Achr receptor

目的：构建共载阿霉素（DOX）和siRNA的还原敏感型前药纳米粒（PSCSD NPEmricasan体内s），并对其理化性质、细胞摄取和体外细胞毒性进行考察。方法：采用核磁共振氢谱（~(1)H NMR）和傅里叶红外光谱（FT-IR）对羧甲基壳聚糖-二硫键-DOX（CMC-ss-DOX）进行结构表征；超声法制备PSCSD NPs，考察其粒径、载药量、包封率、血清稳定性、溶血率和体外circadian biology释药特性等；采用荧光显微镜和流式细胞术考察4T1细胞对PSCSD NPs的摄取；通过MTT实验测定PSCSD NPs的体外细胞毒性。结果：~(1)H NMR和FT-IR结果表明CMC-ss-DOX成功合成；PSCselleck合成SD NPs的粒径为155.1±4.0 nm（PDI=0.144±0.028），Zeta电位为-29.9±1.0 mV，载药量为（8.25±0.47）%，包封率为（78.41±4.52）%；透射电镜观察PSCSD NPs为球形，且具有良好的血液相容性和血清稳定性。PSCSD NPs具有还原响应释药特性，可在肿瘤部位快速释药。细胞摄取和MTT实验结果表明PSCSD NPs可以有效共载DOX和siRNA进入肿瘤细胞内以发挥抗肿瘤作用。结论：成功制备了PSCSD NPs，共载DOX和siRNA以实现化疗和免疫治疗协同增效。

乌骨鸡(Gallus gallus domesticus)是我国优良的鸡遗传资源，通常被认为具有一定药用价值。为研究我国乌骨鸡品种的遗传多样性，对丝羽乌骨鸡、东乡绿壳蛋鸡、金湖patient medication knowledge乌凤鸡、余干乌骨鸡和竹丝鸡等5个乌骨鸡品种的197购买Rapamycin个个体线粒体DNA的Cytb基因全序列进行检测。结果表明：5个乌骨鸡品种的Cytb基因序列全长为1 143 bp,共检测到15个核苷酸多态位点，界定出9个单倍型。总体单倍型多样性、核苷酸多样性和平均核苷酸差异分别为0.715±0.018、0.001 23±0.000 54和1.404。中介网络图分析显示，5个乌骨鸡品种单倍型呈星状发散分布，不同群体包含的单倍型存在一定的差异，形态学和地理分布不明显。遗传距离分析Wnt-C59体内表明，竹丝鸡和丝羽乌骨鸡遗传距离较远，母系可能来自其他品种。这一研究为我国乌骨鸡遗传资源的保护、选育和鉴定提供了遗传背景信息。

共生固氮是大豆在面临氮匮乏时保障自身生存的必要手段。一旦生境中氮素充足,大豆将严格限制根瘤中的固氮活动,即“氮阻遏”现象。目前在成熟根瘤固氮中的“氮阻遏”分子机制研究取得了重要进展。但在大豆与根瘤菌的早期信号识别阶段是否存在“氮阻遏”机制的问题尚未得到解答,结瘤因子受体NFR1是否介导该过程中也并不清楚。本研究以大豆中结瘤因子受体Gm NFR1α缺失的不结瘤突变体nod49及其背景野生型为材料,在低氮(LN)及高氮(HN)条件下接种根瘤菌,并在不同时间点取样进行转录组及初级代谢物组学分析。转录组分析结果显示:(1)在根瘤菌侵染后的3个时间点,野生型中hepatic fat均有一些基因集在LN和HN条件下对根瘤菌侵染的响应有显著差异;(2)接菌后3 h样品中的子聚类模块8在LN下受根瘤菌显著诱导,而在HN下又被明显抑制;(3)GO富集分析结果显示,模块8相关基因主要参与微生物识别、免疫系统与防御机制调节、氮响应及代谢途径等代谢途径;(4)在接菌后6和72 h的样品中也能聚集到与3 h相似趋势的基因集,但富集到的生物学过程却并不相同;(5)发现Gm NFR1α的缺失导致一些基因响应外界氮水平及根瘤菌侵染的模式发生改变。通过初级代谢物组学及其与转录组的关联分析:(1)发现氮水平显著影响根系中代谢物积累,尤其是氨基酸、脂类、糖类及有机酸的变化;(2)大豆野生型在LN接种根瘤菌后,核苷酸、氨基酸、鞘脂类以及芥子油苷等物质的积累都被调整,一些被根瘤菌侵染诱导积累的代谢物会被HN抑制;(3)不同氮水平中生长的大豆,菌对其根系中蛋氨酸及花生四烯酸的积累量影响显著依赖Gm NFR1α;(4)在互作早期,有一部分基因的转录和初级代谢物积累量有较高相关性,如蛋氨酸、脯氨酸、芥子硫苷及花生四烯酸等;(5)相应代谢途径中点击此处的基因表达模式也因氮水平及根瘤菌侵染而有所不同,且该表达模式依赖于结瘤因子受体Gm NFR1α。综上所述,本研究在组学水平初步证明大豆-根瘤菌互作早期可能也存在“氮阻遏”机制,表明大豆可能通过依赖结瘤因子受体蛋白的信号通路对外界氮水平及根瘤菌侵染做出快速的分子及代谢层级响应。相关结果为深入解析大豆-根瘤菌互作早期的转录-蛋白-代谢重编辑的核心分子调控网络提供了重要参Erastin体外考。

