温度为58℃、60℃、62℃、63℃;优化的Bst 2.0 DNA聚合酶的量为1.5μL和2.0μL。(3)Micro RNA-21检测的LOD及荧光曲线最大斜率时间(Point of inflection,POI)与micro RNA-21浓度线性关系:逐级稀释不同浓度的micro RNA-21为实验组,超纯水为阴性对照,按照优化后的条件实验,获得LOD及micro RNA-21浓度与POI值之间的线性关系。(4)Micro RNA-21检测的特异性分析:选择生物体内常见的micro RNA(如micro RNA-141、let-7d和micro RNA-200b)及超纯水作为对照,按照优化后的条件实验。2.构建基于DHLA的ATP检测,具体方法如下:(1)模板链之间的浓度比、连接时间及连接酶用量的优化:模板链P1和P2的浓度为60 n M,选择优化的模板链P3的浓度为30 n M、60 n M、120 n M和180n M;选择优化的T4 DNA连接酶浓度为0.016 U/μL、0.16 U/μL、1.6 U/μL及16U/μL;选择优化的连接时间为30 min、60 min、90 min和120 min(2)ATP检测的LOD及Cq值与ATP浓度线性关系:逐级稀释不同浓度的ATP为实验组,不含ATP的超纯水为阴性对照,按照优化后的条件实验,获得LOD及ATP浓度与Cq值之间的线性关系。(3)ATP检测的特异性分析:以ATP的类似物(GTP、UTP、CTP和腺苷)及超纯水作为阴性对照,按照优化后的条件实验。3.结肠癌及正常结肠粘膜细胞系中micro RNA-21和ATP:(1)体外培养结肠癌细胞SW 620和DLD-1及正常结肠粘膜细胞FHC。(2)使用柱式micro RNA提取试剂盒提取SW 620、DLD-1及FHC细胞中micro RNA;超声波裂解方法获取细胞中ATP,离心获取待测培养液。(3)使用构建的micro RNA-21及ATP检测方法检测细胞系中mciro RNA-21及细胞系和培养液中ATP。4.CRC病人血浆中micro RNA-21和ATP:(1)使用抗凝血管抽取晨起、空腹状态的10例CRC病人及5例健康志愿者血液;使用柱式micro RNA提取试剂盒提取血浆中的micro RNA。(2)使用抗凝血管抽取晨起、空腹状态的10例早期CRC病人及5例腹膜转移CRC病人血液;通过静置及多次离心获取待测血浆。(3)使用构建的micro RNA-21及ATP检测方法检测血浆中mciro RNA-21及ATP。结果:1.基于DHLA的micro RNA-21检测的LOD在~a M水Hepatic glucose平,特异性好,可区分不同种类的micro RNA。2.基于DHLA的micro RNA-21检测拥有较小的基质效应,可检测结肠细胞及CRC病人血浆中的micro RNA-21。3.基于DHLA的ATP检测的LOD在~f M水平,特异性好,可区分ATP与其类似物。4.基于DHLA的ATP检测拥有较小的基质效应,可检测结肠细胞系及CRC病人血浆中的ATP。5.CRC细胞系micro RNA-21表达量高于正常结肠粘膜细胞系,对比SW 620细胞,DLD-1细胞低表达micro RNA-21。6.CRC病人血浆中的micro RNA-21含量较健康志愿者血浆高。7.CRC细胞获取培养液中ATP,正常结肠粘膜细胞分泌ATP至培养液。8.腹膜转移CRC病人血浆中的ATP浓度明显高于早期CRC血浆中ATP浓度。结论:1.基于DHLA的micro RNA-21和ATP检测,拥有超高的灵敏度和较好的特异性,拥有较小的基质效应,可检测生物样本中的micro RNA-21和ATP。2.对比SW 620,DLD-1低表达micro RNA-21,CRC病人血浆中micro RNA-21含量较健康志愿者高,为CRC诊断提供新的标志物及检测方法。3.CRC细胞获取培养液中ATP,正常结肠粘膜细胞分泌ATP至培养液;腹膜转移CRC病人血浆中ATP较早期CRC病人血浆中ATP含量高,为CRC腹膜转移的诊断提供新的方法及研究方向。4.构建的基于DHLA的micro RNA-21和ATP检测,为试剂盒的开发提供依据,为CRC的社区筛查及CRC病人居家自测提供新的思路。

