Achr receptor

目的:牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)是慢性牙周炎的主要致病菌,具有外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)等多种毒力因子。由于囊泡膜结构的保护,P.gingivalis OMVs可以避免被降解并实现长距离传递,比细菌具有更强的毒性。铁死亡是一种铁依赖性的细胞程序性死亡,在炎症性疾病的发生发展中起着至关重要的作用。近年来的研究表明,P.gingivalis与肠道系统疾病密切相关,但关于其OMVs诱导铁死亡并加重肠道炎症的报道较少。在本实验中,我们研究了P.gingivalis OMVs对肠上皮细胞炎症反应的影响,并探索铁死亡在肠上皮炎症中的致病作用及机理,为牙周炎与肠道炎症性疾病之间的关系提供新的依据,为肠道系统疾病的防治提供新思路。材料与方法:1、用超高速离心法结合超滤selleck产品法提取P.gingivalis W83的OMVs,并测定其浓度,再用透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)和纳米粒径追踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)对其进行鉴定。2、P.gingivalis OMVs(10μg/m L)刺激人直肠腺癌细胞(Caco-2)12 h后用TEM观察其线粒体的形态变化。3、用quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)检测P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞0 h、6 h和12 h后,白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、IL-18和IL-1βmRNA的表Biogeophysical parameters达水平。4、P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞0 h、6 h和12 h后,用微量酶标法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量,使用亚铁嗪微板法检测Fe~(2+)的含量,用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,用微板法检测还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量。5、P.gingivalis OGSK1349572供应商MVs刺激Caco-2细胞0 h、6 h和12 h后,用qRT-PCR、Western blot或免疫荧光检测储铁蛋白重链(ferritin heavy,FTH)、氧化型低密度脂蛋白受体1(oxidized low-density lipoprotein receptor 1,LOX-1)和铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis-suppressor-protein 1,FSP1)的mRNA或蛋白表达。6、使用铁死亡抑制剂Liproxstatin-1(1μmol/L)预处理12 h后,观察P.gingivalis OMVs刺激的Caco-2细胞线粒体形态的变化,检测IL-6、TNF-α、IL-18、IL-1β、FTH、LOX-1和FSP1的mRNA或蛋白表达水平以及Fe~(2+)、MDA和GSH的含量。7、本实验结果采用SPSS Statistics 25进行统计学分析,P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1、超高速离心法结合超滤法成功从P.gingivalis W83培养液中提取OMVs。2、TEM结果显示P.gingivalis OMVs诱导下的Caco-2细胞线粒体变小,膜密度增高,嵴数量减少。