Achr receptor

消化系统肿瘤是一类实体肿瘤,包括肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)、胆管癌(Cholangio carcinoma,CHOL)、胰腺癌(Pancreatic adenocarcinoma,PAAD)、食管癌(Esophageal carcinoma,ESCA)、胃癌(GastGlycolipid biosurfactantric carcinoma,GC)、结肠癌(Colon adenocarcinoma,COAD)和直肠癌(Rectum adenocarcinoma,READ)。消化系统肿瘤与全球约三分之一的癌症发病率和死亡率有关,是一个严重的公共卫生威胁。在消化系统肿瘤中,肝细胞肝癌,是一种恶性程度较高的原发性肝癌,它是发病率排名第六,致死率排名第四的恶性肿瘤,具有复发率高、转移率高和恶性程度高等特点。过继细胞疗法,如嵌合抗原受体 T 细胞(Chimeric antigen receptor engineered T-cell,CAR-T)疗法、CAR修饰的自然杀伤细胞(Nature killer,NK)疗法和嵌合抗原受体巨噬细胞(Chimeric Antigen Receptor Macrophage Immunotherapy,CAR-M)疗法是有希望治愈癌症的方法,但这些疗法目前面临的关键问题是免疫细胞注入人体后存在着随机运输问题,这是制约过继细胞疗法疗效的重要因素。既往研究发现,使用基因修饰后的免疫细胞在治疗消化系统肿瘤等实体瘤时,大部分免疫细胞都会在肝脏、肺脏等组织累积,但在实体瘤组织上却只有极少量甚至没有检测到免疫细胞。因此,解决免疫细胞输入人体后运输方向的问题,是提升过继疗法临床疗效的关键。幸运的是,人体中存在着许多趋化因子和趋化因子受体,它们的主要功能是控制细胞的定向运动。我们可以通过筛选合适的趋化因子和趋化因子受体来提升过继细胞疗法的治疗效果。但是筛选出的趋化因子和趋化因子受体需要满足两个条件寻找更多:一是趋化因子在肿瘤组织中高表达;二是趋化因子和趋化因子受体的匹配具有唯一性。因此,在本课题中,首先我们采用生物信息学分析趋化因子的表达情况。对人体内6种匹配具有双向唯一性的趋化因子轴的趋化因子进行基因表达分析,发现这6种趋化因子中仅有趋化因子CCL20在消化系统肿瘤组织和其他正常组织中的表达是有差异的。我们依次分析了 CCL20在多种消化系统肿瘤组织、癌旁组织和消化系统肿瘤细胞的表达情况,结果显示,CCL20高度表达在消化系统肿瘤组织和肿瘤细胞上。我们又在肝癌皮下成瘤小鼠模型中通MK-2206采购过RT-PCR证明了 CCL20在肿瘤组织的mRNA水平高表达,并通过ELISA实验证明皮下成瘤后小鼠的外周血含有较高水平的CCL20。这些结果表明CCL20表达在消化系统肿瘤实质细胞中,并可分泌至外周血中。其次,我们构建了CCR6过表达细胞,分析CCL20-CCR6趋化因子轴对细胞运动的导向作用。通过Transwell实验验证了CCR6-CCL20趋化因子轴可以在体外促进细胞的定向迁移;在小鼠肝癌模型中也证明CCR6-CCL20趋化因子轴可以在体内指导过继转输的免疫细胞定向迁移至肿瘤部位。最后,我们分析了CCR6的过表达对免疫细胞功能的影响。发现CCR6的过表达不仅没有削弱转输的免疫细胞的正常功能,还可以促进这些细胞的活化和功能,可能进一步增强所转输的免疫细胞的抗肿瘤作用。综上,通过本课题我们证明了 CCR6-CCL20趋化因子轴可以介导免疫细胞的定向迁移,分析了CCR6-CCL20趋化因子轴在消化系统肿瘤过继细胞疗法指导细胞定向运输的潜力,为提高过继免疫细胞疗法在消化系统肿瘤中的治疗效果提供了新的策略。