食用菌蛋白质具有免疫调节等多种功能活性。目前关于食用菌蛋白免疫调节活性方面的研究较少,缺少对珍稀和大宗食用菌蛋白质免疫调节活性高低的综合评价。本研究主要通过分离纯化、活性筛选、结构解析、活性评价等步骤,对珍稀和大宗食用菌蛋白质的免疫调节作用进行综合全面评价,并且筛选出免疫调节活性较好的蛹虫免疫调节蛋白进行进一步纯化、免疫活性评价和结构表征。本文主要结果如下:1.选取冬虫夏草、蛹虫草、云芝、桑黄、灵芝、灰树花、羊肚菌、桦树茸、牛肝菌、松茸、红菇、鸡枞菌、黑松露等十三种珍稀食用菌,茶树菇、杏鲍菇、金针菇、草菇、猴头菇、平菇、香菇、双孢菇、海鲜菇等九种大宗食用菌,分别提取了食用菌蛋白质,并使其纯度达到60%以上,对其组成成分进行分析,并且采用巨噬细胞免疫调节模型对食用菌蛋白质免疫调节活性进行评价。结果表明,二十二种食用菌粗蛋白均能提高小鼠巨噬细胞增殖和吞噬能力并且我们发现这些食用菌蛋白对小鼠巨噬细胞分泌活性氧和一氧化氮均有影响。通过进一步对小鼠巨噬细胞细胞因子分泌情Modern biotechnology况的研究,促炎细胞因子的显著增加证明食用菌蛋白促进巨噬细胞极化为经典的的M1型巨噬细胞,进一步证明了食用菌蛋白质能够增强免疫力。通过均一化模长法发现珍稀食用菌蛋白比大宗食用菌蛋白的免疫调节活性显著更高,其中最高的是蛹虫草,最低的是海鲜菇,十三种珍稀食用菌中,蛹虫草蛋白浓度在200μg/m L时,模长||X||~2最大为9.98±1.31,其次是云芝,在200μg/m L时,模长|X||~2达到了9.74±1.16,大宗食用菌中模长||X||~2最大为草菇,达到了1.65±0.31。因此蛹虫草蛋白质免疫调节活性较其他食selleck HPLC用菌相比显著更高。2.选取免疫调节活性最高的蛹虫草蛋白进行进一步的研究。采用碱溶酸沉法提取蛹虫草粗蛋白,采取DE-52阴离子交换色谱和G200葡聚糖凝胶色谱进行分离纯化,然后使用RAW 264.7免疫调节模型对分离出的不同组分进行免疫调节活性评价,筛选出一种免疫调节活性最佳的一个组分CMP 2b,由蛋白质谱测得它由196个氨基酸组成,明确其一级结构;利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术测定相对分子质量,其相对分子质量为22460 Da。3.构建巨噬细胞免疫调节模型,研究得出CMP 2b对巨噬细胞的增殖能力、吞噬能能力有显著提高,细胞增殖率最高达到了空白对照组的152.91±5.55%,吞噬能力提高了23.34%;并且促进巨噬细胞分泌NO、ROS、IL-1β、IL-6、IFN-γ及TNF-α,其中NO分泌水平分别达到了空白对照组的2.31倍,ROS分泌水平Pidnarulex作用达到阳性对照组LPS的82.33%,TNF-α、IL-1β、IFN-γ和IL-6分泌量分别为空白对照组的5.51倍、17.42倍、4.18倍和26.75倍,显著增强了巨噬细胞免疫调节能力。分别通过anti-SR、anti-NLRP1、anti-NLRP3、anti-NLRC4、anti-TLR1、anti-TLR2和anti-TLR4预处理再用CMP 2b进行刺激RAW 264.7,表明TLR1与NLRP3是小鼠巨噬细胞识别CMP 2b的膜受体。

