Achr receptor

水稻是重要的粮食作物,对保障粮食安全至关重要。水稻穗是水稻产量构成的重要基础,穗发育对生产起着决定性作用,水稻穗部结构特征的遗传机制研究是育种学家们研究高产的重要研究热点。因此,揭示穗发育的遗传机制对于改善穗型和提高产量具有重要促进作用。本研究以水稻野生型品系DH170和其经EMS诱变的两个穗发点击此处育异常突变体E7-4和E7-7为研究试材,分别进行表型鉴定、细胞组织结构观察、遗传分析、BSA基因定位以及基因差异表达分析等,以期明确突变体的形态特征、细胞学发育特点以及初步了解其遗传调控机制,为进一步开展与穗发育相关的基因发掘、基因功能分析和基因应用奠定基础。本试验研究主要结果如下:1.与野生型相比,突变体E7-7的株高明显降低,分蘖数增多。突变体E7-4颖壳皱缩,花药淡黄、干瘪,雄蕊发育异常。两个突变体的光合参数和荧光参数显著降低,对光的捕获和吸收能力低。外施吲哚乙酸对突变体的节间伸长、株高和分蘖数没有显著的影响,说明E7-4和E7-7穗的发育对吲哚乙酸不敏感。2.切片观察结果表明,突变体E7-7颖花退化,穗颈部发育畸形,花药性状不规则且退化,子房发育畸形;突变体E7-4花药室畸形,室内没有花粉或少量畸形花粉,绒毡层细胞消失,无胚囊结构,外稃基部变薄、中部内层薄壁细胞增厚,维管束细胞性状不规则,而野生型花药维管束粗且细胞排列规则紧密。分析表明突变体组织分化和细胞发育均受到不同程度的影响。3.遗传分析结果表明,2个突变体的数量比值符合孟德尔的单基因遗传3:1分离比,表MK-2206临床试验明都受单隐性核基因控制,BSA法将E7-7定位于第9号染色体约15MB处,将E7-4定位于11号染色体约28MB位置处。4.野生型和突变体E7-7分化早期基因差异表达分析显示,有1593个差异表达基因,其中上调基因1124个,469个基因下调表达;而野生型和突变体E7-7穗分化后期则有4427个差异表达基因,其中2412个基因上调表达,2015个基因表达下调。这些基因主要参与水杨酸、花粉精细胞分化、几丁质、DNA序列特异性和转移酶活性等过程。另外代谢通路主要有苯丙类生物合成、氨non-infectious uveitis基糖/核苷酸糖代谢、MAPK信号通路-植物、玉米素生物合成、谷胱甘肽代谢、二萜生物、赤霉素生物合成等,这些代谢基因的功能分析是下一步研究的重点。

芥子油苷是主要存在于十字花科植物中的一种重要的植物次生代谢物质,在植物生长发育、防御反应和抗癌中发挥重要功能。二磷酸尿核苷葡萄糖基转移酶(thiohydroximate S-glucosyltransferase,UGT74B1)负责将硫代肟基酸糖基化生成脱硫芥子油苷。2-含氧戊二酸-双加氧酶(2-oxoglutarate-Biosurfactant from corn steep waterdependent dioxygenase,AOP2)负责将硫氧烷基芥子油苷转化为烯基类芥子油苷,例如催化3-丁烯基芥子油苷(gselleckchem MRTX1133luconapin,GNA)转化为萝卜硫苷(glucoraphanin,GRA)。芥蓝(Brassica oleracea var.alboglabra)富含芥子油苷,但具有抗癌活性的萝卜硫苷含量很低。本研究聚焦于解析Boa UGT74B1和Boa AOP2的功能,利用基因瞬时过表达技术过表达Boa UGT74B1基因,利用CRISPR/Cas9技术敲除Boa AOP2基因并获得高萝卜硫苷含量的芥蓝材料。主要的研究结果如下:1.克隆了芥蓝‘四季粗条’Boa UGT74B1基因的单拷贝和Boa AOP2基因的三个拷贝。生物信息分析结果表明,Boa UGT74B1属于糖基转移酶超家族成员,与青花菜Bol UGT74B1同源性最高;Boa AOP2属于2-氧化戊二酸双加氧酶超家族成员,与白菜Br AOP2同源性最高。亚细胞定位结果表明,Boa UGT74B1、Boa AOP2.1、Boa AOP2.2和Boa AOP2.3蛋白分别定位于芥蓝原生质体的叶绿体、细胞核、叶绿体和叶绿体中。