3、10μg/m L的P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞6 h和12 h后,炎症因子IL-6、TNF-α、IL-18和IL-1βmRNA的表达水平升高(P<0.05)。4、细胞毒性分析结果显示,P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞后,LDH含量显著增高,细胞损伤及死亡数量增加(P<0.05)。5、qRT-PCR及微板法结果显示,P.gingivalis OMVs刺激使Caco-2细胞的FTH mRNA的表达水平升高,MDA和Fe~(2+)含量升高,GSH含量降低(P<0.05)。6、在P.gingivalis OMVs刺激下,LOX-1的mRNA表达水平升高,FSP1的mRNA及蛋白表达下降,而LOX-1的Western blot及免疫荧光结果均显示其蛋白表达水平下降(P<0.05)。7、在Liproxstatin-1的作用下,P.gingivalis OMVs刺激的Caco-2细胞线粒体形态改善,IL-6、TNF-α、IL-18、IL-1β和FTH mRNA的表达水平降低,LDH、MDA和Fe~(2+)含量降低,GSH含量增高,LOX-1的mRNA表达水平下降而蛋白水平上升,FSP1的mRNA及蛋白表达水平均上升(P<0.05)。结论:P.gingivalis OMVs通过诱导铁死亡而加重肠上皮细胞炎症反应。

目的:探讨核转录因子NAC-1基因沉默对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤MK-2206抑制剂化疗敏感性的影响。方法:采用LV4-LUC-GFP慢病毒转染建立NAC-1基因沉默SKOV3/DDP细胞株，将细胞接种到免疫缺陷小鼠皮下，建立人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤模型，给予顺铂化疗，比较NAC-1基因沉默对SKOV3/DDP在裸鼠体内增殖的影响。取肿瘤组织进行转录组测序，利用Illumina平台进行转录组mRNA测序，筛选差异表达基因，并进行GO和KEGG功能注释和富集分析，揭示NAC-1基因影响移植瘤化疗敏感的可能分子机制。使用STRING数据库构建DEGs编码蛋白互作网络，筛选MCC算法、Degree算法、Closeness算法3种算法共有基因作为关键基因，使用Metascape网站在线分析这些共同基因的基因功能。结果:与对照组相比，抑制Nemergent infectious diseasesAC-1基因后裸鼠皮下肿瘤体积变小，重量减轻，差异有统计学意义(P<0.05)。转录组学分析显示，CH-223191细胞培养抑制NAC-1基因导致肿瘤组织中460个基因显著下调，568个基因显著上调。差异基因(DEGs)在多项GO富集类别中具有显著差异，如细胞代谢、有丝分裂、坏死、炎症、信号传递等。KEGG功能富集结果显示，NAC-1基因沉默可能影响了细胞因子-细胞因子受体相互作用、白细胞跨内皮迁移、神经活性配体-受体相互作用、细胞黏附分子、坏死、ECM受体相互作用、PI3K-Akt信号通路、NF-κB信号通路等。筛选获得的关键基因主要富集在白细胞介素的信号传导、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)通路、炎症反应等通路。结论:抑制NAC-1基因能提高人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP化疗敏感性，其可能通过多个信号通路影响肿瘤细胞的代谢、增殖、死亡、炎症反应等。

目的 观察聚乙二醇干扰素α-2b联合富马酸丙酚替诺福韦治疗慢性乙型肝炎的临床效果。方法 选取2021年1—12月龙岩市第二医院收治的慢性乙型肝炎患者30例作为研究对象，采用随机Adavosertib小鼠数字表法分为观察组和对照组，各15例。对照组予富马酸丙酚替诺福韦片治疗，观察组在对照组基础上加用聚乙二醇干扰素α-2b注射液治疗，2组均治疗12个月。比较2组治疗效果，治疗6Puromycin分子式、12个月时HBeAg血清转阴率和转换率，以及不良反应。结果 观察组患者治疗总有效率为93.33%,高于对照组的60.00%(χ~2=4.658,P=0.031);治疗12个月时，观察组HBV-DNA载量较治疗前与6个月时降低，且观察组低于对照组(P<0.01);治疗12个月时，观察组HBeAg血清转阴率和转换率均高于对照组(P<0.05);2组皮疹和甲状腺功能异常发生率比较差异无统计学意义(P>0.05),脱发、流感样症状、ALT升高、血常规异常等不良反应发生率观察组高于对照组(P均<Sediment remediation evaluation0.01),经对症处理后均缓解。结论 聚乙二醇干扰素α-2b联合富马酸丙酚替诺福韦在慢性乙型肝炎治疗中应用效果肯定，利于提高HBeAg血清转阴率和转换率，且药物不良反应可控。

