Achr receptor

目的:基于SIRT1/PGC-1α信号通路介导的衰老路径研究青光安Ⅱ号方对青光眼视神经的保护作用机制。方法:本研究分为网络药理学研究和动物实验研究。网络药理学研究通过TCMSP筛选和预测青光安Ⅱ号方潜在作用靶点;通过疾病基因数据库挖掘青光眼相关的靶点;筛选青光安Ⅱ号方作用于青光眼的靶点;制作PPI网络取其交集,分析其作用机制。动物实验将C57BL/6J小鼠设置为空白组(A),DBA/2J小鼠38周龄时自动成模,随机分为模型组(B)、益脉康分散片组(C)、selleckchem MG132青光安Ⅱ号方低浓度组(D)、青光安Ⅱ号方中浓度组(E)、青光安Ⅱ号方高浓度组(F),灌胃4周后对小鼠眼压、视网膜形态结构及SIRT1、PGC-1α、NRF2mRNA表达,SIRT1、PGC-1α蛋白表达等客观指标进行检测。结果:1.网络药理学:青光安Ⅱ号方药物-活性成分-靶点相互作用网络图中,相互作用最强的5个靶点分别是PTGS2、NCOA2、PGR、PTGS1以及PPARG;青光安Ⅱ号方治疗青光眼的靶点共155个,其中包括SIRT1;青光安Ⅱ号方治疗青光眼靶点的KEGG富集结果主要为癌症通路、脂质与动脉粥样硬化、IL-17信号通路、细胞衰老等。2.眼压测量结果:38周龄时,DBA/2J小鼠眼压较C57BL/6J小鼠均高(P<0.01);给药4周后,益脉康分散片组、青光安Ⅱ号方低、中、高浓度组与模型组相比均低(P<0.01)。3.qRT-PCR检测结果GNE-140:模型组视网膜中SIRT1、PGC-1α、NRF2mRNA表达较空白组均明显降低(P<0.01);益脉康分散片组、青光安Ⅱ号方低、中、高浓度组SIRT1、NRF2mRNA表达量较模型组均提高(P<0.05),青光安Ⅱ号方中、高浓度组PGC-1αmRNA表达量较模型组均提高(P<0.05);与益脉康分散片组相比,青光安Ⅱ号方中、高浓度组SIRT1、NRF2mRNA表达显著提高;4.WesternBlot检测结果:模型组视网膜中SIRT1、PGC-1α的蛋白表达较模型组均明显降低(P<0.01);益脉康分散片、青光安Ⅱ号方低、中、高浓度组SIRT、PGC-1α蛋白表达较模型组均提高(P<0.05);与益脉康分散片组相比,青光安Ⅱ号方低、中、高浓度组视网膜SIRT1、PGC-1α蛋白均升高(P<0.05),且其升高SIRT1表达的作用与药物浓度成正比,高浓度组表达最多。结论:1.网络药理学研究发现青光安Ⅱ号方和青光眼疾病的共同靶点主要富集在氧化应激、细胞衰老等方面,且PPI互作网络中PPARG,SIRT1均为相互作用较强的靶点;2.青光安Ⅱ号方能够有效降低DBA/2J小鼠青光眼模型眼压,改善视网膜形态损害,抑制RGCs的丢失,保护视神经;3.青光安Ⅱ号方与益脉康分散片均能提高SIRT1、NRF2mRNA相对表达量以及SIRT1、PGC-1α蛋白相对表达量;初步观察表明青光Pancreatic infection安Ⅱ号方有效组分中、高浓度组优于益脉康分散片;4.青光安Ⅱ号方通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路,进而上调NRF2的表达,调节线粒体功能、氧化应激以延缓衰老,从而对青光眼视神经起保护作用。

为建立合适的筛选坛紫菜丝状体突变体的方法，将经~(60)Co-γ射线诱变的丝状体分别接种到海水和扇贝壳中，观测丝状体的突变率。结果表明，丝状体经γ射线辐射后，仍具有钻入扇贝壳的能力，在扇贝壳上发生了丰富的颜色突变，在1 000 Gy辐射剂量下丝状体突变率最高，各不同诱变梯度下，在自由丝状体阶段的突变率均低于在扇贝壳丝状体的阶段。此外，为探究突变体的适宜生长温度和培养介质，将~(60)Co-γ射线辐射诱变得到的粉色和绿色突变体为材料，选取扇确认细节贝壳、琼脂培养基和海水等基质，设置4个温度梯度（14、17、20、23℃），观测突变藻丝细胞的长度、宽度及分枝数量变化。结果表明，粉色和绿色突变体在23℃的培养温度和扇贝壳基质中，突变性状较稳定，生长状况较佳，粉色突变体藻丝细胞的长度、宽度及Computational biology分枝数量分别为190.35μm、12.23μm、10.00个，藻丝细胞的宽度和分枝数量的增长率约为19.43%和28.21%；绿色突变体藻丝细胞的长度、宽度及分Trichostatin A抑制剂枝数量分别为115.89μm、11.26μm、3.80个，藻丝细胞的宽度增长率约为9.96%。本研究结果为坛紫菜自由丝状体突变体的筛选提供了新的方法，为探索突变体适宜生长发育的培养温度及基质提供了参考。