目的 总结表皮生长因子受体（EGFR）基因、间变淋巴瘤激酶（ALK）基因突变共存晚期肺腺癌的有效治疗方法。方法 对1例EGFR基因、ALK基因突变共存晚期肺腺癌患者的治疗过程作回顾性分析。结果 患者因“乳腺癌术后1年余，腰痛不适半月余”就诊，实验室检查显示肿瘤标志物CEA、CA125升高，PET/CT检查、肺穿刺并骨转移瘤穿刺活检提示GSK2118436 IC50为肺腺癌并骨转移。基因检测结果显示为EGFR:exon21(L858R)突变，突变丰度为5.96%;EML4-ALK突变，突变丰度为1.76%。明确诊断为左肺腺癌（cT4N3M1cⅣb期），双侧纵隔淋巴结转移，双锁骨上淋巴结转移，左侧肺门淋巴结转移，多发骨转移，肺转移。一线予以EGFR-酪氨酸激酶抑制剂（TKI）奥西替尼（80 mg，每天一次）靶向治疗后病情进展，一线治疗无进展生存期（PFS）为6个月。一线治疗RepSox进展后，二线予以EGFR-TKI奥西替尼联合ALK-TKI阿来替尼（600 mg，每天两次）靶向治疗，疗效评价为疾病部分缓解（PR），目前已治疗15个月，二线治疗PFS尚未达到，仍继续接受奥西替尼联合阿来替尼靶向治疗。结论 对于EGFR基因、ALK基因突变共存的晚期肺腺癌患者，一线使用genetic exchange奥希替尼治疗进展后，二线使用奥西替尼联合阿来替尼治疗有效。

目的 制备一种调控释放干细胞外囊泡的微粒子递送系统，仅干预1次后长期发挥增强肝细胞增殖能力的作用。方法 采用差速离心法提取干细胞外囊泡并鉴定，透射电镜观察外囊泡结构和免疫印记检测外囊泡膜MRTX1133试剂标志蛋白，评价所提取外囊泡符合规范。采用乳液-溶剂挥发法制备“壳-核”结构聚左旋乳酸（poly-L-lactic acid, PLA）微球，在微球“核”结构位置负载干细胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）得到EVs-PLA微球。通过扫描、透射电镜检测微球及外囊泡形貌，粒径分析，缓释实验检测EVs-PLA微球缓释周期，扫描电镜检测缓释Multi-subject medical imaging data至8周EVs-PLA微球形貌变化；将EVs-PLA微球与肝实质细胞共培养，鬼笔环肽/DAPI染色评价EVs-PLA微球生物相容性和细胞毒性，CCK8评价EVsPLA微球对细胞增殖活力的影响作用，免疫印记检测EVs-PLA微球共培养后细胞中PLX3397供应商增殖标志蛋白表达量并统计数据结果。结果 对比EVs-PLA干细胞外囊泡微球处理组和对照组的肝实质细胞增殖能力评价，发现EVs-PLA微球未造成细胞凋亡和细胞结构发生变异，具有生物相容性无细胞毒性；EVs-PLA微球的“壳-核”结构调控所负载的干细胞外囊泡的释放速率和释放周期，EVs-PLA微球可缓慢释放EVs，单次干预后持续发挥促进肝实质细胞增殖的生物作用。结论 EVs-PLA微球可缓慢释放EVs，单次干预后持续发挥增强肝细胞增殖能力的作用，为探索外囊泡促肝细胞增殖的微递送系统提供了新的思路。

目的：探讨乌司他丁（UTI）调节CC趋化因子配体2(CCL2)-C-C趋化因子受体2(CCR2)信号轴对胃癌（GCWnt-C59价格）细胞上皮-间质转化（EMT）和免疫逃逸的影响。方法：qRT-PCR、Western blot分别检测GC组织/细胞中CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达水平；以不同浓度的UTI(0、100、200、400、800 U/ml)干预细胞，MTT法检测细胞增殖情况；将AGS细胞分为control组、UTI组、pcDNA组、pcDNA-CCL2组，平板克隆和Transwell小室分别检测细胞增殖、迁移genetic code、侵袭。AGS细胞和CD8+T细胞共培养后，将CD8+T分为T细胞组、共培养组、UTI组、pcDNA组、pcDNA-CCL2组，流式细胞仪检测CD8+T细胞凋亡，ELISA检测CD8+T细胞上清中IFN-γ、IL-2、TNF-α水平；Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、程序性死亡配体1(PD-L1)及CCL2-CCR2信号通路蛋白表达。