人的运动信息可以广泛应用于人机交互,医疗健康等领域。包含运动信息的电生理信号一般可以分为selleckchem三类:肌电信号,脑电信号和周围神经信号。其中,肌电信号的获取相对简单,处理方便,产生超前于运动的发生,被广泛应用于人体运动信息的提取。根据采集方式的不同,肌电信号主要分为肌内肌电信号和表面肌电信号。相比于肌内肌电信号,表面肌电信号的采集更加简单且无创,有更加广泛的应用。在一些精确获取人体运动意图和诊断神经肌肉系统疾病过程中,需要进一步分解表面肌电信号以得到运动单元发放时间序列信息。目前的分解方法以卷积核补偿(Convolution Kernel Compensation,CKC)算法为代表。然而,卷积核补偿算法存在分解速度过慢和无法满足实时应用等问题。针对以上问题,本论文的具体研究内容为:(1)离线分解方法中,基于卷积核补偿算法和梯度卷积核补偿(gradient Convolution Kernel Compensation,g CKC)算法,提出一种快速梯度卷积核补偿(fast g CKC,fg CKC)算法,用于离线分解表面肌电信号中运动单元发放时间序列的提取,该算法通过引入指数加权移动平均模型来优化互相关向量的计算过程。在迭代更新时,此模型不仅考虑当前时刻观测值,还综合考虑之前所bone and joint infections有时刻观察值对当前时刻观察值的影响,以加快梯度收敛速度,进而提高表面肌电信号的分解效率。在分解仿真表面肌电信号实验中,发现在不同信噪比水平条件下,与梯度卷积核补偿算法相比,本文提出算法的selleck PD0325901分解速度提高了3-4倍,解决了离线分解速度过慢的问题,为提取表面肌电信号运动信息提出了一种更为高效的方法。(2)在线分解方法中,针对离线分解方法很难实时地分解表面肌电信号,无法满足实时响应场景需求的问题,在离线分解方法基础上,采用滑动窗口分解表面肌电信号。在线分解方法包括离线预训练和在线滑动窗口两个过程:离线预训练使用快速梯度卷积核补偿算法计算互相关向量时进一步聚类运动单元发放时间序列,并将结果输入到在线分解过程中。在线分解计算互相关向量时不再进行复杂的迭代,而是将同一运动单元产生的发放时刻归并到同一集合中,滑动窗口根据分解结果自适应更新互相关矩阵和互相关向量,最后估计出运动单元发放时间序列。相比于离线分解方法,当在线分解方法中滑动窗口大小为3秒时,可以在毫秒级时间内完成对表面肌电信号的分解,达到了实时分解要求,满足了一些实时响应的需求。

目的:通过检测不同证型胃食管反流病伴焦虑抑郁患者的血清脑肠肽水平,拟探讨不同中医证型胃食管反流病伴焦虑抑郁患者脑肠肽水平分布情况,为胃食管反流病伴焦虑抑郁患者的中医辨证治疗提供更多客观依据,从而更好的指导本病中医辨证治疗。方法:纳入2021年8月至2022年8月于广西中医药大学附属第一医院脾胃科门诊及病房就诊,明确诊断为胃食管反流病的患者完成焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)评分,经过SAS、SDS评分后诊断伴有焦虑抑郁的GERD患者共85例。按胃食管反流病中医诊疗共识意见证候诊断标准辨证分为:肝胃郁热证、胆热犯胃证、中虚气逆证、气郁presumed consent痰阻证、瘀血阻络证、脾胃湿热证6种证型。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测GERD伴有焦虑抑郁患者血清脑肠肽Ghrelin、Leptin、CGRP、NPY、5-HT水平。采用SPSS 23.0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差((?)