传统的研究认为细胞死亡主要分为凋亡和坏死。随着研究的不断深入,人们认识到除以上两种死亡形式外,细 胞死亡还可以通过自噬、胀亡、焦亡等方式实现。Brent R. Stockwell教授于2012年提出铁死亡概念,它是一 种铁依赖的细胞程序性死亡形式之一,涉及多种疾病,尤其是肿瘤疾病,有望成为肿瘤治疗的新方式。但PHKG2在喉癌中作用还不清楚,铁死亡相关研究及其抑制剂具有非常巨大的研究潜力和价值。该研究的结果将为喉癌的诊疗和分子机制研究提供新的切入点,可能作为分子靶向治疗的有效靶点,成为后期药物 研发的有效靶标。本项目主要应用于喉癌的分子靶向治疗。PHKG2基因被发现是调控铁死亡的关键基因,但PHKG2在喉癌中的作用还不 清楚。本课题利用过表达载体上调喉癌细胞系中PHKG2表达量并作为过表达组。正常喉癌细胞系作为对照组。然后,检测两组中PHKG2的表达。比较两组喉癌细胞增殖能力,菌落形成能力,以及铁死亡水平。通过上述方法明确PHKG2 能够影响喉癌细胞生长。在原有过表达组和正常组的基础上,将铁死亡抑制Glycolipid biosurfactant剂Ferrostatin加入过表达组作为抑制剂 组。比较三组喉癌细胞增殖能力,菌落形成能力,以及铁死亡水平,结果具有统计学意义。磷酸化酶激酶γ2基因编码(PHKG2)调控铁死亡对喉癌细胞生长的作用影响是不清楚的。我们通过本次实E7080浓度验研究首 次证实PHKG2能够通过影响喉癌细胞铁死亡来抑制喉癌细胞生长,从而促进喉癌细胞凋亡。这一成果具有很高的创造 性和先进性。 喉癌作为头颈部最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类健康。铁死亡与喉癌的关系非常密切。PHKG2是调控MAPK抑制剂铁死亡的 重要基因。我们通过本次研究发现PHKG2对喉癌有显著的一直作用,可以作为喉癌分子靶向治疗的重要新靶标,能够为喉癌的治疗提供新的参考。

目的 探讨大剂量地塞米松对成人原发免疫性血小板减少症(ITP)患者调节性T细胞(TErdafitinib抑制剂reg)的影响及其临床疗效。方法 选择2020年7月至2021年12月新乡医学院第一附属医院收治的120例ITP患者为研究对象。根据治疗方法将患者分为对照组和观察组，每组60例。对照组患者给予醋酸泼尼松片，每日l.0～1.5 mg·kg~(-1),分3次口服，连续服用3周；观察组患者给予醋酸地塞米松片口服，每次20 mg,每日早晚各1次，持续服用4 d,然后停药1周，再重复1个疗程，共治疗2个疗程。对照组中8例因疗效欠佳、症状恶化等原因退出，观察组中4例因疗效欠佳等原因退出。分别于治疗1周时、治疗结束时、治疗后2周，根据患者的血小板和临床表现评估临床疗Viral respiratory infection效，依据临床疗效将患者分为完全缓解组、显效组和无效组；分别于治疗后1、2个月，根据患者的血小板和临床表现评估复发情况；分别于治疗前后采集2组患者晨起空腹静脉血3～5 mL,使用流式细胞仪检测ITP患者外周血CD4~+CD25~+ Treg细胞亚群水平；采用受试者操作特征(ROC)曲线评估CD4~+CD25~+ Treg细胞亚群水平对成人ITP患者预后的预测价值。结果 治疗1周时、治疗结束时及治疗后2周，对照组患者的有效率分别为40.4%(21/52)、55.8%(29/52)、71.2%(37/52),观察组患者的有效率分别为60.7%(34/56)、76.8%(43/56)、82.1%(46/56);治疗1周时及治疗结束时，观察组患者的有效率显著高于对照组(χ~2=4.459、5.359,P<0.05);治疗后2周，观察组与对照组患者的有效率比较差异无统计学意义(χ~2=1.830,P>0.05)。治疗后1、2个月时，对照组患者的复发率分别为26.9%(14/52)、48.1%(25/52),观察组患者的复发率分别为16.1%(9/56)、21.4%(12/56);治疗后1个月时，观察组与对照组患者的复发率比较差异无统计学意义(χ~2=1.894,P>0.05);治疗后2个月时，观察组患者的复发率显著低于对照组(χ~2=8.5ZD1839体外02,P<0.05)。治疗前，观察组与对照组患者的外周血CD4~+CD25~+Treg水平比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗结束时，2组患者的CD4~+CD25~+Treg水平显著高于治疗前，观察组患者的CD4~+CD25~+Treg水平显著高于对照组(P<0.05)。完全缓解组和显效组患者外周血CD4~+CD25~+ Treg水平显著高于无效组，完全缓解组患者的外周血CD4~+CD25~+ Treg水平显著高于显效组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示，外周血CD4~+CD25~+ Treg水平与临床疗效呈正相关(r=0.562,P<0.05),与病程呈负相关(r=-0.379,P<0.05)。ROC曲线分析显示，外周血CD4~+CD25~+ Treg水平预测成人ITP预后的曲线下面积为0.801(95%置信区间为0.699～0.903,P<0.05);以3.416%为截断值时，CD4~+CD25~+ Treg预测成人ITP预后的敏感度为0.840,特异度为0.759,约登指数为0.599。对照组和观察组患者的不良反应发生率分别为51.9%(21/52)、19.6%(11/56);观察组患者的不良反应发生率显著低于对照组(χ~2=12.320,P<0.05)。结论 大剂量地塞米松冲击治疗可有效改善成人ITP临床症状，其作用机制可能与提高CD4~+CD25~+ Treg水平、增加免疫力有关；且CD4~+CD25~+ Treg可作为预测成人ITP预后的有效指标。