结果：在GC组织/细胞中，CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达水平升高（P<0.05）;UTI显著抑制AGS细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT，降低AGS细寻找更多胞中MMP-2、Vimentin、PD-L1、CCL2、CCR2蛋白表达，升高E-cadherin蛋白表达（P<0.05）；过表达CCL2可逆转UTI对细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制作用；与T细胞组比较，共培养组CD8+T细胞IFN-γ、IL-2、TNF-α水平降低，细胞凋亡率升高（P<0.05）；与共培养组比较，UTI组CD8+T细胞IFN-γ、IL-2、TNF-α水平升高，细胞凋亡率降低（P<0.05）；与pcDNA组比较，pcDNA-CCL2组CD8+T细胞上述指标变化均显著逆转（P<0.05）。结论：UTI可能通过抑制CCL2-CCR2信号通路抑制AGS细胞的EMT和免疫逃逸。

目的:采用脓毒症外周血测序以及生物信息学技术筛选潜在的核心靶点,并探讨核心基因IL1-R2在脓毒症患者巨噬细胞中的潜在功能。方Cutimed® Sorbact®法:根据SEPSIS 3.0的定义,收集了2019年1月20日到2020年6月20日之间在西南医科大学附属医院监护室的脓毒症病例(n=15名),正常人组为对照组(n=10),采集其入院24h内的外周血样本进行RNA-seq处理;采用基于R语言的IDEP在线分析软件进行数据质控与差异基因筛选(P<0.01;log FC≥2),差异基因进行功能富集分析,选择配体-受体互作相关明显的基因,用STRING数据库进行蛋白互作分析,筛选出潜在的核心基因IL1-R2,选取GEO的公共数据集并用Meta策略,验证核心基因在脓毒症组的表达趋势,选用公共数据集“GSE65682”,用生存曲Galunisertib线分析潜在核心基因的预后相关性,然后采集5个外周血样本(NC=2;SIRS=1;SEPSIS=2),用10X单细胞测序技术对核心基因进行细胞系定位分析,再用LPS(100ng/ml)刺激THP1细胞构建脓毒症模型,并使用RT-q PCR方法验证核心基因IL1-R2的表达情况,再通过其si RNA的敲除,以及流式细胞技术探查IL1-R2对THP1细胞的极化影响,RT-q PCR监测IL1-β、TNF的表达情况。最后,讨论了敲除组与对照组细胞的差异基因测序、生物信息学分析,以及IL1-R2敲除后对下游基因的影响。结果:相对于正常组,脓毒症组患者外周血细胞中有差异表达基因913个;其中上调表达673个;下调表达240个。上调差GDC-0973分子式异基因主要富集于中性粒细胞活化、参与免疫应答、骨髓细胞活化、细胞脱颗粒等;下调基因富集于细胞成分形态发生、神经元投射形态发生、轴突发生等。经PPI互作网络分析,从差异表达基因中筛选出“IL1-R2、HGF、MMP9、IL10、TGFA、LCN2、EPHA2、SDC1、ERBB3、MIC1”等,位于核心区域,与细胞交流、信号传导有关,位于细胞膜外侧结构。通过生存曲线发现上述核心基因中的IL1-R2与脓毒症患者生存率呈现负相关,且GEO中多个公共数据集显示IL1-R2在脓毒症患者外周血中呈现高表达。单细胞测序分析发现其在单核细胞系中表达为主。通过PCR对THP1的体外模型检测,验证了IL1-R2基因在脓毒症中高表达,si RNA敲除发现:在敲除组中TNF表达增加,而IL1-β无差异变化,M1极化增加。并讨论了敲除IL1-R2以后,下游3718个基因发生了改变,其中2038个上调,1680基因下调。IL1-R2主要参与了由细胞因子所介导的信号通路,并正向调控细胞黏附,正向调节细胞因子产物等功能。结论:相对于正常组,IL1-R2基因主要位于患者外周血的单核细胞系;在脓毒症中的表达增高,且与病人预后有关,IL1-R2参与调控了巨噬细胞极化改变,或可能为其中的一个重要治疗靶点。