盐诱导激酶(salt-inducible kinases, SIKStructuralization of medical reports)属于腺苷酸活化激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)家族，主要调控环磷酸苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein, CREB)转录共激活因子(CREB-regulated transcription coactivators, CRTCs)的胞核-胞质分布，对CRTC-CREB复合物的合成起到调节作用，从而间接影响CREB目的基因的转录与表达，影响多种生理过程，例如能量代谢、细胞周期进程和细胞凋亡。过去对SIKs的相关研究主要集中在外周系统疾病，包括肿瘤、高血压和糖异生等。近年来越来越多的研究开始探索SIKs和https://www.selleck.cn/products/BafilomycinA1.html中枢神经系统疾病的关联性，如抑郁症、睡眠障碍、癫痫和阿尔茨海默病等都存在SIKs水平异常的情况，这提示SIKs信号失调参与这些疾病的病理过Compound 3 IC50程，SIKs具有成为此类疾病新治疗靶点的潜力。本文就SIKs在抑郁症、睡眠障碍及其他神经系统疾病中的作用和调控机制进行综述。

目的 研究膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)基因单核苷酸多态性与广西壮族绝经后女性骨质疏松的关系。方法 用超声骨密度仪测量广西地区518例壮族绝经后女性左侧跟骨超声振幅衰减(BUA),并根据中国人骨质疏松建议诊断标准分骨量正常、骨量减少和骨质疏松组；MT1-MMP基因的4个Navitoclax供应商单核苷酸多态性(SAIDS-related opportunistic infectionsNP)位点(rs1003349、rsPevonedistat分子量3751488、rs2236303和rs743257)的分型采用多重单碱基延伸SNP分型技术(Multiplex SNaPshot)。结果 4个位点单核苷酸多态性与BUA变异无相关性(P>0.05)。rs743257位点TT基因型在骨量减少组和骨质疏松组中的分布频率明显比骨量正常组低，CT基因型则相反；在对骨质疏松危险因素的有序Logistic回归分析显示，壮族绝经后女性个体携带rs2236303 CT基因型发生骨质疏松的风险比TT基因型的低(OR=0.532,95%CI:0.308～0.917,P=0.023),携带rs743257 CT基因型发生骨质疏松的风险比TT基因型的高(OR=1.873,95%CI:1.159～3.027,P=0.010)。结论 MT1-MMP基因rs2236303 C/T和rs743257 C/T的基因多态性可能与广西壮族绝经后女性骨质疏松相关，rs2236303 TT基因型和rs743257 CT基因型可能是增加骨质疏松风险的因素。

为分析空间辐射环境质子的生物学效应特征,本课题利用新一代载人飞船在中地轨道飞行69小时,处理了拟南芥野生型(WT)、重力信号传导缺陷型突变体(pin2)和花青素合成缺陷的辐射敏感型突变体(ttg1),返回地面储存182天后种植,分析了生长发育和ROS及DDR功能基因组变化特征。研究结果如下:1)在表型方面,无论是野生型还是pin2和ttg1突变体,与其地面对照组比较,发芽率、根长及开花期缩短(p<0.05)反映了低剂量辐射刺激性状的变化。根尖组织ROS积累表现为O2·~-有所增高,对应的H2O2含量与对照相比显著降低(p<0.01)。2)在功能基因GO富集分析方面,发现野生型拟南芥主要表现为参与代谢功能的基因表达下调,但细胞对外界刺激等抗胁迫反应功能的基因表达上调;pin2突变体表达模式与野生型类似,但启动了更多抗胁迫和代谢功能基因的表达,而ttg1突变体表现为与核苷酸生物合成和甲基转移酶相关基因上调表达。