2.芥蓝‘四季粗条’组织表达结果表明,在芥蓝成熟期的不同器官中,以幼果中的Boa UGT74B1表达量最高;在不同花器官中,以花蕾期的雌蕊中的Boa UGT74B1表达量最高。Boa AOP2基因3个拷贝的组织表达水平存在明显差异,总体上,Boa AOP2.1基因的表达量高于Boa AOP2.3,远高于Boa AOP2.2。在不同时期和器官中,Boa AOP2.1和Boa AOP2.3均在成熟叶中基因表达量最高;在不同花器官中,Boa AOP2.1在盛花期的雌蕊中表达量最高,Boa AOP2.3在花蕾期的萼片中表达量最高。Boa AOP2.2表达量在整个芥蓝植株中极弱,仅在子叶、幼果、花蕾期的萼片和盛花期的雌蕊中能够检测到较弱的表达。3.在芥蓝中建立了农杆菌介导的基因瞬时过表达技术,并利用该技术瞬时过量表达了Boa UGT74B1基因。Boa UGT74B1基因在芥蓝白花品种‘四季粗条’和黄花品种‘福州黄花’中被分别过量表达了1.53～2.93和3.07～5.30倍。两个品种的Boa UGT74B1瞬时过表达植株叶片中总吲哚族芥子油苷含量分别是对应野生型的1.30～7.11倍和2.13～4.44倍;四种吲哚族芥子油苷含量均增加,在‘四季粗条’芥蓝中以4-甲氧基-吲哚-3-甲基芥子油苷的含量增加最多,达到其野生型的12.14倍,在‘福州黄花’芥蓝中以吲哚-3-甲基芥子油苷的含量增加最多,达到其野生型的22.76倍。4.利用CRISPR/Cas9技术对Boa AOP2基因的3个拷贝进行了编辑,共获得了靶点1(Target 1)的13株和靶点3(Target 3)的14株潮霉素抗性植株,测序表明靶点1的突变率为76.92%,靶点3的突变率为57.14%。靶点1的10个突变体中,包括5个aop2.1aop2.2aop2.3三突变体,2个aop2.1aop2.2双突变体,2个aop2.1aop2.3双突变体和1个aop2.1单突变体;靶点3的8个突变体中,包括3个aop2.1aop2.2双突变体和5个aJQ1抑制剂op2.1单突变体。Boa AOP2.1和Boa AOP2.2基因为组合突变,包括大片段缺失、插入和替换,Boa AOP2.3基因仅为单碱基替换。对boaaop2突变体T1代遗传分析表明,CRISPR编辑的突变能够传递给下一代并部分进行了重编辑。在boaaop2突变体T1代中GRA含量是野生型的11.71～41.29倍(0.082～0.289μmol·g~(-1) FW)),且GRA/GNA比值增加,而总脂肪族芥子油苷和GNA含量减少。

目的 探讨右旋糖酐铁口服液治疗小儿缺铁性贫血的效果及对患儿不良反应发生率的影响。方法 选取2018年1月至2019年12月赣州市妇幼保健院收治的50例缺铁性贫血患儿作为研究对象，采用随机数字表法将其分为参照组与研究组，每组各25例。参照组患儿给予小儿复方四维亚铁散治疗，研究组患儿给予右旋糖酐铁口服液治疗。比较Stem Cells & Wnt抑制剂两组患儿连续治疗1个月后的临MK-4827纯度床效果、治疗前后血清铁蛋白（SF）、血红蛋白（Hb）、平均红细胞体积（MCV）以及不良反应总发生率。结果 治疗1个月后，研究组患儿的临床治疗总有效率高于参照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，研究组患儿的SF、Hb、MCV水平与参照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗1个月后，两组患儿的SF、Hb、MCV水平高于治疗前，且研究组患儿的SF、Hb、MCV水平高于参照组，差异有统计学意义（P<0.05）。研究组患儿的不良反应总发生率低于参照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 小儿缺铁性贫血的临床治疗中，以右旋糖酐铁口服液治疗能够显著改善贫血症状，改善各项指标，提高临床疗效，且causal mediation analysis不良反应较少，药物治疗安全性较高，应用价值显著。