目的:筛选载山柰酚长循环靶向脂质体(c-Lipo/KPF)的最佳处方工艺，并初步研究其抗卵巢癌疗效和机制。方法:以综合评分为指标，用正交试验法筛选c-Lipo/KPF的最优处方；用透射电镜、激光粒度仪、动态透析selleck化学法、可见分光光度法等检测c-Lipo/KPF的形态、粒genetic service径、体外释药行为、血清稳定性和血液相容性；用MTT法、荧光显微镜和流式细胞术等检测空白脂质体的细胞相容性、c-Lipo/KPF对卵巢癌细胞的靶向效率和细胞毒性；用活性氧(ROS)检测试剂盒、凋亡检测试剂盒、周期检测试剂盒考察c-Lipo/KPF对卵巢癌细胞内ROS水平、凋亡和周期分布的影响。结果:c-Lipo/KPF的最佳处方工艺为磷脂、胆固醇、药物的摩尔比为80∶5∶4,超声时间为8 min;其粒径、Zeta电位、包封率(EE)和载药量(DL)分别为129 nm,-29 mV,95.2%和1.7%;溶血率低于5%;和普通脂质体(Lipo/KPF)相比，其血清稳定性、对A2780细胞的靶向效率和细胞毒性、升高细胞内ROS水平、诱导细胞G_2/M期阻滞和凋亡的能力均显著提高。结论:按最佳处方工艺制备的c-Lipo/KPF,粒径均一，EE与DL较高，有良好的生物相容性、血清稳定性和卵巢癌细胞靶向效率，可以selleckchem PS-341增加细胞内ROS水平、诱导G_2/M期周期阻滞和凋亡、抑制细胞增殖。

目的 探讨TCF3通过linc00152调控Daudi和Raji细胞增殖和凋亡中的功能和机制。方法 采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测linc00152hepatic hemangioma的干扰效率；利用CCK8、Western blotting和流式细胞术检测linc00152对Daudi和Raji细胞增殖和凋亡的影响；ChIP-PCR检测TCF3与linc00152的启动子区结合；qPCR和Western Dinaciclib研究购买blotting检测TCF3的干扰效率；qPCR检测TCF3对linc00152表达水平的影响。结果 在Daudi和Raji细胞中siRNA能成功干扰linc00152的表达；CCK8结果显示，干扰linc00152能抑制Daudi和Raji细胞增殖，Western blotting和流式结果显示干扰linc00152能促进细胞凋亡(Daudi:35.30±2.84 vs. 6.95±0.82; Raji:33.17±2.18 vs. 6.47±0.38);ChIP-PCR结果显示，TCF3能与linc00152的启动子结合；qPCR和Western blotting结果显示，TCF3的mRNA和蛋白水平均能被siRNA成功干扰；在Daudi和Raji细胞中，si-TCF3能降低linc00152的表达量(Daudi:0.509±0.048 vs. 0.906±0.146;Raji:0.502±0.052 vs. 0.966±0.103)。结论 linc00152能促进Daudi和Raji细胞增殖，抑制细胞凋亡，可能与TCF3对linc001IDN-6556试剂52的调控有关。

研究目的:肌肉工作效率是影响运动能力的一个主要因素,特别是持续时间较长的耐力运动。据研究,人体运动的机械效率大约是15-27%(功率自行车测试)。最大摄氧量(VO2max)值与耐力运动成绩的解离现象说明还存在其他的影响因素,肌肉工作的机械效率是可能的因素之一。但由于直接测量肌肉做功能力和输出功非常困难,常用固定跑速运动中的稳态氧耗来反映机体的能量节省程度,即能量节省化(Running Economy,RE),来间接反映机体机械效率的高低。很多研究发现,RE是影响有氧耐力运动能力的重要因素,特别是对VO2max相差不大的高水平运动员而言。研究方法:鉴于国内的教材和文献中涉及RE的内容很少,本文通过文献资料法就能量节省化的研究进展作一综述。研究结果:能量节省化(Running Economy,RE)通过测量亚极量跑速下的稳态耗氧量大小来反映机体能量利用效率,具有明显的个体和群体差异,可以解释最大摄氧量相近的个体间或群体间运动成绩的差异影响有氧耐力成绩的因素主要有最大摄氧量(VO2max)、最大摄氧量利用率(%VO2max)和RE。他们之间是相互联系,分别评价机体有氧能力的不同方面。