生物代谢途径分析发现野生型和ttg1突变体都富集到了昼夜节律、氨基酸的生物合成和代谢通路等3条生物途径,而pin2突变体富集到了光合作用、类固醇生物合成途径。3)分析ROS和DDR相关调控基因的表达网络,表明野生型内源性ROS修复功能基因比pin2和ttg1突变体的表达增多,对应的ROS产生、传递相关基因未见变化,Blebbistatin而pin2和ttg1突变体ROS修复功能基因功能基因表达的较少,其内源性ROS产生、传递功能基因仍持续表达。对应的DDR修复通路功能基因,表现为野生型仍有一定数量的DNA损伤修复基因呈现下调变化,而pin2和ttg1突变体没有出现相应基因的变化。4)通过生物信息学方法获取了与开花期提前关联的ROS基因70个,并发现其中枢纽基因T21B4.20、DEAR3、BGLU33、BEL1和IDA。其中DEAR3结合Dimmunological ageingRE/CRT顺式核心作用元件来调控拟南芥中ROS清除相关基因的表达和抗氧化酶的活性,同时该基因也是植物开花发育的重要基因;IDA都是植物生长过程中的关键调控因子,影响植物器官的形成与脱落。GLU33、BEL1和T21B4.20这三个基因都是参与抗胁迫调控的基因,本研究发现他们参与了拟南芥开花期缩短的刺激效应。进一步,比较了与近地轨道对应功能基因的变化,表明近地轨道由于有占比较大的重离子诱发了www.selleck.cn/products/Gefitinib更强的ROS和DDR途径的表达基因,而中地轨道主要是质子诱发的内源性ROS,主要是激发了开花期缩短,发芽率及根长增加的刺激效应。

目的：探讨巨噬细胞炎症蛋白-1β(MIP-1β)、白细胞介素（IL）-27、IL-35联合检测对结核性胸腔积液（TPE）的诊断价值。方法：选择2021年5月至2022年12月德阳市罗江区人民医院及医疗集团医院收治的106例TPE患者为研究对象（研究组），以同期入院的106例恶性胸腔积液（MPE）患者为对照（对照组）。使用酶联免疫吸附测定法检测2组患者血清MIP-1β、IL-27、IL-35Medical procedure表达水平，比较2组患者入组时、研究组患者治疗前后3种细胞因子的表达水平，并绘制受试者操作特征曲线（ROC曲线）评价各指标单独检测与联合检测的诊断价值。结果：与对照组相比，研究组患者血清MIP-1β、IL-35水平显著升高，IL-27水平显著降低，差异有统计学意义（P<0.01）；与研MLN8237究组患者治疗前相比，研究组患者治疗后血清MIP-1β、IL-27、IL-35水平均显著降低，差异有统计学意义（P<0.01）;ROC曲线分析结果显示，MIP-1β、IL-27、IL-35三者联合诊断的诊断效能显著高于DNA Damage/DNA Repair抑制剂各指标单独检测（P<0.05）。结论：MIP-1β、IL-27、IL-35可用于TPE与MPE的鉴别诊断，且联合检测可提高诊断效能。

目的 探讨血清N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)与阵BI 10773纯度发性心房颤动(PAF)患者左心房重构和射频消融术后复发的关系。方法 选取2021年1月—2022年1月复旦大学附属闵行医院收治的PAF患者143例作为PAF组，同期选取医院体检健康者70例为健康对照组。比较2组血清Neu5Ac、MIP-1α水平，左心房重构指标[左心房收缩末期前后径(LAD)、左心房容积指数(LAVI)];采用Pearson法分析血清Neu5Ac、MIP-1α水平与左心房重构指标的相关性。患者均行射频消融术，术后随访12个月，根据有无复发分为复发亚组与未复发亚组。采用多因素Logistic回归模型分析影响PAF患者射频消融术后复发的危险因素。结果 PAF组血清Neu5Ac、MIP-1α水平高于健康对照组(t=5.743、18.710,P均<0.001)。PAF组LAD、LAVI值均大于健康对照组(t=5.177、32.473,P均<0.001)。Pearson法分析显示，血清Neu5Ac、MIP-1α水平与LAD、LAVI呈正相关(r=0.496、0.548、0.513、0.505,selleck化学P均<0.001)。随访12个月，无失访人员，复发38例(26.57%)。