研究目的:旨在研究胃袖状切除术(Sleeve Gastrectomy,SG)调控铁死亡在改善非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的作用和调控机制,探讨SG治疗NAFLD的潜在靶点。研究方法:1.通过先前的文献调研结果得知ACSL4基因高度保守且在NAFLD中起着重要作用。通过生物信息学方法在接受减重手术的NAFLD患者中,分析ACSL4基因的差异表达及临床相关性。2.采用实时蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)及免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)在SG大鼠模型中,检测ACSL4及GPX4的表达。检测铁死亡相关指标谷胱甘肽(Glutathione,GSH)及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)。苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)及油红O染色(Oil Rhepatic diseasesed O)评估NAFLD。3.使用油酸和棕榈酸诱导Hep G2细胞发生脂肪变性,构建NAFLD细胞模型。在NAFLD细胞模型中,采用实时荧光定量PCR分析(Real Time Quantitative PCR,RT-q PCR)和WB检测ACSL4及GPX4的表达。4.诱导Hep G2细胞脂肪变性后更换正常培养基模拟减重手术治疗,采用RT-q PCR和WB检测ACSL4、GPX4的表达。5.设计合成ACSL4的小干扰RNA,并通过RT-q PCR验证其在Hep G2中的敲低效率。6.在Hep G2细胞系中使用小干扰RNA敲低ACSL4后使用油酸和棕榈酸刺激,采用RT-q PCR及WB检测GPX4表达。检测铁死亡相关指selleck CX-5461标GSH、MDA及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)。7.设计ACSL4过表达质粒,并通过q RT-PCR验证其过表达效率。8.在ACSL4过表达的Hep G2中,通过RT-q PCR及WB检测GPX4表达,同时检测铁死亡相关指标GSH、MDA及ROS。研究结果:1.ACSL4与AST和NAFLD活动度积分(NAFLD act寻找更多ivity score,NAS)成正相关。并且,ACSL4在SG之后表达下降。2.HE及油红O染色结果表明,SG可以减少NAFLD大鼠肝脏炎性浸润、空泡化和脂质沉积。免疫组化实验结果显示在SG后,大鼠肝脏中ACSL4表达水平下降,GPX4表达增加,铁死亡减少。3.油酸和棕榈酸可以刺激Hep G2细胞铁死亡的增加,而在体外模拟减重手术治疗后可以减少Hep G2细胞的铁死亡。4.RT-q PCR验证ACSL4小干扰RNA和过表达质粒转染效果良好(P<0.05)。5.沉默ACSL4可以减少油酸和棕榈酸刺激导致的铁死亡。6.过表达ACSL4可以引起Hep G2细胞发生铁死亡。实验结论:本研究发现SG对铁死亡具有一定的调控作用。SG通过调控ACSL4基因的表达,调控NAFLD的铁死亡,从而改善肝脏脂肪变性。本研究丰富了SG在治疗NALFD中的调控机制,为NAFLD的诊治提供了潜在治疗靶标。

目的 研究辨证针刺改善血液透析患者尿毒症瘙痒的疗效并探讨其机制。方法 采用随机、单盲和对照的原则。将48例血液透析合并尿毒症瘙痒的患者随机分为辨证针刺组和针刺对照组，辨证针刺组以primary endodontic infection曲池、合谷、足三里、血海为主穴行针刺治疗。针刺对照组以曲池、合谷、足三里、血海附近2cm处为针刺部位行针刺治疗。两组患者均每周治疗3次，治疗疗程均为8周。在治疗后分别采用组间对照和自身前后对照，对患者视觉模拟评分(VAS)、改良Duo氏瘙痒评分、组胺、5-HT等其他GSK1120212抑制剂实验室指标进行的统计分析。结果 治疗后，在轻中度尿毒症瘙痒患者中，两组患者VAS评分和改良Duo氏评分均下降(P<0.05),且辨证针刺组各评分下降更明显，与针刺对照组比较有统计学意义(P<0.05)。在重度尿毒症瘙痒患者中，两组患者VAS评分和改良Duo氏评分均下降(P<0.05),但辨证针刺组与针刺对照组下降程度无统计学差异(P>0.05)。在轻中度和重度尿毒症瘙痒患者中，仅辨证针刺组在治疗后组胺及5HT水平下降(P<0.05),而针刺对照组在治疗后组胺及5-HT水平无明显改变(P>0.05)。结论 辨证针刺能有效降低尿毒症瘙痒患者体内组胺及5-HT水平，同时能明显改善轻中度尿毒症瘙痒患者的临床症状，值得进行推广及深入IACS-10759价格研究。