±s)表示;符合正态分布的计量数据采用t检验,不符合正态分布的计量数据资料采用非参数检验。P值<0.05表示结果具有统计学意PI3K抑制剂义。通过分析,探讨不同中医证型胃食管反流病伴焦虑抑郁患者的脑肠肽水平分布情况。结果:(1)GERD伴焦虑抑郁患者的SAS、SDS评分在中医证型间差异具有统计学意义(P<0.05),其中肝胃郁热证与胆热犯胃证的评分最高。(2)Leptin、CGRP水平在GERD伴焦虑抑郁患者各中医证型中的差异不具有统计学意义(P>0.05)。(3)Ghrelin、NPY、5-HT水平在GERD伴焦虑抑郁患者各中医证型中的差异具有统计学意义(p<0.05)。Ghrelin血清水平在肝胃郁热证与中虚气逆证、胆热犯胃证与中虚气逆证两两之间差异有统计学意义(p<0.05)。NPY血清水平在肝胃郁热证与气郁痰阻证selleck激酶抑制剂、肝胃郁热证与中虚气逆证、胆热犯胃证与气郁痰阻证两两之间差异有统计学意义(p<0.05)。5-HT血清水平在肝胃郁热证与中虚气逆证、肝胃郁热证与气郁痰阻证、肝胃郁热证与淤血阻络证、肝胃郁热证-脾胃湿热证、胆热犯胃证与中虚气逆证、胆热犯胃证与气郁痰阻证、胆热犯胃证与淤血阻络证、胆热犯胃证-脾胃湿热证两两之间差异有统计学意义(p<0.05)。结论:(1)肝胃郁热证与胆热犯胃证GERD伴焦虑抑郁患者的焦虑抑郁程度更甚。(2)Leptin、CGRP水平与GERD伴焦虑抑郁中医证型无明显相关。(3)Ghrelin、NPY、5-HT水平与GERD伴焦虑抑郁中医证型有关,Ghrelin在中虚气逆证水平最低,NPY在中虚气逆证、痰气郁组证水平较低,5-HT在肝胃郁热证和胆热犯胃证水平较低。

目的 探讨连接黏附分子A(JAM-A)在宫颈癌细胞进展中的作用及其潜在分子机制。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测JAM-A在宫颈癌患者癌组织中的表达水平。将Vector、pcDNA-JMEK抑制剂AM-A、NC-siRNA、JAM-A-siRNA质粒分别转染至宫颈癌细胞中，CCK-8检测细胞增殖能力；Transwell实验检测细胞侵袭能力；细胞划痕实验检测细胞迁移能力；Western blotting分别检测细胞中JAM-A、PCNA、MMP-2、E-cadherin及FAK/ERK通路蛋白的水平。进行裸鼠皮下成瘤实验，检测JAM-A对宫颈癌细胞体内肿瘤生长的影响。结果 与癌旁组织比较，宫颈癌组织中JAM-A mR点击此处NA和蛋白水平均显著上调。过表达JAM-A可显著增强细胞增殖、侵袭和迁移能力，升高JAM-A、PCNA、MMP-2蛋白表达，降低E-cadLiver biomarkersherin蛋白表达。敲低JAM-A可显著抑制细胞增殖、侵袭和迁移能力，降低JAM-A、PCNA、MMP-2蛋白表达，升高E-cadherin蛋白表达。pcDNA-JAM-A+PF-562271组细胞中p-ERK2蛋白表达较pcDNA-JAM-A+Vehicle组显著降低。pcDNA-JAM-A组裸鼠皮下肿瘤的质量和体积较Vector组显著增加。结论 过表达JAM-A通过调控FAK-ERK2信号通路促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移。

目的:探讨应用加减小柴胡汤治疗阵发性心房颤动(肝火上扰型)的临床疗效及其安全性,为阵发性房颤治疗提供新思路。材料与方法:选取2020年9月至2023年1月,符合诊断阵selleck NVP-TNKS656发性心房颤动(肝火上扰型)标准的辽宁中医药大学附属医院心内一科门诊患selleck AM-2282者共60例,随机分组,分为对照组和试验组,两组各30例患者。两组患者均口服琥珀酸美托洛尔缓释片治疗,在此基础上,试验组加用加减小柴胡汤治疗,进行为期4周的临床研究,观察记录治疗前后房颤平均发作次数及持续时间、中医证候疗效积分、房颤特异生活质量评估量表及心室率指标,以及生命体征,理化检验及不良反应等,统计并分析数据,从而进行临床疗效评价及安全性分析。结果:1.中医疗效比较中医证候总疗效对照组总有效率为70.00%,试验组总有效率为86.67%,且两组中医证候总疗效的差异有统计学意义(P<0.05)。