Achr receptor

为了探究来源于枯草芽孢杆菌细胞zebrafish-based bioassays壁的肽聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)中β-防御素-1(SBD-1)表达的影响，本试验使用30μg/mL肽聚糖刺激ORECs不同时间(2、4、6、8、10和12 h),采用荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测SBD-1的mRNA和蛋白表达量，确定最佳刺激时间；再使用不同浓度的肽聚糖(0、10、20、30、40和50μg/mL)刺激ORECs 2 h,采用qPCR和ELISA方法检测SBD-1的mRNA和蛋白表达量，确定最佳刺激浓度。结果显示：(1)使用30μg/mL肽聚糖刺激ORECs不同时间时，SBD-1的mRNA和PF-6463922配制蛋白表达量随着时间的增加呈先下降后升高的趋势，2selleck 3-Methyladenine h时表达量最多并极显著高于对照组(P<0.001)。(2)使用不同浓度肽聚糖刺激ORECs 2 h时，SBD-1的mRNA和蛋白表达量随着肽聚糖浓度的升高呈现先升高后降低的趋势，在20μg/mL时表达量最多并极显著高于对照组(P<0.001)。(3)不同时间刺激试验和不同浓度刺激试验均不会对ORECs产生细胞毒性作用。结果表明，来源于枯草芽孢杆菌的肽聚糖能够诱导ORECs表达SBD-1,最佳刺激条件为20μg/mL枯草芽孢杆菌肽聚糖刺激ORECs 2 h。

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease)又被称作猪圆环病毒相关病(Porcine circovirus associated disease,PCVAD),它是猪圆环病毒2型(PCV2)引起的猪的多种疾病的总称,主要包括以下几种典型病症:断乳仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)、猪皮炎肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)、猪呼吸道病、肠炎、母猪繁殖障碍以及仔猪先天震颤等。PMWS病例于1991年在加拿大首次被发现,于1997年爆发流行,在这之后很多欧洲和美洲的国家都相继对该病有相关的报道,并且认定该病与猪圆环病毒2型有关。2001年我国首次报道猪圆环病毒病,截止目前该病几乎存在于我国所有猪群,严重影响了我国养猪业的生产和发展水平,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。近年来,新型纳米疫苗因为其具有佐剂、载体且能递呈抗原等功能,越来越受到研究者的关注。纳米颗粒可以将疫苗抗原和蛋白质递送到所需的作用位点,并通过黏膜给药途径保护递送的抗原在不利条件下不被降解;抗原递呈细胞对纳米颗粒的摄取可以增加并诱导强烈的免疫反应;纳米材料的缓释作用可使得疫苗抗原实现长效化,因此纳米材料被广泛应用于递送系统中。多孔纳米材料作为一种新型纳米载体,在疫苗研发中发挥着重要作用,其中共价有机框架(COFs)与金属有机框架(MOFs)作为新兴的多孔晶态纳米材料,它们独特优异的功能可设计、结构可预测、孔径可调节等特征,外加其高比表面积与有序开放型纳米通道可保证高负载能力,证明了MOFs与COFs材料成为抗体通用载体的可行性。该纳米材料用于疫苗抗原的载体,有望大幅提高疫苗诱导的免疫应答反应和免疫保护效率。本研究首先将构建好的Cap基因质粒分别转化到BL21(DE3)、Rosetta和BL21 Star(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后表达目的蛋白。经Ni柱亲和层析纯化,获得PCV2 Cap蛋白。用BCA法测定重组蛋白浓度,并经SDS-PAGE分析,结果表明成功表达获得分子量大小为29 k Da的单一条带的Cap蛋白。用纯化后的PCV2 Cap蛋白作为介质,选用纳米多孔晶态材料COFs与MOFs作为载体,通过包被的方式相结合,分别制备猪圆环病毒新型纳米疫苗,以实现增强被封装PCV2 Cap蛋白的热selleck稳定性和化学稳定性、提高免疫抗体水平的目标。采用BCA法测定PCV2@MOFs和PCV2@COFs蛋白包被率。CCK-8试验分别测试了COFs、MOFs、PCV2@MOFs、PCV2@COFs在12PR-171抑制剂.5μg/m L～200μg/m L浓度下对宿主细胞的毒性,结果显示上述材料对RAW264.7和PK-15无细胞毒性,说明该新型纳米疫苗在体外细胞上具有较好的安全性。通过皮下注射的方式对小鼠进行PCV2@MOFs疫苗的免疫,初步检测疫苗的免疫效果,采用猪圆环病毒ELISMedial extrusionA试剂盒对小鼠体内PCV2抗体进行检测。结果表明不同浓度(25μg、50μg、100μg)的PCV2@MOFs注射小鼠后,PCV2抗体均为阳性。综上所述,本研究基于原核表达的PCV2 Cap蛋白,采用多孔晶态纳米材料将其包被,制备的猪圆环病毒新型纳米疫苗PCV2@MOFs表现出良好的免疫应答作用。本研究为进一步深入研发猪圆环病毒新型纳米疫苗奠定了基础。