VO2max是耐力项目成绩的先决条件。RE较小(较高的能量节省化)可以弥补VO2max小和%VO2max低的不足。在VO2max和%VO2max相同时,RE决定比赛胜利的归属,这对优秀的顶级运动员来说,无疑是至关重要的。RE的影响因素主要有:第一,外界环境。温度升高导致心率和外周血量的增加,出汗,通气率的增加及氧化磷酸化效率的降低,能源物质的利用改变,从而提高了机体的能量消耗,降低了能量节省化。湿度增加也有相同的效应。高原时的RE要高于海平面,这是因为高原空气密度低,气流阻力要小于平原的缘故。训练产生习服后,能量节省化水平提高。第二,性别与年龄。儿童少年的基础代谢率要高于成年人(25-35%)。儿童少年的相对体表面积要大于成年人,而能量散失率与体表面积直线相关,而与体重不成直线关系。当用体表面积来校正能量消耗时,性别和年龄差别就消除了。另外,运动技术不完善,如儿童的步幅更小,步频更快。步频更快,导致身体加速和制动时需要消耗更多的能量。少年儿童的通气当量要高于成年人,因此,呼吸肌要消耗更多的能量。低无氧能力也导致儿童少年从无氧代谢获得的能量要比成年人少,氧耗量较高。老年人的节省化程度也比成年人低。第三,体形与体重。体重对RE的影响是显而易见的。跑步时体重主要由下肢支撑,运动过程中起到了加速和减速的作用。研究表Blebbistatin核磁明:体重大的个体RE小(节省化程度高)。这可能是因为体重大的个体相对体表面积和步频小缘故。因此,比较RE时,体重匹配是很重要的一点。第四,训练水平与机能状态。短期的运动训练(6-11周)并不能提高RE,而长期训练(14周-5年)则可以不同程度地提高RE。RE测试的速度应该接近比赛速度而不是武断地采用普遍使用的次最大强度速度。运动员在疲劳和减训、过度训练时的RE变化也有一些报道。比赛或长时间以相对低的强度(48%VO2max)下坡跑(10°)会削弱能量节省化。可能的原因是疲劳未消除的情况下,亚极量运动时摄氧量提高或跑步力学参数发生改变。第五,肌纤维类型。肌纤维类型也是一个影响RE的重要因素。因为氧热价与肌肉类型无关,那么能量输出的大小主要与肌肉利用氧的能力有关。I型肌纤维高的运动员有氧代谢能力强,乳酸生成少,氧耗低。而Ⅱb肌纤维产生力量对能量需求高,乳酸生成量高,可能对RE有较大的影响。第六,心理状态等因素。研究发现随着运动负荷的增大,运动员的紧张程度增加,通过应激管理后,发现紧张Chromatography程度下降,能量节省化程度升高。通过想象和假设,可以有效地影响改变对运动的反应(主要通过心率和成绩)。而且认知程度(心理策略,合作和生物反馈)也可以改变对运动的反应。研究结论:RE作为影响耐力运动的一个重要因子,国外研究已经有30多年了。在运动员机能评定、技术优化、运动成绩预LY294002试剂测和医务监督等方面具有重要的应用价值。但是,由于影响RE的因素很多,而且RE的个体差异很大,因此给实际应用带来较大的困难。RE作为一个综合性指标,涉及到形态学、解剖学、生理学、生物力学、心理学、神经生理学、生物化学、运动装备学等多学科。但是,只要很好地控制测试条件,对评价运动员的能量利用效率是非常有效的,弥补了最大摄氧量和最大摄氧量利用率的不足,不应该忽视RE对耐力运动成绩的影响作用,特别是最大摄氧量差别不大的选手之间。尽管测量过程尚未标准化,RE的测量简单易行,在机能评定、成绩预测、运动员选材、运动训练和医务监督等方面具有较大的应用价值。