目的 探讨不同分娩方式对盆底肌功能的影响，并观察盆底康复治疗效果。方法 选择2018年8月至2020年12月四川护理职业学院附属医院妇产科收治的80例产妇，按照分娩方式分为对照组（阴道分娩）和观察组（剖宫产），每组各40例。两组产妇均进行盆底康复治疗，包括电刺激及生物反馈训练，并使用神经肌肉刺激治疗仪测定两组产妇的盆底肌肌电、盆底肌压此网站力、Ⅰ类盆底肌纤维肌力和Ⅱ类盆底肌纤维肌力，比gynaecology oncology较两组盆底肌功能。结果 观察组Captisol的盆底肌肌电、盆底肌压力低于对照组，Ⅰ类盆底肌纤维肌力、Ⅱ类盆底肌纤维肌力高于对照组（P <0.05）。观察组治疗前后的盆底肌肌电、盆底肌压力、Ⅰ类盆底肌纤维肌力、Ⅱ类盆底肌纤维肌力的差值高于对照组（P <0.05）。结论 产妇盆底肌力与产妇分娩方式具有相关性，剖宫产产妇的盆底肌力较阴道分娩产妇强，经盆底康复治疗后，剖宫产产妇的盆底肌力改善较为明显。

目的 探索通补防颤方对乙酰胆碱-氯化钙(AcS63845半抑制浓度h-CaCl_2)诱导大鼠阵发性房颤(paroxysmal atrial fibrillation, PAF)的防治作用。方法 将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、通补防颤方低、中、高剂量组、胺碘酮组。采用尾静脉注射Ach-CaCl_2混合液建立PAF大鼠模型。通过心电图检测大鼠房颤易感性，电Mapping检测大鼠心房传导离散度，小动物超声仪检测大鼠左心房直径及左心房面积，Masson染色观察大鼠心房肌组织纤维https://www.selleck.cn/products/Fulvestrant.html情况dermal fibroblast conditioned medium，免疫组化和Western blot法检测大鼠酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)蛋白表达。结果 Ach-CaCl_2尾静脉注射7 d后大鼠心电图表现为P波消失，代之以不规则的f波，RR间期绝对不规则；与模型组相比，通补防颤方低、中、高剂量组及胺碘酮组不同程度延长大鼠房颤诱发时间，缩短房颤持续时间；降低心房传导离散度；缩小左心房直径及左心房面积；改善心房肌组织排列，减少纤维沉积；降低TH蛋白平均分布密度及分布不均一程度；下调TH蛋白表达水平。结论 通补防颤方可降低Ach-CaCl_2诱导PAF大鼠的房颤易感性、心房传导离散度，改善电重构、结构重构及神经重构，为通补防颤方在防治PAF的临床应用提供数据支撑，以期提高PAF的临床治疗水平。

【目的】6～24月龄的婴幼儿是贫血的高危人群,我国6～11月龄儿童贫血发生率约为36.6%,12～23月龄儿童贫血发生率为28%而其中缺铁性贫血是最常见的贫血类型,直接影响儿童的生长和智力发育。它是由于铁摄入不足、吸收量减少、需要量增加、利用障碍或丢失过多等原因,引起人体贮存铁缺乏导致血红蛋白合成量减少而发生的一种贫血。重视婴幼儿铁的摄入,预防缺铁和缺铁性贫血的发生对婴幼儿的健康至关重要。【方法】通过查阅国内VX-661作用外相关文献和指南,MDV3100纯度汇总不同年龄婴幼儿铁缺乏的风险因素和预防措施。【结果】0～24月龄时婴幼儿贫血的高危人群,(1)孕期贫血是婴儿6月龄贫血的危险因素,孕期注意营养均衡,孕中晚期每日应增加20～50g红肉,每周吃1～2次动物肝脏或动物血。根据产检的铁营养状况,使用铁剂进行治疗。(2)足月健康的婴儿体内储存有足够的铁,能够维持出生后4个月的生长需要。(3)婴儿体内的铁储备在4月龄左右逐渐耗尽,纯母乳可能不足以满足出生后4～6个月的铁需要,美国儿科学会(AAP)建议,纯母乳喂养的足月儿出生4个月后,应给予含铁滴剂或含铁的复合维生素(同时含有维生素D)强化补充元素铁1mg/(kg.d)直到饮食中含有足够的含铁食物。