经治疗后,两组患者的中医证候总积分均显著改善(P<0.01),且相对于对照组,试验组的改善情况明显更优(P<0.05)。两组患者单项证候积分经治疗后均明显改善(P<0.01),且试验组在心悸、胸闷、口苦咽干、胸胁胀痛和目赤耳鸣5项的单项证候改善情况明显优于对照组(P<0.05),在不思饮食、头晕头胀和便秘赤溲3项也有所改善,但与对照组相比,改善情况无统计学差异(P>0.05)。2.西医疗效比较治疗后两组患者房颤平均发作次数及持续时间、房颤特异生活质量量表及心室率控制方面均明显改善(P<0.05),且相对于对照组,试验组的改善情况Korean medicine明显更优(P<0.05)。3.安全性评价试验前后两组患者的生命体征、各项理化检验和检查均未见明显异常。试验期间对照组有1例患者出现轻微的胃部不适和恶心,经调整方药和服用时间后好转,患者治疗期间均未出现明显不良反应。结论:1.加减小柴胡汤能够明显改善阵发性房颤(肝火上扰型)患者的中医临床证候。2.加减小柴胡汤能够明显减少阵发性房颤(肝火上扰型)患者的房颤平均发作次数及持续时间,可有效控制患者的心室率,且可明显改善患者的生活质量。3.加减小柴胡汤治疗阵发性房颤(肝火上扰型)具有较好的安全性。

背景:血栓栓塞事件是心房颤动患者的并发症之一,而栓子主要来源于左心耳Autoimmune haemolytic anaemia,左心耳封堵术(Left artial appendage clPLX-4720研究购买osure,LAAC)通过封堵器对左心耳进行封堵,使左心房内的血液不再自由出入左心耳,左心耳隔绝独立于血液循环,从而预防房颤导致的血栓栓塞事件。LAAC术作为介入治疗的一种,在心功能方面的探索日渐增多,国内外已有研究表明LAAC术有利于房颤患者心功能的改善。LAAC术能减少流向左心耳的血流,继而减少左心室充盈。而LAAC术术中残余分流,即左房与左心耳交口存在血流束,局部湍流,相对术中无残余分流,加重对心内膜表面的损害。是否存在残余分流使左房与左心耳血流存在差异,本研究对LAAC术术中残余分流对房颤患者术后心功能的影响作进一步探索。目的:研究左心耳封堵术术中残余分流对房颤患者术后心功能的影响,为行LAAC术是否有必要做到封堵装置无残余分流的目标提供依据。方法:连续性选取安徽医科大学第二附属医院2020年9月至2022年5月收治的因非瓣膜性房颤行左心耳封堵术的患者4获悉更多0例作为研究对象,研究对象均在安徽医科大学第二附属医院完成LAAC术,术中释放封堵器后造影评估封堵效果,需确保无残余分流或残余分流直径小于5mm,根据术中有无残余分流进行分组,无残余分流组和有残余分流组。结束手术至术后3个月复诊期间,均规范口服利伐沙班15mg qd。术前及术后3个月收集记录经食道超声心动图结果和NT-pro BNP,评估NYHA心功能分级。对收集的资料进行统计分析。结果:无残余分流组和有残余分流组术前一般临床资料及术前NT-pro BNP、左心室内径LV、左心室射血分数LVEF、NYHA分级未见明显差异(p>0.05)。不论是无残余分流组还是有残余分流组,术后3个月NT-pro BNP小于术前,LV小于术前、LVEF大于术前,NYHA分级优于术前,手术前后自身对比均具有统计学意义(p<0.05)。且在术后3个月,无残余分流组的NT-pro BNP低于有残余分流组,LV小于有残余分流组、LVEF大于有残余分流组,NYHA分级优于有残余分流组,组间对比有统计学差异(p<0.05)。结论:1.无论是术中有残余分流,还是无残余分流,无残余分流组和有残余分流组术后的心功能指标(LVEF、NT-pro BNP以及NYHA心功能等级)均较术前改善,说明行LAAC术有利于改善患者心功能。2.两组研究对象在LAAC术后的心功能指标组间对比中,无残余分流组的的心功能指标(LVEF、NT-pro BNP以及NYHA心功能等级)优于有残余分流组,组间比较有统计学差异(p<0.05)。说明对于非瓣膜性房颤的患者行LAAC术时,为了使心功能改善结局最优化,需尽量做到封堵装置无残余分流的目标。