与未复发亚组比较，复发亚组高血压例数占比高，术后使用抗心律失常药比例低(χ~2=5.294、4.500,P=0.021、0.034),LAD、LAVI、WBC、SCr及血清Neu5Ac、MIP-1α水平均高，差异均有统计学意义(t=3.468、13.508、3.98hepatitis A vaccine2、5.260、4.671、3.745,P均<0.001); Logistic回归分析显示，合并高血压、LAD与LAVI增加、Neu5Ac与MIP-1α水平上升为PAF患者术后复发的危险因素，术后使用抗心律失常药为保护因素[OR(95%CI)=1.297(1.077～1.561)、1.064(1.007～1.124)、1.049(1.011～1.088)、1.034(1.007～1.061)、1.339(1.145～1.566)、0.583(0.412～0.823)]。结论 血清Neu5Ac、MIP-1α水平在PAF患者中上升，可导致左心房重构，是PAF患者射频消融术后复发的影响因素。

研究背景细胞焦亡(Pyroptosis)又称细胞炎性坏死,是一种程序性细胞死亡。相比于细胞凋亡(Apoptosis),细胞焦亡发生的更快,并伴随大量促炎症因子的释放。细胞焦亡广泛参与疾病的发生和发展,其抑制剂的开发也越来越受到研究人员的关注。细胞焦亡的激活包括Caspase-1依赖的经典途径和Caspase-4/-5/-11依赖的非经典途径。在经典途径中,活化的Caspase-1切割消皮素D(GasderminD,GSDMD),产生的GSDMD-N与细胞膜上的磷脂蛋白结合,形成跨膜孔洞。同时,活化的Caspase-1切割白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的前体 pro-IL-1β 和 pro-IL-18,形成有活性的 IL-1β和IL-18,释放到胞外,募集炎症细胞聚集,从而扩大炎症反应。Caspase-1抑制剂,如VX-765,已被证明具有体内外抗焦亡活性,可缓解多种焦亡相关疾病。因此,以Caspase-1为靶点是筛选细胞焦亡抑制剂的方向。天然小分子化合物在药物开发中具有免疫反应低、药代动力学好等优点,具有不可替代的价值。许多已获批准和临床试验的药物都是从天然产物中提取的,如青蒿素和姜黄素。目前,Caspase-1抑制剂主要是人工合成的拟肽类化合物和肽基类化合物,从天然产物中获得的Caspase-1抑制剂报道较少。因此,基于天然产物的具有体内外抗焦亡活性的Caspase-1小分子抑制剂有待被充分研究和报道。研究目的以Caspase-1为靶点,在天然产物中进行抑制剂的筛选,并在细胞模型和动物模型上进行抗焦亡活性研究,从而发现具有体内外抗焦亡活性的天然产物。研究方法1.蛋白表达和纯化通过大肠杆菌蛋白表达系统进行Caspase-1等重组蛋白的表达,通过镍柱亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析技术进行重组蛋白的纯化。2.基于2526个天然产物的Caspase-1抑制剂的筛选和验证基于重组 Caspase-1 蛋白和底物 Ac-YVAD-pNA 建立“Caspase-1+Ac-YVAD-pNA+化合物”高通量筛选体系,基于重组Caspase-1和GSDMD蛋白建立“Caspase-1+GSDMD+化合物”验证体系,对化合物的抗焦亡活性进行Pathologic complete remission初步验证。3.蛋白-小分子的分子互作实验通过表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)、差示扫描荧光(Differential Scanning Fluorimetry,DSF)和细胞热位移(Cellular thermal shift assay,CETSA)实验对化合物与Caspase-1蛋白的亲和力进行分析。通过高效液相色谱-飞行时间质谱法(High performance liquid chromatography-time-of-flight mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS)检测 Caspase-1.蛋白的分子量。4.去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1的细胞活性评价通过LPS和三磷酸腺苷(Adenosinetriphosphate,ATP)在BMDM细胞上建立细胞焦亡模型。