旋毛虫是一种多细胞寄生虫(蠕虫),可感染包括人在内的150余种动物,造成的经济损失位居95种常见食源性寄生虫病之首,不仅严重影响肉食品安全,更对人类健康构成巨大威胁。人与动物的旋毛虫感染,主要因生食或半生食感染有旋毛虫的肉类(我国主要为猪肉)而引发。旋毛虫在胃液的作用下,1小时内即可被消化脱囊,脱囊后的肌幼虫6小时内即可侵入宿主肠粘膜上皮细胞;30小时内经四次蜕皮后发育为成虫并完成雌雄交配,雌虫早在感染后第4天即可产出新生幼虫,新生幼虫的产出可持续10天左右,产出后的新生幼虫侵入肠粘膜,经毛细血管及淋巴管随血液10分钟内迅速移行并主要侵入骨骼肌细胞,21天后发育成为具有完整保护性包囊的感染性肌幼虫。肠道上皮是宿主抵御旋毛虫侵袭的第一道防线,宿主杯状细胞主要通过分泌黏液进行驱虫。该过程主要由肠上皮内关键的免疫细胞响应,经II型免疫反应介导的驱虫免疫引发,然而过度的II型免疫反应同时会引发过度的组织纤维化、过敏以及使宿主处于易感其它病原的状态等。因此,寻找既可激发宿主非II型免疫的黏液驱虫功能,又可避免II型免疫所致免疫损伤(组织纤维化)和继发感染的新途径与新方法,一直是驱虫药物或制剂的一个研究热点。本研究围绕肠道黏液分泌驱虫这一过程,探究了一种即可增强肠道黏液分Hospital Associated Infections (HAI)泌又不依赖于II型免疫的黏液驱虫新途径,亦即β-葡聚糖(BG)的肠道菌群途径。BG是一种广泛存在于谷物和微生物中的多糖,其来源丰富,价格低廉,开发成本低,已被美国食品和药物管理局批准为一种安全的食品添加剂,用于食品、保健品和制药行业。已发现BG可以通过不同的机制治疗肠道疾病,包括抗炎、免疫调节和菌群调节。决定肠道稳态的一个重要因素是肠道菌群,它们在宿主的肠道病原体防御中发挥着关键作用,一些研究表明肠道菌群在肠道驱逐蠕虫过程中也发挥着极其重要的作用。基于以上研究,本课题在证明了BG在肠道具有显著驱虫与抗感染的基础上,进一步探究了其可能的分子作用机制。首先,我们研究发现BG可通过增强肠道的黏液分泌显著降低小鼠体内的旋毛虫成虫与肌幼虫载量,且这一增强作用并非来自于II型免疫反应。给予预服并持续服用BG的小鼠注射II型免疫反应关键转录因子STAT6的抑制剂,检测II型免疫对BG抗旋毛虫感染的影响,结果显示,BG在STAT6抑制剂注射后仍可促进小鼠肠道的黏液分泌,并显著降低旋毛虫的虫体载量,说明BG在促进肠道黏液分泌的过程中具有独立于II型免疫之外的其他途径。对预服并持续服用BG小鼠施用抗生素组合(氨苄西林、万古霉素、新霉素和甲硝唑)清除小鼠肠道菌群后,小鼠血清中的IL-4和IL-13表达水平并未受到明显影响,预示肠道菌群与II型免疫反应无明显关联性,然而感染旋毛虫后,BG对小鼠的驱虫作用却受到了显著减弱,该结果则预示肠道菌群与BG通过增PF-6463922强宿主肠道黏液分泌从而促进虫体的排出具有重要关联性。基于以上实验结果与现象,我们进一步利用16S r RNA基因测序技术分析了BG对旋毛虫感染后肠MRTX1133道菌群特征的影响,结果显示,旋毛虫感染可显著降低肠道菌群的α-多样性(Shannon指数和Simpson指数),预服并持续服用BG可显著恢复旋毛虫感染造成的α-多样性降低。其中疣微菌门(Verrucomicrobia)的菌类在BG口服后显著升高,而疣微菌门中的阿克曼菌属(Akkermansia)的代表菌Akkermansia muciniphila明显升高。该结果预示着阿克曼菌属可能在BG增强宿主黏液排虫中发挥重要作用。通过Akkermansia菌属代表菌Akkermansia muciniphila(Akk菌,国际标准株BAA-835)的体内验证实验,我们发现不仅活的Akk菌可显著降低小鼠体内旋毛虫的虫体载量,经巴氏灭活(70℃,30 min)后的Akk菌具有更强的功能,黏液分泌量会更高,驱虫作用更为明显。已有的研究已证实灭活的Akk菌对肠道黏液分泌的增强以及肠道屏障的改善是通过TLR2受体实现的。为了确证在旋毛虫感染情况下灭活的Akk菌是否也存在该受体途径,我们利用TLR2基因敲除(TLR2 KO)小鼠进行了验证。