对于混合喂养的婴儿来说,母乳喂养的比例占50%以上的婴儿,也建议4个月后给予1mg/(kg.d)铁剂口服,直至可以引入足够含铁食物。(4) 6～12月龄每天的铁推荐量为10mg,辅食的质量可能对贫血的预防起到决定性的作用。满4～6月龄DNA Purification后添加辅食,首先添加肉泥、肝泥、强化铁的婴儿谷粉等富铁的泥糊状食物。6月龄标准配方的配方奶可以满足机体对铁的需要。4～6个月后科学合理地引入含铁辅食,基本可以满足铁的需要。(5) 1～3岁幼儿每天铁的推荐量是9mg,注意红肉、富含维生素C的水果蔬菜,促进铁的吸收。避免摄入过量牛奶,增加缺铁性贫血的风险,每天奶量约500ml。【结论】铁的充足摄入对婴幼儿时期的智力和体格发育至关重要,需要多方面共同努力,保证婴幼儿阶段铁的摄入,预防和降低缺铁性贫血的发生率。

背景:嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cells,CAR-T)疗法已在血液肿瘤治疗中取得了显著的疗效,但在实体瘤治疗中却进展缓慢。相较于T细胞,巨噬细胞不仅具有较强的肿瘤组织浸润能力,PCR Equipment而且能够通过抗原提呈作用进一步启动适应性免疫应答,因而在癌症治疗中具有更广阔的应用前景。目前多项临床试验证实巨噬细胞在肿瘤治疗中具有良好的安全性,基于自体外周血来源的CAR-巨噬细胞(CAR-macrophages,CAR-M)疗法也已进入Ⅰ期临床试验。然而,鉴于外周血来源巨噬细胞数量有限、体外难以扩增且对基因操作具有天然抵抗性,因此难以满足大规模临床治疗的需求。人多能干细胞(human pluripotent stem cells,hPSCs)具有自我更新和多向分化潜能,且易于进行基因编辑,为“现货型”CAR-M的制备提供了可能。当前,hPSCs分化产生CAR-M的相关研究尚处于早期阶段,现有分化方法存在周期长、产量低和细胞功能差等难题。如何高效地将hPSCs诱导分化为具有强抗肿瘤活性的CAR-M是hPSC-CAR-M疗法临床转化的关键。目的:本研究拟建立周期短且产量高的hPSCs单层分化体系,以在体外高效地产生大量功能性巨噬细胞,并在此基础上利用血液瘤和实体瘤模型验证hPSC-CAR-M的抗肿瘤活性,并探索进一步增强hPSC-CAR-M抗肿瘤疗效的方法。方法:(1)构建hPSCs单层造血分化体系用于高效地产生巨噬细胞;(2)利用显微镜观察、流式细胞术、实时荧光定量PCR、瑞氏-姬姆萨染色、体外吞噬实验、荧光共聚焦显微成像技术、体外诱导巨噬细胞极化实验和细胞因子分泌实验鉴定hPSCs分化所得巨噬细胞的形态和功能;(3)通过RNA测序绘制hPSCs定向巨噬细胞分化过程Decitabine生产商的动态基因表达谱;(4)利用慢病毒转染结合流式细胞分选技术获得稳定表达靶向CD19 CAR的CAR-hPSCs并高效诱导CAR-hPSCs定向hPSC-CAR-M分化;(5)通过体外肿瘤细胞共培养实验结合流式细胞术和共聚焦显微成像技术检测hPSC-CAR-M的抗原特异性抗肿瘤功能;(6)通过血液瘤和实体瘤异种移植小鼠模型验证并优化hPSC-CAR-M的体内抗肿瘤能力;(7)腹腔灌洗回收并检测hPSC-CAselleckchemR-M和T细胞体内活化状态。结果:(1)开发了一种基于单层的体外诱导hPSCs产生功能性巨噬细胞的高效分化体系。该分化体系显著提高了巨噬细胞的分化效率,可在较短的时间(3周)内诱导单个hPSC产生约6000个巨噬细胞,比已往报道的分化效率提高了约100倍。(2)hPSCs来源巨噬细胞类似外周血巨噬细胞,具有表型和功能的可塑性,且具有强吞噬活性。(3)绘制了 hPSCs定向巨噬细胞分化过程中细胞命运转变的基因表达图谱,同时阐述了外周血来源巨噬细胞与hPSCs来源巨噬细胞的基因表达特征。(4)利用慢病毒转染获得特异性靶向CD19的具有强抗肿瘤活性的hPSC-CAR-M,同时证明了传统的一代CAR相较于二代CAR能够显著提高hPSC-CAR-M的抗肿瘤活性。