【背景和目的】右心失代偿后的右心衰竭是肺动脉高压患者的并发症和主要死因。心肌纤维化是心力衰竭的主要病理机制。心肌成纤维细胞的激活,分化和细胞外基质的分泌是形成心肌纤维化的重要因素。研究表明结缔组织生长因子(CTGF)是器官的重要纤维化调控因子,CTGF作用广泛:在肝脏纤维化中,参与到肝星状细胞的增殖、分化、粘附、迁移、细胞外基质的释放等;在肾脏纤维化中C3-MA核磁TGF受到TGF-β的调控,通过激活Wnt通路增强胶原蛋白的表达;在心肌纤维化中,CTGF作为中间调节因子,可以正反馈诱导TGF-β的表达,激活肌成纤维细胞,加速纤维化反应。但目前对于其稳定性调控未知。我们前期发现在小鼠肺动脉缩窄(Pulmonary Artery Contraction,PAC)模型术后中出现明显的右心纤维化,去泛素化酶USP7在其中表达明显升高。我们在心肌成纤维细胞中的研究发现USP7与CTGF之间存在相互作用,USP7影响CTGF的泛素化水平,调控成纤维细胞的增殖。本研究旨在探讨USP7可能通过稳定CTGF蛋白调控心肌纤维化的作用。【研究方法】1.C57/BL6小鼠构建PAC模型。实验分为两组:WT Sham组和WT PAC组。Masson染色用于检测右心心肌胶原纤维改变情况。Western blot检测右心心肌组织中USP7的蛋白表达量。2.从SD大鼠新生乳鼠中提取原代心肌成纤维细胞(Neonatal Rat Cardiac Fibroblasts,NRCFs),通过TGF-β刺激构建体外心肌纤维化模型。实验分为两组:空白组和TGF-β模型组。Western blot检测USP7和纤维化相关的标志物蛋白(CollagenⅢ、CTGF、α-SMA)的表达。3.利用质谱技术进行USP7与CTGF的相关性研究。4.采用免疫共沉淀技术,研究USP7与CTGF的相互作用,研究USP7对于CTGF的泛素化水平调控。5.向NRCFs中加入环己酰亚胺(Cycloheximide,CHX)抑制蛋白质的合成,同时抑制USP7的作用。实验分为两组:DMSO+CHX组与P5091+CHX组。Western blot检测CTGF的表达,探讨USP7对CTGF的稳定作用。6.在体外心肌纤维化模型中,运用不同处理抑制USP7的作用(P5091抑制USP7的活性,si RNA干扰USP7的表达)。MTS实验检测心肌成纤维细胞活力,Western blot检测CTGF的表达,探讨USP7对心肌成纤维细胞的增殖和CTGF的调控作用。【研究结果】1.USP7在右心纤Belumosudil溶解度维化组织中表达增加:PAC术后的小鼠右心心肌组织发生明显的纤维化。在小鼠PAC模型建立后的第3天和第7天取出心脏组织,去除心房和左室壁后进行匀浆提取蛋白质,用Western blot检测,结果显示PAC模型组中USP7表达升高。2.USP7在体外心肌纤维化模型中表达升高:提取NRCFs,WesterPreformed Metal Crownn blot结果显示在TGF-β刺激的成纤维细胞中,USP7蛋白表达量明显升高。3.USP7与CTGF相互作用:质谱分析结果显示USP7与CTGF之间存在相互作用。4.USP7稳定CTGF的表达:Western blot结果显示,抑制USP7可以加快CTGF的降解。5.USP7调控CTGF的泛素化:免疫共沉淀结果显示,USP7与CTGF可以互相结合,抑制或敲低USP7可增加CTGF的泛素化水平。6.USP7影响成纤维细胞的增殖和CTGF的表达:MTS结果显示抑制或敲低USP7可降低成纤维细胞活力。Western blot结果显示抑制或敲低USP7可降低CTGF的表达。【结论】1.去泛素化酶USP7在PAC后的小鼠右心心肌组织中表达升高。2.去泛素化酶USP7可能通过CTGF的泛素化降解调控右心心肌组织纤维化进程。

目的:探讨三种不同亚型TGF-β在糖尿病小鼠心脏中的差异表达水平。方法:(1)取糖尿病小鼠心脏组织与正常小鼠心脏组织,采用Western Blot及RT-qPCR方法检测CollagenⅠ、CollagenⅢ的蛋白和m RNA表达;(2)采用Western Blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测小鼠心脏组织中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的表达水平;(3)30 m M HG处理MCFs,采用CCK-8法检测MCFs的细胞活力;采用Western blot及RT-qPCR法检测CollagenⅠ、Collagen