结果显示,在未服用灭活的Akk菌情况下,TLR2KO与野生型(Wild-type,WT)感染旋毛虫后的小鼠虫体载量无明显差异,但在预服并持续服用灭活的Akk菌情况下,野生小鼠体内的虫体载量显著低于TLR2KO小鼠,并伴有肠道杯状细胞的数量和黏液的分泌量显著增加,说明在旋毛虫感染情况下,灭活的Akk菌通过增强黏液分泌从而促进驱虫的功能也依赖TLR2受体。通过上述研究,本课题证明和发现了一条不依赖II型免疫即可增强肠道黏液分泌从而促进虫体排除的新途径。亦即BG可通过增强肠道的黏液分泌,显著减少体内旋毛虫的虫体载量,而其内在机制则是通过恢复旋毛虫感染而导致的肠道微生物多样性降低,尤其通过促进疣微菌门(Verrucomicrobia)阿克曼菌属(Akkermansia)菌类在肠道中定植与增殖实现的。巴氏灭活的阿克曼菌属代表菌Akk菌具有更显著的效果则可能是巴氏灭活处理不但对促进黏液分泌的菌体成分没有造成更大影响,同时还消除了该菌对肠道的侵袭与损伤所致,这一现象的发现使得该菌更加适宜于应用成为可能。而TLR2受体通路的发现则可望为旋毛虫乃至其它蠕虫预防或治疗药物与制剂研究提供一条新的入径。

第一部分:M2型巨噬细胞来源外泌体对急性哮喘小鼠的治疗作用optical biopsy目的:探究M2型巨噬细胞来源外泌体对急性哮喘小鼠的治疗作用。方法:1.通过卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)腹腔注射致敏及连续雾化吸入1周激发的方法构建急性哮喘小鼠模型。selleck HPLC将24只C57BL/6小鼠随机分成对照组、OVA诱导模型组、OVA+PBS组、OVA+M2(?)-Exo治疗组,其中在第20天至第23天,OVA+M2(?)-Exo治疗组小鼠连续4天尾静脉注射100μl M2型巨噬细胞来源的外泌体(M2(?)-Exo),OVA+PBS组小鼠连续4天尾静脉注射100μl PBS。2.评估哮喘小鼠模型气道炎症的情况:酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测哮喘小鼠外周血中炎症因子(肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α),白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β),白介素-6(Interleukin-6,IL-6))的表达水平,免疫组化TUNEL(Td T-mediated d UTP nick end labeling)染色观察细胞凋亡情况,Masson染色观察小鼠肺组织纤维化水平,免疫荧光检测肺组织CD31表达以评估内皮细胞损伤水平,荧光染色(二氢乙锭法)检测肺组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果:1.与对照组相比,OVA诱导的急性哮喘小鼠外周血炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)表达、肺组织细胞凋亡程度、肺纤维化及肺组织ROS水平均明显增加(p<0.001),肺组织CD31表达较对照组明显降低(p<0.05)。2.与OVA+PBS组相比,M2(?)-Exo处理组小鼠的外周血炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)表达、肺组织细胞凋亡程度、肺纤维化水平及肺组织ROS水平均明显降低(p<0.01),而肺组织CD31表达水平较OVA+PBS模型组明显升高(p<0.001)。结论:1.OVA诱导可成功构建急性哮喘小鼠模型。急性哮喘小鼠外周血炎症因子水平、肺组织细胞凋亡程度、肺纤维化及肺组织ROS水平均明显升高,并存在内皮细胞炎性损伤。2.尾静脉注射M2(?)-Exo可有效降低急性哮喘小鼠外周血炎症因子表达,减轻细胞凋亡、肺纤维化及肺组织ROS积聚,改善内皮细胞损伤。第二部分:circ RNA-Eif3c在M2型巨噬细胞来源外泌体调节小鼠急性哮喘中的作用目的:1.筛选M2(?)-Exo中差异表达的环状RNA(circular RNA,circ RNA),明确目标circ RNA。2.阐明目标circ RNA在急性哮喘小鼠中的治疗作用。方法:1.利用高通量测序检测M0(?)-Exo和M2(?)-Exo中circ RNA表达情况,其中在M2(?)-Exo差异高表达的为候选差异circ RNA。2.利用荧光定量PCR(Quantitative PCR,q PCR)检测M0(?)-Exo和M2(?)-Exo中候选差异cir RNA的表达情况,筛选在M2(?)-Exo中相对表达最高且实验结果稳定的为目标cir RNA。3.利用IL-4诱导野生型和干扰组的M0巨噬细胞向M2型转换,向诱导后的干扰组细胞转染目标circ RNA干扰载体,收集外泌体并通过尾静脉注射到哮喘小鼠体内。