食盐是最常用的调味品之一,影响食品的味道和质量。但长期过量摄入食盐会对人体健康造成危害,因此减盐已成为全社会的迫切需求。本课题旨在探究在高食盐含量的面条制品中使用酵母抽提物(Yeast Extract,简称YE)进行减盐的可行性。为此,本文选取7种不同类型的YE,并对其呈味物质进行测定,以研究其组成和呈味特性;并通过分析相同添加量下YE对面团流变学特性、面片结构以及减盐挂面和热风干燥方便面食用品质的影响,以确定适用于减盐挂面和方便面的YE类型。最后,进一步分离纯化YE,鉴定其中的咸味肽序列,并结合分子对接技术和合成肽的感官评价验证咸味肽。主要研究结论如下:(1)不同类型YE的呈味物质含量差异显著,具有不同呈味特点。YE1主要LY-188011作用由含有14%谷胱甘肽的小分子肽呈味,其中57%的肽分布在180～1000 Da之间。其鲜味氨基酸含量为26.26 mg/g,但鲜味核苷酸含量较低,仅为8.07 mg/g,协同增鲜效果较弱。YE2中膳食纤维含量高达70.35%,其中葡聚糖和甘露寡糖占比分别为31.20%和36.80%,其呈味效果最弱。YE3由小分子肽呈味,其中81%的肽分布在180～1000 Da之间,但其鲜味核苷酸和鲜味氨基酸含量较低,分别为23.31和7.33 mg/g,协同增鲜效果较弱。YE4和YE7主要由呈味核苷酸、小分子肽和游离氨基酸三者共同呈味,其中YE4的鲜味游离氨基酸含量为65.97 mg/g,呈味核苷酸含量为83.34 mg/g;YE7的鲜味游离氨基酸含量最高,为76.27 mg/g,呈味核苷酸含量为66.42 mg/g;它们中分子量在180～1000 Da之间的小分子肽占比分别为65%和55%。YE4和YE7的协同增鲜效果和小分子肽呈味效果均较好。YE5和YE6主要由呈味核苷酸和游离氨基酸共同呈味,其中YE5的呈味核苷酸含量为164.58 mg/g,鲜味游离氨基酸含量为47.43 mg/g,但氯化钠含量高达20.48%;YE6的呈味核苷酸含量最高,为283.11 mg/g,鲜味游离氨Captisol浓度基酸含量为62.25 mg/g。YE5和YE6的协同增鲜效果较为显著,但二者肽分子量分布不均匀,小于180 Da部分占比较高,分别为82%和87%。(2)YE可以改善减盐挂面和热风干燥方便面的感官品质,提升减盐挂面和方便面的咸度与风味,其中YE4和YE7效果较为显著。但YE会破坏面筋蛋白分子间二硫键,弱化面筋网络结构。当添加量为1%时,不同类型的YE均会使面团吸水率增大,弱化度增加,稳定时间下降,面团的抗延展能力降低,小麦粉糊化的峰值粘度降低,崩解值增大,同时还会导致面片中弱结合水和自由水比例上升,麦谷蛋白大聚体含量下降。在挂面品质方面,YE的添加导致烹煮后挂面Staphylococcus pseudinter- medius的颜色加深,硬度和弹性略有下降。感官评价发现,除YE1外,添加其他类型YE后挂面的口感与单独减盐挂面没有显著的差异。在方便面品质方面,YE1无法制成方便面,而其他类型YE的添加使复水后方便面的硬度和弹性略有下降,但感官评价并未出现无法接受的现象。(3)以咸味强度为指标,采用超滤、凝胶过滤色谱和制备型液相色谱等分离纯化手段,对YE4中咸味组分逐级进行分离纯化;分离纯化后具有最高咸味强度的组分经UPLC-Q/TOF MS/MS分离鉴定共得到7条可能的咸味肽,分别为DIPVPKPK(DI8)、KFGSSDK(KF7)、KGNATGA(KG7)、PGNPILK(PG7)、ILISKKI(IL7)、SGGGGGGA PS(SG10)和LYDNTNHIEEEV(LY12)。分子对接结果显示,氢键和盐桥是咸味肽与咸味受体结合的主要作用力;对接结合能顺序为KF7