(5)利用淋巴瘤异种移植小鼠模型,对hPSC-CAR-M的体内抗肿瘤疗效进行验证和优化,发现单磷酰脂质A(MPLA)和干扰素γ(IFN-y)体内注射可以激活hPSC-CAR-M,从而发挥抗肿瘤功能。(6)利用淋巴瘤异种移植小鼠模型,发现在体内激活hPSC-CAR-M的同时联合T细胞输注,可进一步增强抗肿瘤疗效。(7)通过乳腺癌异种移植小鼠模型验证了协同激活固有-适应性免疫反应对hPSC-CAR-M抗实体瘤疗效的增强作用。结论:本研究提供了可显著提升hPSC-CAR-M分化效率和抗肿瘤活性的可行性策略:建立了 hPSC-CAR-M高效分化体系;通过体内持续输注MPLA+IFN-γ可激活固有免疫反应,增强hPSC-CAR-M的抗肿瘤疗效;联合T细胞输注可激活适应性免疫应答,并进一步增强hPSC-CAR-M的抗肿瘤疗效。

目的 本研究以ATP-柠檬酸裂解酶（ATP citrate lyase,ACLY）为研究重点，以食管癌细胞以及在线数据库为主要研究对象，通过生物信息技术以及细胞生物实验进一步探索ACLY在食管癌细胞中的表达及其对细胞生长、增殖的影响，以期为食管癌临床诊治提供新靶点。方法 利用TCGA等数据库分析ACLY在食管癌患者中的表达情况，以及ACLY在不同人群食管癌患者及不同临床分期食管癌中的表达情况。同时通过CCK-8法、EdU染色实验、平板克隆实验以及流式细胞仪等细胞基础实验，检测https://www.selleck.cn/products/AZD1152-HQPA.html了ACLY变化对食管癌细胞增殖能力和细胞周期的影响。结果 研究发现ACLY在包括食管癌在内的多种肿瘤组织中高表达。ACLY的表达与人种及性别无关，具有普遍性。ACLY的表达与食管癌的分期及淋巴结转移相关。进一步通过细胞生物学实验，研究证实了敲低ACLY可抑制食管癌细胞的增殖能力且可使细胞周期阻滞，过表达ACLLY2835219采购Y可提高食管癌细胞的增殖能力且可促进细胞周期进展。结论 ACLY分子可影响食管癌细胞的增殖能力，ACLY可能是食ruminal microbiota管癌治疗及预后的潜在靶标。

目的:无花果是一种具有丰富食用和药用价值的古老植物。通过理论研究总结中医对结直肠癌的认识,了解无花果的古今应用。通过实验研究观察无花果主要抗肿瘤成分之一补骨脂素的抗结肠癌作用及其作用机制。最后,购买PR-171基于肿瘤类器官培养技术探讨补骨脂素对肿瘤生长的影响。方法:1.理论研究:通过查阅古籍和现代文献,总结传统中医和现代中医对结直肠癌的认识,如病因病机和辨证治疗等;并对无花果(如无花果果实、叶和乳胶等)的古今应用进行了汇总,特别是无花果的有效成分及其药理作用。2.实验研究:(1)选取HCT116和HT29结肠癌细胞系。使用DMSO配制补骨脂素母液。(2)使用不同浓度补骨脂素(5μM、10μM、20μM、40μM、80μM)作用于结肠癌HCT116和HT29细胞24h、48h、72h。CCK-8法检测补骨脂素对结肠癌细胞存活率的影响。基于CCK-8实验结果,选择合适的浓度进行后续实验。(3)使用不同浓度补骨脂素(10μM、20μM、40μM)作用于结肠癌HCT116和HT29细胞24h,通过平板细胞克隆形成实验和Ed U实验观察补骨脂素对结肠癌细胞增殖的影响。(4)使用不同浓度补骨脂素(10μM、20μM、40μM)作用于结肠癌HCT116和HT29细胞24h,通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验检测补骨脂素对结肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响。(5)使用不同浓度补骨脂素(10μM、20μM、40μM)处理结肠癌HCT116和HT29细胞24h,流式细胞术检测补骨脂素对结肠癌细胞凋亡和线粒体膜电位的影响。(6)结肠癌HCT116和HT29细胞经过不同浓度补骨脂素(10μM、20μM、40μM)处理24h。