目的:探讨Nur77/NR4A1调控肺巨噬细胞极化在脂多糖(LPS)所致ARDS小鼠肺损伤中的作用。方法:(1)将144只SPF级C57BL/6野生型小鼠(雌雄不限)随机分组:盐水组(对照组)、LPS干预组(LPS组)、LPS+激动剂组(LPS+Csn B组)、LPS+盐水组(LPS+NS组),设4h、12h、寻找更多24h三个时间点,每组每个时间点12只小鼠。(2)采用气管插管法气道内滴注LPS(5mg/kg)建立小鼠ARDS模型,分别在造模后4h、12h、24h处死小鼠,收集肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)用于后续实验。(3)使用肺组织切片苏木精-伊红(HE)染色、肺组织湿干比重(W/D)、BALF总蛋白浓度、酶联免疫吸附试验(ELISA)进行肺组织损伤评估。(4)使用免疫组织化学法(IHC)、免疫荧光法(IF)、western blot检测M1/M2型肺巨噬细胞表达水平,以观察Nur77/NR4A1及外源性Nur77/NR4A1激动剂对LPS致ARDS小鼠肺巨噬细胞极化及肺组织损伤的影响。结果:(1)建立小鼠ARDS模型4h、12h、24h后,与对照组相比,LPS组、LPS+NS组的肺损伤明显加重,且呈时间依赖性,肺组织W/D、BALF总蛋白浓度明显增加,肺组织促炎因子TNF-α增多,Csn B干预后肺组织损伤程度明显减轻,相应时间点的肺组织W/D、BALF总蛋白浓度均有所降低,促炎因子TNF-α减少,提示小鼠ARDS模型建立成功,可用于后续实验。(2)建立小鼠ARDS模型4hvocal biomarkers、12h、24h后,与对照组相比,LPS组、LPS+NS组的i NOS、F4/80免疫荧光共定位表达增加,且呈时间依赖性,Csn B干预后相应时间点的i NOS、F4/80免疫荧光共定位表达明显减少。在滴注LPS 4h后,与对照组相比,LPS组、LPS+Csn B组、LHDAC抑制剂PS+NS组的Arg-1、F4/80免疫荧光共定位表达稍有增加,但观察组间无明显差异;在滴注LPS 12小时后,与对照组相比,LPS组、LPS+NS组的Arg-1、F4/80免疫荧光共定位表达较4h肺组织增加,而LPS+Csn B组Arg-1、F4/80免疫荧光共定位表达较LPS组、LPS+NS组明显增加,在滴注LPS 24小时后,与对照组相比,LPS组、LPS+Csn B组、LPS+NS组的Arg-1、F4/80免疫荧光共表达均有明显增加。(3)建立小鼠ARDS模型4h、12h、24h后,与对照组相比,小鼠肺组织的IL-1β的表达明显增加,且呈时间依赖性,Csn B干预后相应时间点小鼠肺组织IL-1β的表达明显减少。在LPS滴注4h后,各组小鼠肺组织Arg-1无明显表达,在LPS滴注12h后小鼠肺组织Arg-1呈现表达峰值,其余对照组、LPS组、LPS+NS组无明显表达;在LPS滴注24小时后,与对照组相比,LPS组、LPS+Csn B组、LPS+NS组均呈现高表达。结论:Nur77/NR4A1可通过其介导的抗炎效应对LPS所致小鼠ARDS发挥保护性作用,并可调节肺巨噬细胞在炎症早期极化为M2型巨噬细胞,逆转肺部炎症微环境以发挥保护作用。