目的 构建预测慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者停用核苷（酸）类药物（nucleoside and nucleotide analogs,NAs）后并发慢加急性肝衰竭（acute-on-chronic liver failure,ACLF）风险的列线图模型，并验证模型的预测能力。方法 选取2018年3月—2022年10月我院收治的停用NAs后复发的CHB住院患者作为研究对象，收集患者临床资料，采用单因素和多因素Logiflow-mediated dilationstic回归分析其发生ACLF的危险因素，并建立列线图模型。结果停药持续时间长、HBe Ag阳性、总胆红素≥85.5μmol/L、凝血酶原活动度<50%、血小板计数<100×10~9/L和白蛋白<35 g/L是CHB患者停用NAs后并发ACLF的独立危险因素（P均<0.05）。模型验证结果显示，一致性指数为0.851(95%CI:0.819～0.883），校准曲线趋近于理想曲线，ROC曲线的AUC为0.847(95%CI:0.759～0.84更多2），在2%～79%预测范围内，模型净获益。结论 CHBCHIR-99021溶解度患者停用NAs后并发ACLF的危险因素较多，基于危险因素建立的列线图模型对CHB患者停用NAs后并发ACLF风险具有良好的预测效能。

目的 探究副干酪乳杆菌X12(Lactobacillus.paracaseisubsp.paracaseiX12)抑制N-二甲基亚硝胺(N-Telaglenastat临床试验nltrosodimethylamine,NDMA)诱导IEC-6细胞(大鼠肠道黏膜细胞)毒selleck AZD2281性损伤作用。方法 通过胃液、肠液耐受性实验、扫描电镜法分析副干酪乳杆菌X12益生功能和菌株的形态;通过CCK-8实验对副干酪乳杆菌X12抑制NDMA诱导IEC-6细胞毒性作用进行分析。结果 胃肠道耐受性实验显示,副干酪乳杆菌X12可耐受胃肠液的消化,但对胆盐的耐受性略差;扫描电镜下副干酪乳杆菌X12菌体呈短而圆的杆状结构,无鞭毛;CCK-8实验结果显示primiparous Mediterranean buffalo,在MRS培养基中NDMA (0～80μg/mL)对副干酪乳杆菌X12的生长无显著影响(P>0.05);副干酪乳杆菌X12可抑制NDMA致大鼠肠道黏膜细胞IEC-6毒性的作用,且该作用与副干酪乳杆菌X12的剂量有关。结论 副干酪乳杆菌X12可抑制NDMA诱发的IEC-6细胞毒性损伤。