Ⅲ和TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的表达水平;(4)不同浓度TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3处理MCFs 24 h后,采用CCK-8法检测MCFs的细胞活力,采用Western Blot及RT-qPCR法检测CollagenⅠ、Collagen Ⅲ的表达情况;(5)采用Western Blot法检测糖尿病小鼠心脏组织中和HG处理的MCFs中AMPK、Smad2和p38 MAPK的磷酸化水平,Smad7、MMP9的蛋白表达情况;(6)采用脂质体转染法转染si RNA至MCFs 24h后给与HG处理24h,收集细胞采用Western Blot法检测MCFs中TGF-β1、TGF-β3、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ、Smad7和MMP9的蛋白表达,检测AMPK、Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平。结果:(1)糖尿病小鼠心脏组织中的CollagenⅠ、Collagen Ⅲ、TGF-β1、TGF-β3的蛋白和m RNA的表达显著上调,且TGF-β3蛋白和m RNA的表达水平显著高于TGF-β1,而TGF-β2蛋白和m RNA的表达未发生变化;(2)30 m M HG处理MCFs 24 h时细胞活力最强,CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、TGF-β3的表达水平均上调,且TGF-β3的表达水平高于TGF-β1,而TGF-β2的表达未发生变化;(3)采用不同浓度的TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3处理MCFs细胞24 h后,5ng·m L~(-1)的TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3细胞活性最强,且5ng·m L~(-1)的TGF-β1和TGF-β3能够显著增加Collag寻找更多enⅠ和Collagen Ⅲ的蛋白表达而TGF-β2未能促进CollagenⅠ和CollagenⅢ的蛋白表达;(4)采用脂质体转染法转染分别或同时转染TGF-β1和TGF-β3的si RNA至MCFs中24 h后给予HG处理24 h,TGF-β1和TGF-β3的si RNA能够抑制CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达且TGF-β3的si RNA能够更有效地抑制CollagenⅠ和CollagenⅢ的蛋白表达;(5)糖尿病小鼠心脏组织和HG处理的MCFs中,Smad2、p38 MAPK的磷酸化和MMP9的蛋白表达水平显著上调,AMPK的磷酸化和Smad7fee-for-service medicine的蛋白表达水平显著下调;而TGF-β1和TGF-β3的si RNA能够抑制Smad2、p38 MAPK的磷酸化和MMP9的蛋白表达水平,并逆转AMPK的磷酸化和Smad7的蛋白表达水平,但TGF-β3的si RNA能够更有效的抑制Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平,GNE-140细胞培养TGF-β1的si RNA逆转AMPK的磷酸化水平能力强于TGF-β3。结论:(1)糖尿病小鼠心脏组织中和HG处理的MCFs中的CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1和TGF-β3表达升高,其中以TGF-β3亚型的作用最明显;(2)TGF-β1、TGF-β3均能促进CollagenⅠ、Collagen Ⅲ的表达,其中TGF-β3亚型的作用较TGF-β1作用更明显;(3)TGF-β1、TGF-β3对胶原合成和降解信号通路的调控存在差异,TGF-β1能够有效地抑制AMPK的磷酸化水平,而TGF-β3亚型促进Smad2、p38 MAPK的磷酸化水平,抑制AMPK的磷酸化水平和Smad7的蛋白表达的作用表现得更有效。