本项目GW4869小鼠发现中药金不换中提取的单体化合物氧化克班宁是拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶Ⅱα的双重抑制剂,且能够嵌入DNA是拓扑异构酶Ⅱα的催化抑制剂。氧化克班宁能够进入人乳腺癌MCF-7细胞下调TopoⅠ、TopoⅡα蛋白,造成MCF-7细胞DNA损伤且激活DNA损伤蛋白修复通路ATR-CHK1,抑制CHK2蛋白磷酸化水平,同时增加了组蛋白H3的磷酸化水平。通过有丝分裂灾难相关p53依赖性通路,氧化克班宁增加p53及p21蛋白表达,同时下调有丝分裂灾难相关p53非依赖性通路Cdc25C及抑制Cdc2蛋白表达水平,增加p-Cdc2蛋白的表达,多重途径降低Cdc2的蛋白含量,导致细胞G2/M检查点异常,进一步下调Aurora A及PLK1的蛋白表达水平,抑制Cyclin B1蛋白泛素化水解,导致MCF-7细胞质内Cyclin B1蛋白的蓄积,进而诱导MCF-7细胞内微管形态的破坏。氧化克班宁作用于微管的秋水仙碱位点,靶向微管蛋白;通过下调微管关键性蛋白STAT3、PAK1、CAMK购买BMS-9073514和PKA的蛋白endometrial biopsy表达水平,破坏微管动态平衡,以及通过下调RhoA、ROCK1、ROCK2和F-actin蛋白表达量,抑制Rho/ROCK通路,导致MCF-7细胞有丝分裂阻滞,产生有丝分裂灾难典型的形态学改变,引发MCF-7细胞发生有丝分裂灾难。本课题组前期实验表明氧化克班宁可导致Topo抑制活性、DNA损伤、周期阻滞和微管动力学增强,同时可进一步调控周期阻滞,造成乳腺癌MCF-7细胞有丝分裂灾难及微管解聚。因此进一步确定氧化克班宁对微管蛋白的作用及其影响。为氧化克班宁作为阿朴菲生物碱在抗乳腺癌方面提供科研依据,同时氧化克班宁作为一种治疗新型的微管抑制剂来研究,这对于加快阿朴菲生物碱和微管抑制剂的开发奠定了坚实基础,助力中药抗乳腺癌的研究。

目的:分析探讨核医学影像诊断多发性骨髓瘤的临床效果。方法:以我院2020年9月至2022年7月期间收治的多发性骨髓瘤患者80例为研究对象，随机划分至对照组n=40(X光GSK1349572临床试验检查)及研究组n=40(核医学影像检查),记录评价差异化检查结果。结果:研究组内含脊椎骨髓瘤21例，脊椎外浆细胞瘤1Biotic surfaces1例，脊椎骨浆细胞瘤8例，检出率为100.0AG-221纯度0%,与对照组82.50%形成明显数据差异(P<0.05);对照组患者进行X光检查显示，平片检查未发现明显异常。然而，仔细观察疑似病变部位时发现存在溶骨性病变，其边缘无明显硬化，同时观察到长骨内膜破坏现象。此外，在实际检查过程中，患者的胸骨、肋骨、肩胛骨和脊柱等部位的显影效果不佳。进一步采用MRI检查显示，部分患者的病变骨质结构呈T1和T2信号异常。其中，有4例患者存在椎体及其附件的受累情况。讨论:核医学影像在多发性骨髓瘤患者的临床应用中具有较高的检出准确率，并且能够清晰地观察患者疾病的发展情况，可为临床制定针对性治疗方案提供有价值的参考。

研究目的:胰岛素抵抗(IR)是多种慢性病的主要发病原因,热量过度摄入与长期久坐的生活方式容易导致肥胖而引起IR,与巨噬细胞M1型极化有关。而内脏脂肪和皮下脂肪作为两种不同类型的脂肪组织,在调节能量代谢和炎症反应方面具有重要的作用。有氧运动兼具减脂与提高胰岛素敏感性等作用,但对内脏脂肪和皮下脂肪的慢性炎症和巨噬细胞极化的改善效果尚不明确。本研究采用普通膳食与高脂膳食诱导的胰岛素抵抗小鼠模型为实验对象,施以8周有氧运动干预,验证运动对胰岛素抵抗及糖脂代谢的改善作用,探究有氧运动对内脏脂肪和皮下脂肪的慢性炎症及巨噬细胞极化的影响。研究方法:62只5周龄C57BL/6小鼠随机分为正常膳食组(N,n=23)与高脂膳食组(H,n=39),喂养12周后分为正常安静组(NS,n=8),正常运动组(NE,n=10),高脂安静组(HS,n=12)和高脂运动组(HE,n=14)。高脂组喂养脂肪供能比为60%的高脂饲料;运动组进行最大运动强度的50%-60%的跑台运动,1h/天,5天/周,持续8周。记录每周的摄食量,体重和空腹血糖(FBG),运动分组及正式取材前腹腔注射浓度为50%的葡萄糖注射液(2g/kg)以分析其葡萄糖耐量。通过葡萄糖耐量试验(IPGTT)结果的血糖值曲线下面积(AUCIPGTT)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价胰岛素抵抗模型小鼠。