木聚糖是地球上含量第二丰富的天然可再生多糖资源,它是一种复杂的杂PR-171溶解度多糖,由不同的单糖和有机酸在糖苷和酯键的作用下连接在一起,通过内切-β-1,4-木聚糖酶裂解β-1,4-糖苷键可以将木聚糖水解。木聚糖酶在自然界中广泛存在,如软体动物、昆虫和微生物中,微生物来源的木聚糖酶具有良好的底物特异性和生化特性,在工业和生物技术等领域应用广泛。虽然目前的研究报道中已经有大量的天然木聚糖酶被研究和克隆表达,但是大多数的天然木聚糖酶需要温和的环境条件才能发挥作用,而在一些高温高碱的极端生产条件下,天然木聚糖酶通常无法发挥有效的催化活性。本研究对来自Cellulomonas flavigena的木聚糖酶Xyn B进行序列和结构分析,利用基因工程的手段,通过柔性连接肽将在xyn B基因与一段表达冰核蛋白的inp基因连接,获得inp-Xyn B基因,将xyn B基因和inp-Xyn B基因分别插入p ET-28a(+)质粒的Nco I和Xho I酶切位点之间,成功构建了两株工程菌株,Escherichia coli BL21(DE3)-p ET-28a(+)-inp-Xyn B和Escherichia coli BL21(DE3)-p ET-28a(+)-xyn B。木聚糖酶Xyn B、Inp-Xyn B的最适p H为7.0,在p H 4.0-9.0的条件下,保留了60%以上的最大活性;最适温度为55℃,在60、70℃条件下,半小时以内酶活保持在50%以上,Ca~(2+)、Mn~(2+)、Fe~(2+)和Co~(2+)的存在能使酶活力提高,而Zn~(2+)、Ni~(2+)和Cu~(2+)则会使酶活力降低。该结果表明,游离表达和冰核蛋白表面展示后的Xyn B最适温度、最适p H等酶学特性较为相似,为后续木聚糖酶改造和突变子的筛选奠定了基础。为了提高木聚糖酶Xyn B的耐热性,通过序列对比和三维结构分析,采用N端片段替换的方式,将与Xyn B序列同源性达到64.9%的耐热木聚糖酶Syxyn11P的N端片段的前105、126、141和153个碱基片段扩增,将Xyn B的N端的前96、117、132和144个碱基通过反向PCR去除,通过无缝克隆拼接得到重组质粒,成功构建了四株工程菌株,通过IPTG诱导获得了四种改造木聚糖酶ECXyn1、ECXyn2、ECXyn3和ECXyn4。四种重组木聚糖酶的最适温度分别为60、60、65和85℃,其中ECXyn4的最适温度比Xyn B提高了30℃,Tm值比Xyn B高34.5℃,在p H 6.0-10.0的条件下能够保持50%以上的酶活力,比酶活提高至12151.18 U/mg,在金属离子浓度为1 mmol/L的反应体系中处理30 min,酶活力仍保持在90%以上。为了进一步的提高重组酶ECXyn4的热稳定性,选取了ECxMEK抑制剂yn4片段替换接缝处左右各60个碱基的区域进行随机突变,通过易错PCR的方式建立突变文库,使用15μL Star Mut Enhancer建立了最佳突变体Toxicant-associated steatohepatitis系,该体系重组子的总突变个数约达到整体个数的77.8%,碱基突变率约为2.59%,突变率适宜。通过流式细胞仪分选出单细胞,打入96深孔板中培养,诱导产酶,使用木聚糖酶特异性荧光底物检测活性,建立了木聚糖酶随机突变和筛选方法。本研究使用合理的设计策略结合分子生物学手段提高了木聚糖酶Xyn B的嗜热性和热稳定性,使得木聚糖酶在一些高温高碱的极端生产条件也能够发挥有效的催化活性,为扩大木聚糖酶的应用范围提供了研究基础。

研究背景:全世界早产儿出生Liraglutide率逐年上升,中国早产儿出生率由1980年5%上升至2022年10%,目前每年约有100多万早产儿出生。氧疗在早产儿早期治疗无法避免,氧疗导致脑损伤也受到更多重视。过去十余年的临床研究及动物实验表明,常压高氧会通过氧化应激、炎症反应等导致早产儿白质和灰质损伤。在大脑成熟的时期,高氧可以影响其发育过程,早期包括破坏神经可塑性和髓鞘形成,远期可能会影响到运动及认知功能。因此,如何预防早产儿常压高氧脑损伤就显得尤为重要Primers and Probes。研究目的:黄芪多糖(APS)可通过促进EGFL7表达、提高超氧化物歧化酶活性(SOD),降低暴露在常压高氧环境下新生大鼠脑损伤。研究方法:1、建立动物模型:将44只新生3天(P3)SD大鼠随机分成4组(n=10):空气+注射生理盐水组:(A组)、空气+注射黄芪多糖组(40mg/kg·d:B组)、高氧+注射生理盐水组(C组)、高氧+注射黄芪多糖组(40mg/kg·d:D组),并开始持续向密闭容器通入80%高浓度氧,建立高氧脑损伤动物模型。2、予通高氧第3天(P6)后,取脑组织进行HE染色、Tunel检测细胞凋亡、炎症因子(IL-1β、IL-6)、氧化应激(总超氧化物歧化酶T-SOD)检测;WB检测脑组织中EGFL-7。结果:1.常压高氧脑损伤模型组(C组)相比对照组(A组),脑组织切片HE染色可见较多脑白质细胞水肿,核固缩,组织排列较为紊乱;D组与C组相比,组织排列较为有序。2.予通高氧第3天(P6)后,C组相比对照组(A组)细胞凋亡指数高,差异有统计学意义(P<0.05);C组相比B组细胞凋亡指数高,差异有统计学意义(P<0.05);D组相比C组细胞凋亡指数低,差异有统计学意义(P<0.05);D组相比B组细胞凋亡指数高,差异有统计学意义(P<0.05)。3.予通高氧第3天(P6)后,各组脑组织炎症因子差异(IL-1β、IL-6)无统计学意义。4.予通高氧第3天(P6)后,D组T-SOD浓度与对照组A组相比升高,差异有统计学意义(P<0.05);D组T-SOD浓度与B组相比升高,差异有统计学意义(确认细节P<0.05);D组T-SOD浓度与对照组C组相比升高,差异有统计学意义(P<0.05);C组T-SOD浓度与对照组B组相比降低,差异有统计学意义(P<0.05)。5.予通高氧后第3天(P6)后,D组EGFL7蛋白浓度与C组相比升高,差异有统计学意义(P<0.05);C组EGFL7蛋白浓度与A组相比降低,差异有统计学意义(P<0.05);C组EGFL7蛋白浓度与B组相比降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.黄芪多糖(APS)可通过上调EGFL7、提高超氧化物歧化酶活性(SOD),降低暴露在常压高氧环境下新生大鼠脑损伤。2.单独与新生大鼠注射黄芪多糖(40mg/kg·d)不会增加脑组织内细胞凋亡、氧化应激及炎症反应。3.短期(3天内)予新生大鼠通常压高氧不会引起明显的炎症反应。