[目的]探讨游离脂肪酸对小鼠巨噬细胞葡萄糖酵解和M1极化的影响，从巨噬细胞代谢重编程和M1极化阐明非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的发病机medicinal resource制，为NASH的防治提供新的思路。[方法]以油酸/棕榈酸(O/P)处理RAW264.7细胞建立游离脂肪酸处理巨噬细胞模型；转染AMP活化蛋白激酶(AMPK)特异siRNA抑制AMPK表达；使用阿卡地新(AICAR)激活AMPK活性。采用qPCR检测巨噬细胞M1型分子标志物(TNF-α、IL-6和MCP-1)、M2型分子标志物(CD206和IL-10)以及葡萄糖酵解相关基因(PGM1、PGK1、GPI1、LDHA、ALDOA、GLUTDecitabine1和HK2)mRNA水平，采用Western blot检测p-mTORselleck抑制剂/mTOR、p-Raptor/Raptor、p-Akt/Akt、p-AMPK和AMPK蛋白水平。[结果] O/P处理RAW264.7细胞后，p-mTOR/mTOR和p-Akt/Akt蛋白水平升高(P<0.05),p-Raptor/Raptor、p-AMPK和AMPK蛋白水平降低(P<0.05),葡萄糖酵解相关基因PGM1、PGK1、GPI1、LDHA、ALDOA、GLUT1和HK2 mRNA水平升高(P<0.05),促炎因子TNF-α、IL-6和MCP-1 mRNA水平升高(P<0.05),抑炎因子CD206和IL-10 mRNA水平降低(P<0.05)。抑制RAW264.7细胞中AMPK表达后，p-mTOR/mTOR和p-Akt/Akt蛋白水平升高(P<0.05),p-Raptor/Raptor、p-AMPK和AMPK蛋白水平降低(P<0.05),葡萄糖酵解相关基因PGM1、PGK1、GPI1、LDHA、ALDOA、GLUT1和HK2 mRNA水平升高，促炎因子TNF-α、IL-6和MCP-1 mRNA水平升高(P<0.05),抑炎因子CD206和IL-10 mRNA水平降低(P<0.05)。激活AMPK活性可逆转O/P对巨噬细胞葡萄糖酵解和M1极化的影响。[结论]在RAW264.7细胞中游离脂肪酸通过抑制AMPK信号通路促进葡萄糖酵解和M1型极化。

弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse Large B-cell Lymphoma,DLBCL),一种非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)亚型,是一类高异质性与高侵染性的血液系统恶行肿瘤疾病。针对DLBCL,目前主要的治疗方式为一线药物联合治疗RCHOP法(Rituximab,Cyclophosphamide,Doxorubicin,Vincristine,and Prednisone),但部分患者依R-CHOP法难以治愈。因此针对DLBCL患者新型药物的开发为该领域的研究热点。4-羟基水杨酰苯胺(Natural 4-hydroxysalicylanilide,HDS)为一种天然化合物,是一类核糖核苷酸还原酶(Ribonucleotide reductase,RR)的抑制剂,常用于肝胆疾病的治疗。前期数据表明,4-羟基水杨酰苯胺可用于制备淋巴瘤和多发性骨髓瘤的药物。其优势在于:在体外,该化合物能有效抑制淋巴瘤和多发性骨髓瘤细胞生长;在体内,该化合物能有效抑制小鼠淋巴瘤和多发性骨髓瘤生长,可发展为淋巴瘤和多发性骨髓瘤的治疗或预防药物。但该化合物在DLBCL疾病的效果仍然未知。我们在体外采用DLBCL细胞系OCI-LY1、OCI-LY8、NU-DUL-1、U2932与TMD8模拟DLBCL疾病模型,常用DLBCL药物阿霉素为对照和联合药物,分析HDS(不同浓度和不同作用时间)对DLBCL肿瘤的抑制效果及其作用机制。首先我们采用CCK-8法和琼脂糖凝胶克隆形成实验分析HDS对DLBCL细胞增殖的影响。然后分析药物作用过程中,DLBCL的细胞状态变化,如γ-H2AX染色分析DNA损伤、Annexin-V/PI(碘化丙啶)染色流式分析细胞凋亡和PI染色流式分析细胞周期阻滞等。同时分析HDS与阿霉素联合用药是否可以更有效的杀伤DLBCL肿瘤。并通过Western Blot实验分析HDS杀伤肿瘤的作用机制。其次,我们将DLBCL细胞移植到小鼠皮下,观察DLBCL肿瘤marine-derived biomolecules在小鼠体内的增殖。