通过WB检测Caspase-1和GSDMD的活化,通过ELISA检测炎症因子的释放,通过碘化丙锭(Propidiumiodide,PI)染色检测细胞死亡率,通过细胞免疫荧光检测凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis associated speck like protein containing a CARD,ASC)斑点的形成。在BMDM细胞中,通过siRNA沉默Caspase-1。分别在转染Negative siRNA和Caspase-1 siRNA的细胞上建立焦亡模型,进行去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1活性的考察。5.去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1的体内活性评价以LPS(5 mg/kg)气管滴注建立C57BL/6J小鼠ALI模型。在去甲泽拉木醛的动物实验中,小鼠随机分组,每组12只,组别如下:对照组、模型组、去甲泽拉木醛低剂量组(3.75mg/kg)、去甲泽拉木醛中剂量组(7.5 mg/kg)、去甲泽拉木醛高剂量组(15mg/kg)、VX-765组(50mg/kg)、地塞米松组(5mg/kg)。用0.5%CMCNa配制去甲泽拉木醛,灌胃给药。用20%Cremophor EL溶液配制VX-765,腹腔注射给药。用生理盐水稀释地塞米松注射液,腹腔注射给药。在造模前,连续给药7天,每天一次。在银杏酸C15:1的动物实验中,小鼠随机分组,每组12只,组别如下:对照组、模型组、银杏酸C15:1低剂量组(10mg/kg)、银杏酸C15:1中剂量组(20 mg/kg)、银杏酸 C15:1 高剂量组(30mg/kg)、VX-765 组(50mg/kg)、地塞米松组(5mg/kg)。银杏酸 C15:1 依次用 DMSO(10%)、PEG300(40%)、Tween-80(5%)、生理盐水(45%)溶解,腹腔注射给药。通过肺组织HE染色以及肺泡灌洗液中总蛋白、白蛋白和LDH的水平,评价去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1对小鼠肺损伤的改善作用。通过WB、ELISA和免疫组化检测Caspase-1的活化、GSDMD的切割和炎症因子的释放,证明去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1的体内抗焦亡活性。研究结果1.蛋白表达和纯化通过大肠杆菌蛋白表达系统获得了高纯度的炎性Caspase(Caspase-1、Caspase-4 和 Caspase-5)、非炎性 Caspase(Caspase-3 和 Caspase-6)和 GSDMD。蛋白活性检测结果显示,所纯化的几种重组蛋白的活性均较好,可用于后期化合物的筛选和活性验证实验。2.基于2526个天然产物的Caspase-1抑制剂的筛选和验证基于“Caspase-1+Ac-YVAD-pNA+化合物”高通量筛选体系对2526个天然产物进行初筛和复测,得到24个活性化合物。通过“Caspase-1+GSDMD+化合物”验证体系,对24个化合物的活性进行再验证,得到7个能够抑制GSDMD切割的目标化合物。接下来,通过分子互作技术对目标化合物与蛋白的亲和力进行检测,结果如下:①SPR结果显示腺苷钴胺与Caspase-1的KD值大于200 μM,棉酚的KD值大于50 μM,表明它们与Caspase-1的亲和力均较弱。②SPR结果显示银杏酸C15:1与Caspasae-1的KD值为4.83μM,阳性对照VX-765的KD值为11.3μM,表明银杏酸C15:1 比 VX-765对Caspase-1具有更高的亲和力。③通过DSF和CETSA考察去甲泽拉木醛对蛋白热稳定的影响。DSF结果显示,与去甲泽拉木醛孵育后,Caspase-1的Tm值从44℃增加到53.3℃。同时,基于细胞裂解液的CETSA结果也显示去甲泽拉木醛增加了 Caspase-1的热稳定性。在SPR实验中,去甲泽拉木醛在芯片上未能洗脱下来,猜测其可能与Caspase-1共价结合。因此,通过HPLC-Q-TOF-MS进行蛋白分子量的测定,结果显示与去甲泽拉木醛共孵育后,蛋白分子量增加,由此证明了去甲泽拉木醛是Caspase-1的共价抑制剂。