4.ELISA检测小鼠外周血炎性因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)的表达水平;TUNEL染色观察小鼠肺组织细胞凋亡水平;Masson染色观察小鼠肺组织纤维化水平;免疫荧光检测肺组织CD31表达评估内皮细胞损伤情况;荧光染色(二氢乙锭法)检测肺组织ROS水平。结果:1.通过高通量测序筛选出9个在M2(?)-Exo中差异高表达的候选circ RNA。利用q PCR明确其中相对表达水平最高且结果稳定的mmu＿circ＿0001628为目标circ RNA(p<0.001)。2.查阅网站circ Base(http://circbase.org/)提示mmu＿circ＿0001628(circ-Eif3c)是由基因EIF3c(eukaryotic translation initiation factor 3,subunit C)转录后反向剪接RNA成环而来,大小为364 bp。3.与常规M2(?)-Exo组相比,经尾静脉注射干扰circ-Eif3c表达后的M2(?)-Exo实验组,小鼠外周血炎症因子水平、肺组织细胞凋亡程度、肺纤维化及肺组织ROS水平均明显升高(p<0.001),CD31表达水平明显降低(p<0.001)。结论:1.M2(?)-Exo可以通过circ-Eif3c负向调控急性哮喘小鼠炎症因子分泌、肺组织细胞凋亡、肺纤维化、肺组织ROS积聚以及内皮细胞损伤过程,减轻哮喘炎症反应及损伤。第三部分:circ RNA-Eif3c调控mi R-15a-5p/GSS和mi R-15a-5p/SOCS6信号通路对气道上皮细胞氧化应激的影响目的:1.探寻circ RNA-Eif3c下游靶点及其相互作用。2.探究circ RNA-Eif3c调控mi R-15a-5p/GSS、mi R-15a-5p/SOCS6对气道上皮细胞的影响。方法:1.预测并证实circ RNA-Eif3c下游靶分子(1)利用多个生物信息学数据库预测circ RNA-Eif3c下游微小RNA(micro RNA,mi RNA)潜在结合位点,采用Arraystar mi RNA软件初步筛选,再通过Talazoparib溶解度DIANA数据库定向筛选目标mi RNA。利用生物信息学数据方法,筛选目标mi RNA的下游靶点。(2)通过双荧光素酶报告实验探索circ RNA-Eif3c与目标mi RNA间的直接结合及靶向调控作用。(3)通过双荧光素酶报告实验探索目标mi RNA与下游靶点间的直接结合及靶向调控作用。2.circ RNA-Eif3c、mi RNA及下游靶点之间的靶向作用对气道上皮细胞的影响(1)用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导人正常肺上皮细胞(BEAS-2B细胞)构建炎性细胞模型。通过转染质粒构建circ RNA-Eif3c过表达组、circ-Eif3c+mi RNA mimic组、circ-Eif3c过表达+mi RNA下游靶点干扰组。(2)q PCR检测各组气道上皮细胞中circ RNA-Eif3c、mi RNA及其下游靶点表达水平。(3)流式细胞技术检测各组细胞凋亡水平,荧光染色(二氢乙锭法)检测气道上皮细胞内ROS水平,Tubule实验评估气道上皮细胞血管生成能力。结果:1.结合多个数据库预测结果提示mi R-15a-5p可能是circ RNA-Eif3c下游靶点,GSS、SOCS6可能是mi R-15a-5p的下游作用靶点。2.双荧光素酶报告实验发现circ RNA-Eif3c与mi R-15a-5p、mi R-15a-5p与GSS、mi R-15a-5p与SOCS6可靶向结合。3.在利用LPS构建的BEAS-2B炎性细胞模型系列实验中发现:(1)与对照组相比,circ RNA-Eif3c过表达组的circ RNA-Eif3c、GSS、SOCS6表达水平明显上调(p<0.001),而mi R-15a-5p表达显著降低(p<0.001)。(2)与对照组相比,circ-Eif3c过表达+mi R-15a-5p mimic组中circ RNA-Eif3c、mi R-15a-5p、GSS、SOCS6表达均明显上调(p<0.01)。与circ RNA-Eif3c过表达组相比,circ-Eif3c过表达+mi R-15a-5p mimic组中circ RNA-Eif3c的表达无明显差异(p>0.05),而mi R-15a-5p显著增加(p<0.01),GSS以及SOCS6表达水平呈现降低(p<0.01)。(3)与对照组相比,circ-Eif3c过表达+SOCS6干扰组中,circ RNA-Eif3c、GSS表达明显上调(p<0.01),而mi R-15a-5p、SOCS6表达明显降低(p<0.001)。与circEif3c过表达组相比,circ-Eif3c过表达+SOCS6干扰组的circ-Eif3c、mi R-15a-5p、GSS表达均无明显差异(p>0.05),而SOCS6表达明显降低(p<0.001)。