实验组中,给小鼠用药:HDS或HDS/阿霉素联合。在移植后13天内,观察小鼠存活,体重变化、肿瘤体积变化。13天后,取出小鼠肿瘤组织,以及心脏、肝脏和肾脏组织,并做HE染色,分析肿瘤组织与其它脏器组织结构的变化,分析药物对肿瘤组织的杀伤以及药物对小鼠GW4869试剂的毒性作用。最后,取肿瘤组织包埋切片,做免疫组织染色,分析HDS或HDS/阿霉素联合在体内对DLBCL肿瘤细胞增殖、DNA损伤与凋亡等细胞状态的影响。结果显示,HDS可显著抑制DLBCL细胞(OCI-LY1、OCI-LY8、NU-DUL-1、U2932与TMD8细胞系)增殖,显著降低DLBCL细胞克隆形成率。且HDS与阿霉素联合用药可更有效的杀伤DLBCL肿瘤细胞。细胞周期检测实验发现,HDS主要通过诱导细胞G2/M期细胞周期阻滞,抑制细胞增殖。且会诱导细胞出现显著的凋亡和DNA损伤,从而进一步抑制DLBCL肿瘤细胞增殖。体内实验中,对肿瘤组织和小鼠脏体器官的HE染色结果也显示,HDS可抑制小鼠DLBCL肿瘤组织细胞的增殖,诱导肿瘤细胞的凋亡,从而增加肿瘤组织的坏死,但对小鼠其它器官,如心脏、肝脏等组织结构无明显影响。肿瘤组织免疫荧光染色数据也表明,相较于对照组,在HDS和HDS/阿霉素联合用药组中,体内肿瘤组织的细胞γ-H2AX表达比例增加,而Ki-67表达比例降低,进一步表明HDS抑制DLBCL肿瘤的效果。综上所述,我们证明:(1)在体内和体外,HDS均可诱导DLBCL肿瘤细胞凋亡与DNA损伤,引起细胞周Tamoxifen期G2/M阻滞,抑制肿瘤细胞增殖;(2)与阿霉素联合使用可更加有效抑制DLBCL肿瘤,(3)HDS对小鼠无明显毒性。

目的:《金匮要略》妇人病三篇的学术思想是仲景学说的重要组成部分,为后世妇科学发展奠定理法方药基础,其学术思想经过历代医家的实践总结不断趋于完善。傅青主深谙妇科疾病诊疗,在妇科领域占有重要一席,其代表作《傅青主女科》既有对前人经验的继承,更有理论、实践的突破和发展,对妇科病诊治影响深远。本文研究目的是探讨并归纳总结傅青主妇科主要学术思想以及对《金匮要略》妇人病篇学术思想的继承与发展。综上,本研究旨在以《金匮要略》妇人病篇及《傅青主女科》为出发点,研究挖掘妇科证治思想。通过探讨《金匮要略》妇人病篇的仲景学说以及傅青主的妇科理论和临床运用,为现代中医妇科临床辨证论治开拓新思路和方药借鉴。方法:本论文主要采用文献研究的方法,结合现代中医理论发展适当评按,挖掘古代医籍理论对现代中医理论和临床的意义。本研究对傅青主的妇科理论进行系统的分析,归纳总结其妇科学术思想以及对《金匮要略》妇人病篇学术思想的继承与发展。《金匮要略》妇人病三篇理论是本研究的基础。参考历代相关医籍文献评注,集中分析妇人病三篇对妇科病的病因病机、辨证、治疗进行系统impulsivity psychopathology的整理、分析和归纳,总结仲景妇科学术思想。在此基础上,对傅青主妇科诊治思想,学术特色进行探索分析,归纳总结傅青主对《金匮要略》妇人病三篇学术思想的继承与发展。探讨傅青主妇科诊治思想在临床中的应用,参考现代妇科临床医家发现,揭示其对现代中医临床辨证论证的意义。本研究包含三部分,分述如下:第一部分探讨《金匮要略》妇人病三篇学术思想。妊娠篇体现“有故无殒,亦无殒”的思想,重视“祛病安胎”。产后篇强调产后多虚多瘀,以“虚中夹实,先攻其实”为治疗特点。妇人杂病则尤重气血,并重视外治法的运用。第二部分探讨傅青主妇科诊疗特色及学术思想,傅青主妇科学术思想对妇科中医临床辨证论治的意义,拓展中医妇科临床思路与方法。第三部分讨论傅青主对《金匮要略》妇人病篇学术思想的继承与发展。结合KPT-330生产商现代妇科临床医家发现,探讨傅青主妇科学术思想对现代医家的影响。结果:通过归纳整理得知,傅青主在认识妇人病病因上与张仲景提出的“妇人病三大病因:虚、积冷、结气”基本一致。