结合动力学参数检测结果显示去甲泽拉木醛对Caspase-1的Kinact/Ki为1370.86± 74.08 M-1min-1。银杏酸C15:1类似物的结果显示漆树酸的IC50值为4.959±0.419μM,其活性与银杏酸C15:1相当,而腰果酚和水杨酸的IC50均大于200μM,考马斯亮蓝染色的胶图与酶活结果一致。由此说明银杏酸C15:1的活性需要苯环上的羧基和碳链同时存在。去甲泽拉木醛类似物的结果显示,雷公藤红素的IC50值为18.02±1.48 μM,扁蒴藤素的IC50值为168.1±23.6 μM,它们的活性均差于去甲泽拉木醛(IC50=7.255±0.371μM)。GSDMD的考马斯亮蓝染色胶图显示出相GSK1349572浓度同的结果,由此说明羧基是去甲泽拉木醛和雷公藤红素抑制Caspase-1活性的关键官能团之一。苯环上的醛基具有较强的亲电能力,能够与半胱氨酸上的巯基反应,这是去甲泽拉木醛与Caspase-1共价结合的活性官能团。另外,银杏酸C15:1和去甲泽拉木醛对Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、Caspase-3和Caspase-6的酶活结果表明它们均是Caspase的广谱抑制剂。3.去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1的细胞活性评价细胞上清的WB结果显示,正常组细胞上清中几乎无Caspase-1 p20,在LPS和ATP的刺激下,模型组细胞中大量的Caspase-1活化,形成Caspase-1 p20,释放到培养基。而去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1分别处理后,细胞上清中Caspase-1p20水平显著降低。采用FAM-FLICACaspase-1检测试剂盒进行荧光拍照,结果显示去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1均能降低细胞的荧光水平。由此说明,去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1抑制了 Caspase-1的活化。细胞裂解液的WB结果显示,正常组细胞中几乎无GSDMD-N,在LPS和ATP的刺激下,模型组GSDMD被显著活化,产生大量的GSDMD-N。去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1分别处理后,GSDMD-N的水平降低。同时,去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1也显著降低了 IL-1β、IL-18和LDH。并且PI染色表明去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1抑制了细胞死亡率。细胞免疫荧光结果显示去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1均对Caspase-1上游蛋白ASC斑点的形成无明显影响。在BMDM细胞中,通过siRNA沉默Caspase-1,结果显示,与转染Negative siRNA的细胞相比,转染Caspase-1 siRNA后,Caspase-1的表达显著降低。在转染了 Negative siRNA的细胞中,2.5 μM去甲泽拉木醛和5 μM银杏酸C15:1均显著抑制了 GSDMD-N的产生,同时抑制了 IL-1β、IL-18和LDH的释放。而在转染了 Caspase-1 siRNA 的细胞中,2.5 μM 去甲泽拉木醛对 GSDMD-N、IL-1β、IL-18和LDH均无抑制作用,5μM银杏酸C15:1对GSDMD-N、IL-1β和IL-18有抑制趋势,但差异无统计学意义。4.去甲泽拉木醛和银杏酸C15:1的体内活性评价HE染色结果显示模型组小鼠的肺组织呈现严重的肺泡间质性水肿、肺泡壁增厚、中性粒细胞浸润的病理形态,同时,相对于正常组,模型组小鼠肺泡灌洗液中的总蛋白、白蛋白和LDH均显著升高。由此说明,本实验成功构建了 ALI模型。去甲泽拉木醛低、中和高三个剂量均改善了小鼠的肺组织病变,同时逆转了肺损伤所致总蛋白、白蛋白和LDH的异常升高,呈现剂量依赖性,并且高剂量的去甲泽拉木醛对肺损伤的改善作用与VX-765和地塞米松均具有统计学差异。