(4)与对照组相比,circ-Eif3c过表达+GSS干扰组中,circ RNA-Eif3c、SOCS6表达明显上调(p<0.01),而mi R-15a-5p、GSS表达明显降低(p<0.001)。与circ-Eif3c过表达组相比,circ-Eif3c过表达+GSS干扰组的circ-Eif3c、mi R-15a-5p、SOCS6表达均无明显差异(p>0.05),而GSS表达明显降低(p<0.001)。4.流式细胞学检测结果提示,与对照组相比,其余四组的细胞凋亡水平均明显降低(p<0.001),而与circ-Eif3c过表达组相比,其余三组:circ-Eif3c过表达+mi R-15a-5p mimic组、circ-Eif3c过表达+GSS干扰组、circ-Eif3c过表达+SOCS6干扰组的细胞凋亡水平均较之升高(p<0.001)。5.利用荧光染色(二氢乙锭法)检测细胞内ROS水平可见,与对照组相比,circ RNA-Eif3c过表达组细胞内ROS水平明显降低(p<0.001)。其余三组:circ-Eif3c过表达+mi R-15a-5p mimic组、circ-Eif3c过表达+GSS干扰组、circ-Eif3c过表达+SOCS6干扰组的细胞内ROS水平均较对照组降低(p<0.05),而较circ RNA-Eif3c过表达组升高(p<0.001)。6.Tubule实验可见,与对照组相比,circ-Eif3c过表达组、circ-Eif3c过表达+mi R-15a-5p mimic组、circ-Eif3c过表达+GSS干扰组、circ-Eif3c过表达+SOCS6干扰组中血管生成能力均明显增加(p<0.01)。但与circ RNA-Eif3c过表达组相比,其余三组:circ-Eif3c过表达+mi R-15a-5p mimic组、circ-Eif3c过表达+GSS干扰组、circ-Eif3c过表达+SOCS6干扰组的血管生成能力呈现降低(p<0.01)。结论1.circ-Eif3c可靶向结合mi R-15a-5p,而mi R-15a-5p可与下游GSS、SOCS6靶向结合。2.circ-Eif3c可通过特异性吸附mi R-15a-5p,进一步促进GSS、SOCS6的表达,从而改善气道上皮细胞凋亡,抑制气道上皮细胞内ROS的积聚,促进血管生成及损伤修复。

目的 探究急性闭角型青光眼（AACG）患者患眼视网膜对比敏感度（CSF）与视觉相关生活质量的关系。方法 将2019年3月至2021年3月本院眼科收治且CCRG 81045半抑制浓度确诊的41例（41眼）AACG患者为AACG组，同期确诊的41例（41眼）慢Plant biology性闭角型青光眼（CACG）患者为CACG组，41例（41眼）体检无眼科疾病志愿者为正常组。比较三组研究对象不同空间频率下的视网膜CSF；比较CACG组和AACG组患者的视觉相关生活质量；分析AACG患者患眼视网膜CSF与视觉相关生活质量的相关性。结果 12.0、18.0 c/d空间频率下，AACG组的视网膜CSF低于CACG组和正常组，CACG组的视RepSox配制网膜CSF低于正常组（P<0.01）。AACG组的焦虑、自我形象、情绪、日常生活、出行、治疗困难、自我掌控评分低于CACG组（P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示，AACG患者患眼不同空间频率下的视网膜CSF与焦虑、自我形象、情绪、日常生活、出行、治疗困难、自我掌控评分呈正相关（P<0.01）。结论 AACG患者患眼的中高频段空间视网膜CSF受损，视觉相关生活质量严重下降，且患眼不同空间频率下的视网膜CSF与视觉相关生活质量呈正相关。

【背景】自身免疫性胶质纤维酸性蛋白星形细胞病(Autoimmune Glial Fibrillary Acidic Protein Astrocytopathy,GFAP-A)是一种对类固醇激素反应良好的自身免疫性疾病,其核心的临床表型为脑膜脑脊髓炎。特异性的生物标志物为GFAP抗体。临床表现主要是发热、头痛、脑病、运动障碍、自主神经功能障碍、脊髓病、视力异常等等。脑脊液呈炎性改变,表现为白细胞计数增高、蛋白含量增加,部分伴有脑脊液低糖、低氯,与中枢神经系统感染性疾病鉴别困难,常常被误诊为结核性脑膜炎。患者脑部病灶多变,头颅磁共振典型表现为垂直于侧脑室的放射状血管样强化。GFAP-A患者对激素治疗反应良好,但部分患者反应欠佳,需长期的免疫抑制治疗。目前尚无GFAP-A的诊断和治疗指南或专家共识。【目的】初步分析两个临床中心(广州医科大学附属第二医院和广东三九脑科医院)的GFAP-A患者的人口学特征、临床表现、脑脊液、电生理及磁共振成像特点selleck抑制剂、治疗及结局,为GFAP-A的诊治提供参考。