傅青主遵从妊娠病“有故无殒,亦无殒”的原则,辨证使用妊娠忌药治疗妊娠病,遵从“祛病安胎”思想。对于产后病,傅青主遵从产后“多虚多瘀”,“不拘于产后,不忘于产后”,治法在扶正祛邪的基础上又有发展。妇科杂病方面,傅青主继承《金匮要略》调理气血为主的思想,重视气血辨证,并发展脏腑辨证及冲任督带理论,带下从“湿”论治,肝脾肾同调;调经重肝,兼顾脾肾;种子补肾,兼理肝脾的思想。结论:傅青主对《金匮要略》妇科学术思想的继承与发展主要集中在:一、妇人病三大病因的认识;妇人杂病以气血为总纲,调理气血为重。二、妊娠病运用“有故无殒,亦无殒”的原则;三、产后“多虚多瘀”,宜扶正祛邪。在此基础上对妇科学术思想有所充实发展:(1)带下病从湿论治,创“五色带下”论治;(2)调经以气血为本,重补慎攻,肝脾肾三脏同调;(3)种子以补肾为先,兼顾肝脾,善调冲任督带Y-27632;(4)妊娠以补气、养血、安胎为主,突出养气;(5)产后以血虚为主,气虚为次,治疗以大补气血为主,扶正固本;产后瘀血以生化汤为基础加减化裁治疗。傅氏基于仲景治疗妇科病之学术思想,将其继承、发展,为后世妇科临证拓宽治疗思路。

研究目的:根据《中国心血管健康与疾病报告2021》显示,随着经济社会发展与生活方式的改变,我国居民不健康生活方式日益突出,心血管危险因素对居民健康影响日益加深,我国心血管疾病患病率和死亡率正处于持续上升阶段。其中急性心肌梗死发病率逐年升高并趋于年轻化,严重威胁中国城乡居民生命健康。临床急性心肌梗死患者常采用药物治疗、溶栓治疗或经皮冠状动脉介入治疗等手段,恢复缺血心肌血流。但研究发现,血流恢复后,常伴随心肌氧化应激水平过度增加,导致心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion, I/R)损伤的发生,严重影响患者预后和生活质量。近年来研究发现I/R心脏游离铁和活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平显著升高,导致心肌细胞脂质过氧化,诱发铁死亡,是导致心肌Imedical overuse/R损伤的重要机制之一。运动是改善I/R诱导心肌损伤的有效干预方式,可降低I/R心肌氧化应激水平,提高抗氧化能力,但运动可否改善I/R诱导心肌细胞铁死亡尚无报道。成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor21,FGF21)是目前公认的运动因子,可通过改善心肌细胞代谢和抗氧化能力,有效改善I/R诱导的心肌损伤。FGF21可改善病理条件下肝脏和大脑等组织细胞铁死亡水平,运动可否通过调节FGF21,改善I/R诱导心肌细胞铁死亡需进一步探索。本研究通过构建运动干预小鼠的I/R模型,探讨运动可否上调心肌FGF21表达,改善心肌细胞铁死亡及其可能机制,为临床运动改善I/R损伤的作用靶点和分子机制提供实验依据。研究方法:3月龄雄性C57BL/6小鼠,18-20g,适应性喂养1周后,随机分为假手术对照组(Sham)、缺血再灌注2小时组(Control-I/R 2h)、缺血再灌注24小时组(Control-I/R 24h)、运动+假手术组(Exercise training-Sham, ET-Sham)、运动+缺血再灌注2小时组(ET-I/R 2h)和运动+缺血再灌注24小时组(ET-I/R 24h)。其中,运动组小鼠进行6d适应性跑台训练。第1w为适应性训练,第1d以6m/min×10min运动,每天增加10min,速度递增2m/min,第6d增至16m/min×60min,跑台坡度为0°,休息1d。正2-7周为正式训练,运动跑台坡度为0°,跑速为16m/min,60min/d,5d/wk×6w。实验期间小鼠每周测一次体重。手术组小鼠进行冠状动脉左前降支(LAD)结扎术,30min后去除结扎线,再灌注2h和24h,制备I/R模型,假手术组只穿线不结扎,以排除手术因素干扰。