同样,银杏酸C15:1低、中和高三个剂量也改善了小鼠的肺组织病变以及总蛋白、白蛋白和LDH的异常升高,呈现剂量依赖性,并且银杏酸C15:1的活性与VX-765和地塞米松均具有统计学差异。WB结果显示,正常组小鼠的肺泡灌洗液几乎检测不到Caspase-1 p45和Caspase-1 p20,而 ALI 模型组的 Caspase-1 p45 和 Caspase-1 p20 蛋白水平急剧增加。与肺泡灌洗液的结果相一致,肺组织的WB和免疫组化结果也显示模型组小鼠高表达的Caspase-1 p45和Caspase-1 p20,表明所建立的ALI模型具有明显的Caspase-1活化的特征,适用于评价Caspase-1抑制剂的活性。相对于模型组,去甲泽拉木醛、银杏酸C15:1和VX-765给药组小鼠的肺泡灌洗液和肺组织中Caspase-1 p45和Caspase-1 p20均显著降低。并且15 mg/kg去甲泽拉木醛和30 mg/kg银杏酸C15:1对Caspase-1的抑制作用均与阳性对照VX-765(50 mg/kg)具有统计学差异。与Caspase-1的结果一致,正常组小鼠的肺泡灌洗液中几乎检测不到GSDMD-N,模型组中检测到急剧增加的GSDMD-N,说明ALI模型中存在明显的细胞焦亡的特征。相对于模型组,去甲泽拉木醛、银杏酸C15:1和VX-765 给药组的肺泡灌洗液中仅检测到较低水平的 GSDMD-N。通过ELISA对肺泡灌洗液中的IL-1β和IL-18进行定量检测。selleckchem JNJ-42756493结果显示,正常组只检测到微量的炎症因子,模型组小鼠在LPS的诱导下,IL-1β和IL-18均显著增加(P<0.001)。去甲泽拉木醛、银杏酸C15:1、VX-765和地塞米松给药组均逆转了 IL-1β和IL-18的异常升高,其中15 mg/kg去甲泽拉木醛和30 mg/kg银杏酸C15:1的活性均与VX-765和地塞米松具有统计学差异。研究结论通过本课题的研究可以得到以下结论:1.银杏酸C15:1和去甲泽拉木醛均是Caspase-1的抑制剂,其中去甲泽拉木醛是共价抑制剂。2.在原代巨噬细胞焦亡模型中,银杏酸C15:1和去甲泽拉木醛通过抑制Caspase-1的活化发挥抗焦亡作用。3.在LPS所致小鼠ALI模型中,银杏酸C15:1和去甲泽拉木醛均显著改善肺组织病变,抑制了细胞焦亡。

【目的】鉴定筛选出与罗氏沼虾生长性状相关的候选基因及信号通路，为揭示其生长发育的分子调控机制提供参考依据。【购买Tezacaftor方法】以同一全同胞家系雌性罗氏沼虾中不同生长速度的个体为试验材料，采用Illumina HiSeqTM2500进行转录组测序，经过滤、质控后利用Trinity进行拼接组装获得Unigenes，并在数据库（Nr、Nt、KO、Swiss-Prot、Pfam、Western BlottingGO、KOG和KEGG）中进行功能注释，通过DESeq2进行快速生长组与慢速生长组间的差异表达基因（DEGs）分析，运用GOseq和KOBAS进行GO富集分析和KEGG通路分析，采用MISA进行SSR位点挖掘。【结果】罗氏沼虾肌肉组织转录组测序共计获得321706038条Raw reads，经过滤筛选得到310075274条Clean reads，拼接组装后得到38969条Unigenes;18160条（46.60%）Unigenes成功注释在Nr、Nt、KO、Swiss-Prot、Pfam、GO、KOG和KEGG 8个数据库中。经DEGs分析，快速生长组与慢速生长组间共鉴定到DEGs 937个，其中上调表达基因235个，下调表达基因702个。937个DEGs分别富集到230个GO条目和21条KEGG信号通路中，包含氨基糖和核苷酸糖代谢（Amino sugar and nucleotidePLX-4720说明书 sugar metabolism）、糖酵解/糖质新生（Glycolysis/Gluconeogenesis）、氧化磷酸化（Oxidative phosphorylation）等信号通路。此外，在38969条Unigenes中共鉴定到22476个SSRs。【结论】不同生长速度的雌性罗氏沼虾肌肉转录组测序分析共筛选出937个DEGs，主要富集在氨基糖和核苷酸糖代谢、糖酵解/糖质新生、氧化磷酸化等信号通路上，在罗氏沼虾的生长发育过程中发挥重要作用。