通过蛋白印迹实验检测补骨脂素对结肠癌细胞侵袭迁移(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9)和凋亡(Bcl-2、Bax、PARP、Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleaved Caspase-9)等蛋白表达的影响。(7)使用Swiss Target Prediction网站得到补骨脂素直接作用的靶蛋白,使用TCGA-COAD数据进行GSEA信号通路富集,分析得到补骨脂素在结直肠癌中可以靶向作用的信号通路。从中选取TNF-α/NF-κB信号通路进行下一步的机制研究。(8)将不同浓度补骨脂素(10μM、20μM、40μM)作用于结肠癌HCT116和HT29细胞24h,通过蛋白印迹实验检测TNF-α/NF-κB信号通路关键蛋白TNF-α、P65和p-P65的表达。(9)基于课题组前期工作,选用实验室稳定建系的肿瘤类器官作为实验模型。将不同浓度补骨脂素(80μM、160μM、320μM)作用于多种患者来源肿瘤类器官,进行药物敏感性实验,计算肿瘤类器官生长抑制率。结果:1.理论研究:(1)传统中医学中没有结直肠癌这一具体病名,根据症状大概属于“肠积”、“积聚”、“肠覃”、“肠癖”、“肠结”、“肠游”、“肠风”、“下痢”、“下血”、“锁肛痨”及“脏毒”等病的范畴。在病因病机和辨证论治上,传统中医和现代中医持有相似的观点,大都认为由于正气亏虚,外感寒邪,损伤脾胃运化功能,蕴湿化热,湿热之邪下注大肠,气血运行不畅,湿热瘀阻日久而形成顽固瘤体。证型上大概可以分为湿热蕴肠、瘀毒内结、气血亏虚、脾肾两亏及肝肾亏虚五个证型。治疗上,早期多邪实以祛邪为主,后期多虚证或虚实夹杂,因此以扶正为主。(2)无花果是一种历史悠久的传统桑科植物,传统医学中认为它甘、平、无毒,可以用来治疗消渴、咳嗽、哮喘、痔疮等疾病。现代研究表明无花果的果肉、果皮、整果、叶和根等部位含有多种生物活性成分,如黄酮类、有机酸、酚类、酶类、氨基酸、脂肪酸、可溶性纤维和微量元素等,具有抗炎、抗氧化、调节免疫、抗肿瘤、促消化、抗微生物和寄生虫等作用,是一种安全的、极具食用和药用价值的食物。无花果提取物对恶性肿瘤增殖、侵袭迁移和凋亡等均具有抑制作用,但关于无花果生物活性成分抗肿瘤机制研究的少之又少,未来应着重于对无花果生物活性成分抗肿瘤机制的研究。2.实验研究:(1)不同浓度补骨脂素(5μM、1Normalized phylogenetic profiling (NPP)0μM、20μM、40μM、80μM)作用于结肠癌HCT116和HT29细胞,实验结果表明补骨脂素呈浓度依赖性方式抑制结肠癌细胞的存活(P<0.05),处理24h的IC50值分别为60.3μM、31.8μM、21.3μM和52.4μM、32.2μM、23.4μM。因此,后续实验采用10μM、20μM、40μM浓度梯度。(2)平板细胞克隆形成实验和Ed U实验结果表明补骨脂素显著抑制结肠癌HCT116和HT29细胞的克隆形成能力和DNA复制能力(P<0.05)。(3)划痕实验和Transwell实验结果表明随着浓度的升高,补骨脂素显著抑制结肠癌HCT116和HT29细胞的迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.0001)。(4)流式细胞术结果显示补骨脂素可以诱导结肠癌HCT116和HT29细胞凋亡(P<0.05),当补骨脂素浓度为20μM、40μM时可显著降低线粒体膜电位(P<0.05)。(5)蛋白印迹实验结果显示补骨脂素显著抑制结肠癌HCT116和HT29细胞N-cadherin、Vimentin、MMP2和MMP9的表达,增强E-cadherin的表达,P<0.05。此外,补骨脂素还显著抑制Bcl-2抗凋亡蛋白的表达,增强Bax、PARP、cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9凋亡蛋白的表达,P<0.05。