手术过程中连接小动物心电图检测仪,进行心电信号采集,以心电图ST段弓背抬高,出现病理性Q波或T波倒置作为结扎成功的标志。采用小动物超声心动图评估心脏收缩功能。异氟烷麻醉小鼠,称重后,眼眶取血,取上清备用。迅速开胸摘取心脏,预冷生理盐水清洗,滤纸吸干后称重。用于组织学实验样本放入4%多聚甲醛溶液中固定保存48h,用于生化与分子生物学指标检测样本放入液氮固定24h后,转移至-80℃超低温冰箱中保存。取甲醛固定心肌组织进行石蜡包埋,制备切片,常规HE和Masson染色,观察细胞形态,分析细胞横截面积大小和心肌纤维化程度。超氧化物阴离子荧光探针(Dihydroethidium,DHE)检测心肌细胞ROS水平。采用生化检测试剂盒检测心肌组织总谷胱甘肽(T-GSH),氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量,测定心肌细胞中氧化应激水平。Western Blotting检测心肌组织中溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11, SLC7A11/xCT)、谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4, GPX4)和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)蛋白表达。其中,组织学染色采用Image J进行分析,WB结果采用Image Lab进行处理与分析,所得数据通过GraphPad Prism进行单因素方差分析,Tukey比较并做图。研究结果:[蔡1] HE染色结果显示,与Sham组比,ET-Sham组小鼠PLX-4720心肌组织结构正常,心肌细胞排列有序,未见心肌胶原纤维化,心肌细胞横截面积显著增大(p<0.05),FGF21蛋白表达显著升高(p<0.01);Control-I/R 2h组结扎部位心肌纤维断裂、组织破碎、排列紊乱、心肌细胞数量减少,左心室射血分数(EF)和左心室短轴缩短率(FS)下降,心功能降低,氧化应激水平升高,心肌组织中TUNEL阳性颗粒数量增加,可见心肌胶原纤维化,FGF21蛋白表达显著升高(p<0.05),Nrf2表达升高但无显著性差异,T-GSH和GSSG含量均有所升高;Control-I/R 24组心肌纤维断裂严重,心肌细胞数量减少,可见胶原纤维沉积,EF和FS下降,左心室舒张期内径(LVIDd)和左心室收缩期内径(LVIDs)上升,ROS水平升高,心肌组织中TUNEL阳性颗粒数量增加,FGF21表达显著升高(p<0.01),Xct表达显著降低(p<0.01)。与Control-I/R 2h组相比,Control-I/R24h组心肌破碎,EF降低,心功能下降,FGF21表达显著升高(p<0.05),Nrf2表达升高但无显著性差异;ET-I/R 2h组EF升高,心功能改善,ROS水平下降,心肌组织中TUNEL阳性颗粒数量降低,FGF21和Xct表达显著升高(p<0.05)。与Control-I/R 24h组相比,ET-I/R 24h组心肌纤维排列较为整齐,组织破碎程度较轻,胶原纤维化程度减轻,FS和LVIDd显著升高(p<0.05),心功能改善,ROS水平降低,FGF21表达显著升高(p<0.05),GPX4、Xct和Nrf2升高。T-GSH含量升高。与ET-Sham组相比,ET-I/R 2h组心肌纤维断裂,心肌细胞数量减少,EF和FS下降,Xct表达selleck抑制剂升高。ET-I/R24h组心肌纤维断裂,组织破碎,FGF21表达显著升高(p<0.05),Nrf2升高。T-GSH含量升高,GSSG含量下降。与ET-I/R 2h组相比,ET-I/R 24h组ROS水平升高,FGF21表达显著升高(p<0.05),Nrf2、GPX4和Xct表达均有升高。研究结论:6周有氧运动可上调I/R心肌组织中FGF21的表达,降低心脏ROS水平,抑制心肌细胞凋亡和铁死亡,改善心肌损伤,发挥心脏保护作用。