干预结束次日取附睾脂肪组织(e WAT)和皮下脂肪组织(sWAT)称湿重并计算脂体比,结合试剂盒检测的血清甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),评价脂代谢。酶联免疫吸附测定血清炎症因子IL-1β、TNF-α以及附睾和皮下Imidazole ketone erastin细胞培养脂肪组织的IL-1β、IL-10水平,评价系统性及脂肪局部慢性炎症状态。HE染色观察附睾脂肪与皮下脂肪组织各横截面积范围的脂肪细胞数量,免疫荧光染色检测巨噬细胞极化相关蛋白表达与定位。Western Blot检测附睾脂肪和皮下脂肪组织的Perilipin1蛋白表达量,评价其脂肪细胞的脂滴功能水平。采用Shapiro-Wilk检验对数据进行正态性检验。验证胰岛素抵抗模型采用单样本t检验。每周监控的指标采用单因素重复测量方差分析。服从正态分布的各组数据采用双因素方差分析,不服从正态分布的则采用Scheirer-Ray-Hare检验。研究结果:1)12周高脂膳食干预后小鼠FBG(P<0.01)、HOMA-IR(P<0.05)水平显著升高,50%葡萄糖注射液后的第0、30、60、90、120min血糖水平均显著升高(P<0.001),AUCIPGTT显著增加(P<0.001),表明高脂膳食成功诱导小鼠胰岛素抵抗。8周有氧运动干预显著降低小鼠FBG(P<0.001)、HOMA-IR(P<0.001)、葡萄糖注射后的第0、30、60、90、120min血糖水平以及AUCIPGTT(P<0.001),改善IR。2)试剂盒方法检测血脂四项,发现NS组的血清TC(P<0.01),LDL-C/HDL-C(P<0.001)水平显著上升,体重以及e WAT(P<0.001)和sWAT(P<0.001)脂体比也显著上升;8周有氧运动干预有效降低胰岛素抵抗小鼠体重(P<0.05)、脂体比(P<0.05,P<0.05)、TC(P<0.05)和LDL-C/HDL-C(P<0.01)水平。说明本研究中高脂膳食降低小鼠脂代谢,而8周有氧运动具有改善脂代谢的作用。3)HE染色检测脂肪细胞形态,计算各横截面积下的脂肪细胞数量,发现HS组e WAT中横截面积为4000-8000μm~2(P<0.01)的脂肪细胞数量均显著增加,sWAT中3000-6000μm~2(P<0.05)的脂肪细胞数量均显著增加;NE组sWAT中横截面积<1000μm~2(P<0.001)的脂肪细胞数量显著增加,而2000-4000μm~2(P<0.05)的细胞数量显著减少;HE组e WAT中横截面积<1000μm~2(P<0.001)的脂肪细胞数量显著增加,而3000-6000μm~2(P<0.05)和7000-8000μm~2(Trichostatin A临床试验P<0.05)的脂肪细胞数量显著减少;sWAT中横截面积为3000-5000μm~2(P<0.01)的脂肪细胞数量显著减少。说明高脂膳食小鼠中e WAT的脂肪细胞扩增更严重,而8周有氧运动干预后sWAT的脂肪细胞增生更强。4)Western Blot方法检测脂肪组织脂滴功能水平发现,与NS组相比,e WAT(P<0.01)和sWAT(P<0.05)HS组的Perilipin1蛋白表达量下降,sWAT的NE组表达量显著升高(P<0.001)。说明8周有氧运动能增强健康小鼠sWAT的脂滴功能,却未能扭转由高脂膳食引起的脂肪组织脂滴功能减弱。5)酶联免疫吸附法检测血清、附睾脂肪和皮下脂肪组织炎症因子水平发现,高脂膳食小鼠e WAT(P<0.001)和sWAT(P<0.01)的IL-1β水平显著上升,IL-10水平(P<0.05,P<0.001)显著下降;8周有氧运动干预后的e WAT(P<0.001)和sWAT(P<0.05)IL-1β水平显著下降,sWAT的IL-10水平(P<0.001)显著上升。