【方法】纳入广州医科大学附属第二医院和广东三九脑科医院于2015年04月至2023年03月收治的GFAP-A患者,收集患者的人口学特征、临床表现、脑脊液、磁共振成像、电生理检查、急性期治疗及结局等资料,并对相关资料进行归纳总结。【结果】(1)人口学特征:本研究一共纳入了118例GFAP-A患者,其中71例来自广州医科大学附属第二医院,47例广东三九脑科医院。在纳入的118例患者中,男性患者74例(62.7%),女性患者44例(37.3%),男女比例为1.7:1,发病年龄的中位数为49.0(36.0-62.0)岁。(2)临床表现:纳入的118例GFSBE-β-CD体外AP-A患者主要以急性或者亚急性起病。25例(25/118,21.2%)的患者具有前驱感染病史,其中呼吸道感染22例(22/25,88.0%)、泌尿系统感染2例(2/25,8.0%)、消化系统感染1例(1/25,4.0%)。GFAP-A常见的临床表现为:发热(60/118,50.8%)、肢体乏力(58/118,49.2%)、头痛(54/118,45.8%)、头晕(33/118,28.0%)、精神行为异常(27/118,22.9%)、排尿障碍(25/118,21.2%)、意识障碍(21/118,17.8host genetics%)、肢体麻木(21/118,17.8%)、排便障碍(17/118,14.4%)、视力异常(16/118,13.6%)、癫痫(15/118,12.7%)、恶心、呕吐(15/118,12.7%)、构音障碍(10/118,8.5%)、认知功能下降(9/118,7.6%)、吞咽困难、饮水呛咳(8/118,6.8%)、共济失调(8/118,6.8%)、视物重影(7/118,5.9%)、不自主运动(5/118,4.2%)、呃逆(4/118,3.4%)、视野缺损(2/118,1.7%)。GFAP-A的患者神经功能受损程度严重,入院MRS评分大于3分者共63例(63/118,53.4%),患者出院MRS评分大于3分共38例(38/118,32.2%)。(3)脑脊液:27例(27/118,22.9%)患者腰椎穿刺术的压力大于200 mm H2O。脑脊液化验结果显示白细胞计数增多,中位数为30.0×10~6/L,蛋白增高,中位数为759.5 mg/L。25例(25/118,21.2%)患者脑脊液葡萄糖含量小于2.5 mmol/L。(4)影像学:54例(54/107,50.5%)的患者头颅磁共振T2/FLAIR序列异常。病变部位多变,主要累及脑干(21/107,19.6%)、脑叶(20/107,18.7%)、基底节区(19/107,17.8%)、脑白质(15/107,14.1%)、丘脑(10/107,9.3%)、小脑(8/107,7.5%)、胼胝体(7/107,6.5%)、放射冠(5/107,4.7%)、半卵圆中心(5/107,4.7%)、海马(4/107,3.7%)、内囊(1/107,0.9%)、颅骨(1/107,0.9%)。61例(61/91,67.0%)的患者的头颅磁共振增强序列有异常强化,表现为垂直侧脑室的放射状血管样强化共29例(29/91,31.9%)。脊髓病灶主要累及胸髓及脊膜,出现连续性长节段病变(≥3个节段)的患者共26例(26/69,37.7%)。(5)电生理:脑电图检查提示51例(51/71,71.8%)的患者出现异常,以慢波异常为主,部分患者可见癫痫波。18例(18/42,42.9%)的患者肌电图异常。其中,累及周围运动神经13例(13/18,72.2%),累及周围感觉神经6例(6/18,33.3%),累及周围运动和感觉神经4例(4/18,22.2%),多发周围神经病变11例(11/18,61.1%),周围神经根受累12例(12/18,66.7%)。10例(10/34,29.4%)交感神经异常。(6)治疗及结局:在急性期,使用激素的治疗的患者有104例(104/118,88.1%),丙种球蛋白治疗64例(64/118,54.2%),免疫吸附治疗7例(7/118,5.9%),血浆置换5例(5/118,4.2%),免疫抑制剂17例(17/118,14.4%)。仅使用激素冲击疗方案对患者的症状改善率最高。经过治疗,改良Rankin评分(modified Rankin Scale,m RS)改善79例(79/118,67.0%),无变化34例(34/118,28.8%),加重5例(5/118,4.2%),其中2例(2/118,1.7%)患者住院期间死亡。【结论】(1)GFAP-A中年发病为主,男性居多。(2)GFAP-A在发病前可有前驱感染症状。临床表现主要是发热、肢体乏力、头痛、头晕、精神行为异常、尿便障碍、意识障碍、肢体麻木、视力异常等等。(3)GFAP-A的脑脊液呈炎症性改变,需和中枢神经系统感染性疾病相鉴别。(4)GFAP-A的病灶累及范围广泛,主要累及脑干、脑叶、基底节区、脑白质、丘脑、脑膜。脊髓主要是胸髓及脊膜受累。(5)GFAP-A对激素反应良好,少数反应欠佳。