(6)网络药理学结果显示补骨脂素抗结直肠癌的作用与多个信号通路有关,如炎症反应、干扰素γ反应、低氧、上皮-间质转化、P53、TNF-α/NF-κB等信号通路。(7)根据网络药理学分析结果,选取TNF-α/NF-κB信号通路作为下一步的机制研究。蛋白印迹实验结果表明补骨脂素显著抑制结肠癌HCT116和HT29细胞TNF-α和p-P65的表达(P<0.05),这表明补骨脂素可以通过抑制TNF-α/NF-κB信号通路来达到抗肿瘤作用。(8)补骨脂素对237#直肠癌、244#乙状结肠癌、325#胃癌、346#胃癌、386#肺癌、407#升结肠癌、413#胆管癌、421#乳腺癌类器官的生长具有不同程度的抑制作用。320μM浓度时肿瘤类器官Adezmapimod细胞培养生长抑制率分别为:98.2%、-81.5%、55.0%、-19.7%、-3.4%、19.7%、-197.5%、-3.0%。237#直肠癌、325#胃癌和407#升结肠癌在该浓度梯度下表现出正向的抑制作用。244#乙状结肠癌、346#胃癌、386#肺癌、413#胆管癌、421#乳腺癌类器官则表现为负向抑制作用。但是根据动态观察来看,随着补骨脂素浓度的升高,类器官生长速度减慢。结论:根据症状结直肠癌大概属于传统中医中“肠积”、“积聚”、“肠覃”、“肠癖”等病的范畴。传统中医和现代中医大都认为结直肠癌是由于正气亏虚,外感寒邪,损伤脾胃运化功能,蕴湿化热,湿热之邪下注大肠,气血运行不畅,湿热瘀阻日久而形成顽固瘤体。可以分为湿热蕴肠、瘀毒内结、气血亏虚、脾肾两亏及肝肾亏虚五个证型。早期多邪实以祛邪为主,后期多虚证或虚实夹杂以扶正为主。传统中医和现代药理学研究均表明无花果是一种极具食用和药用价值的植物。本研究表明无花果主要抗肿瘤成分补骨脂素可以抑制TNF-α/NF-κB信号通路,对结肠癌HCT116和HT29细胞的增殖、侵袭、迁移能力具有抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡。此外,不同瘤种类器官或同一瘤种不同个体来源的类器官对补骨脂素的药物敏感性不同,这可能是由于患者肿瘤异质性而导致的。在未来的研究中,影响肿瘤类器官对补骨脂素敏感性的因素还需要进一步深入剖析。

肌细胞增强因子2A (myocyte enhancer factor 2A, MEF2A)是肌细胞增强因子家族中的重要成员之一，在肌肉发生和再生过程中具有重要作用。本研究以关岭牛(Bos taurus)为实验材料，扩增MEF2section InfectoriaeA基因CDS区并构建过表达载体pEGFP-C1-MEF2A，分析MEF2A基因序列和蛋白结构，q点击此处 RT-PCR检测MEF2A在不同阶段关岭牛多组织中的表达特性。同时将过表达载体转染至关岭牛成肌细胞，利用流式细胞仪与细胞生长分析仪探究过表达载体对成肌细胞增殖生长的影响。结果表明，MEF2A基因在3日龄牛与30月龄关岭牛的多组织中均可表达，表达量差异皆达到极显著水平(P<0.01)。过表达载体转染至细胞后，MEF2A基因表达量极显著上调(P<0.01)，肌细胞增强因子2B基因(myocyte enhancer factor 2B,MEF2B)、MEF2C与MEF2D表达量均极显著上调(P<0.01)；细胞周期蛋白依赖性激酶2 (cyclindependent kinase 2, CDK2)表达量差异不显著、细胞周期蛋白A2 (ce确认细节ll cycle protein A2, CCNA2)表达量极显著上调(P<0.01)。与pEGFP-C1组相比，pEGFP-C1-MEF2A组细胞周期明显缩短，成肌细胞在6 h后的增殖活性均极显著高于pEGFP-C1组(P<0.01)，表明MEF2A过表达载体转染至关岭牛成肌细胞后，可有效上调MEF2A基因表达，改变基因表达模式。本研究成功构建pEGFP-C1-MEF2A过表达载体，检测MEF2A基因对关岭牛肉质相关基因的表达影响，为进一步探究MEF2A基因对关岭牛肉质性状调控机制提供基础数据。