而12周和20周高脂膳食oncolytic immunotherapy干预后血清炎症因子TNF-α(P=0.747,P=0.237)和IL-1β(P=0.237,P=0.147)水平均无明显改变。提示可能存在其它组织与促炎组织抗衡。6)免疫荧光染色检测附睾脂肪和皮下脂肪组织巨噬细胞极化水平,发现e WAT中HS组的CD11C/CD206平均荧光强度显著高于NS组(P<0.001);与HS组相比,HE组的CD11C/CD206平均荧光强度显著降低(P<0.01);在sWAT中,各组间的CD11C/CD206平均荧光强度无显著差异。提示e WAT相较sWAT的巨噬细胞极化的调节作用可能在脂肪组织慢性炎症和IR中影响更大。研究结论:高脂膳食未引起小鼠产生系统性慢性炎症,但导致小鼠内脏脂肪和皮下脂肪组织慢性炎症,并且内脏脂肪的巨噬细胞M1极化/M2极化较皮下脂肪更严重。有氧运动改善胰岛素抵抗小鼠糖脂代谢以及内脏和皮下脂肪组织的慢性炎症。高脂膳食对白色脂肪组织的负面影响倾向于内脏脂肪,有氧运动的积极作用则倾向于皮下脂肪。

背景:三阴性乳腺癌(TNBC)是恶性程度最高的乳腺癌,目前缺乏有效的靶向治疗,迫切需要探索具有独特靶向作用的药物来克服三阴性乳腺癌的治疗挑战。目的:本研究通过体内和体外实验评估β-榄香铜酸对三阴性乳腺癌的治疗疗效及其作用机制。方法:首先在体外培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和鼠三阴性乳腺癌细胞4T1,使用MTT法检测不同浓度的β-榄香铜酸分别对MDA-MB-231细胞和4T1细胞在24h、48h、72h的细胞活性影响。使用平板克隆实验检测β-榄香铜酸对MDA-MB-231细胞和4T1细胞增殖能力的影响。使用划痕实验、Transwell迁移与侵袭实验检测β-榄香铜酸对MDA-MB-231细胞和4T1细胞横向、纵向迁移能力以及侵袭能力的影响。使用流式细胞术检测MDA-MB-231细胞和4T1细胞凋亡以及周期。使用Fe~(2+)试剂盒检测β-榄香铜酸处理后MDA-MB-231细胞和4T1细胞Fe~(2+)的表达水平,使用脂质过氧化相关检测试剂盒检测ROS、Lipid ROS、GSH、MDA、4-HNE,上述实验加铁死亡抑制剂Ferrostatin-1进行干预。通过Western blot检测铁死亡相关蛋白GPX4、PTGS2、SLC7A11、P53以及凋亡相关蛋白P53、Bax、Bcl-2、Caspase3的表达情况。其次通过构建同源移植肿瘤小鼠模型来研究其体内效应。使用HE染色、免疫组化实验来验证β-榄香铜酸对体内脏器是否存在毒性反应以及发挥效应的潜在机制。结果:MTT实selleck NMR验和平板克隆实验结果表明β-榄香铜酸以浓度及时间依赖性的方式抑制MDA-MB-231细胞和4T1细胞的增殖活性。划痕实验、Transwell迁移与侵袭实验表明β-榄香铜酸呈浓度方式抑制MDA-MB-231细胞和4T1细胞的横向、纵向迁移能力以及侵袭能力。流式细胞凋亡以及周期实验表明β-榄香铜酸呈浓度依赖性方式诱导MDA-MTransferase抑制剂B-231细胞和4T1细胞发生凋亡并且使细胞停止生长在G1期。Western blot实验表明β-榄香铜酸可上调MDA-MB-231细胞和4T1细胞的P53、Bax、Caspase3、PTGS2的表达水平,下调Bcl-2、GPX4、SLC7A11。体外研究表明β-榄香铜酸可激活乳腺癌中的铁死亡通路和凋亡通路,明显抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和4T1的生长并诱导细胞死亡。体内研究表明β-榄香铜酸有效抑制了同源移植肿瘤小鼠的肿瘤生长且无明显毒性。结论:本实验通过细胞实验和动物实验表明β-榄香铜酸能够诱导Automated Liquid Handling Systems三阴性乳腺癌铁死亡和凋亡,并且可以在三阴性乳腺癌中发挥显著的抗肿瘤活性。