目的:根据中医“异病同治”理论,基于UHPLC-Q-TOF/MS技术、网络药理学、分子对接方法、细胞实验预测益心饮治疗心律失常、心力衰竭、心肌炎的核心靶点及相关信号通路。方法:采用UHPLC-Q-TOF/MS技术,对益心饮的化学成分和给药大鼠入血原形成分进行分析鉴定;并且通过TCMSP、SwissTargetPrediction等在线数据库获取入血原形成分潜在作用靶点,利用OMIM、Genecard等数据库获取疾病靶点,做Venn图获取交集靶点,并通过STRING11.5数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,筛选核心靶点,并选用cytoscape3.9.0构建“疾Forensic Toxicology病-成分-靶点”网络;利用DAVID数据库对核心靶点进行GO功能和KEGG富集分析,并运用Autodock vina软件进行分子对接验证,并以H9c2细胞对潜在活性成分和靶点进行验证。结果:从益心饮中鉴定得到157个化合物;从大鼠血清中鉴定得到34个化合物,主要包括姜辣素、异甘草素、甘草次酸等化合物,得到139个交集靶点,结合PPI网络筛选得到31个核心靶点,主要含有TNF、IL-6等PF-02341066溶解度靶点,KEGG通路富集分析主要涉及TNF信号通路、IL-17信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等。选取TNF、IL-6靶点AMG510配制与主要化合物进行分子对接,对接结果均小于-5 kcal/mol。体外细胞实验表明,益心饮能够通过调节TNF、IL-6发挥治疗作用。结论:益心饮主要潜在活性成分可能是异甘草素、甘草次酸、姜辣素、毛蕊异黄酮苷、丹酚酸B,主要通过作用于TNF、IL-6等靶点来调控特定的信号通路,发挥疗效。

背景 抑郁症发病机制至今尚未完全清楚，既往研究表明，犬尿氨酸途径（KP）在抑郁症发病中具有重要作用。目的 探讨首发和复发抑郁症患者血清KP代谢物水平的差异，并分析血清KP代谢物水平与抑郁症状严重程度的关系，为预防抑郁症复发提供参考。方法 连续纳入2016年11月-2018年12月在广州医科大学附属脑科医院门诊就诊的符合《精神https://www.selleck.cn/products/INCB18424.html障碍诊断与统计手册（第5版）》（DSM-5）诊断标准的136例抑郁障碍患者为研究组，其中首发组62例，复发组74例。同时纳入60例健康被试作为对照组。所有患者均接受汉密尔顿抑郁量表17项版（HAMD-17）评定。采用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法检测抑郁障碍患者和对照组血清色氨酸（TRP）、犬尿氨酸（KYN）以及犬尿喹啉酸（KYNA）水平。采用偏相关分析考查抑郁症患者HAMD-17各因子评分及总评分与KP代谢物水平的关系。结果 与对照组相比，首发组和复发组TRP水平更低（t=-3.044、-4.477,P<0.05或0.01）,KYN/TRP更高（t=2.343、3.644,P<0.05或0.01），差异均有统计学意义。与复发组相比，首发组和对照组KYNA水平更高（t=2.490、2.636,P<0.05或0.01）,KYNA/KYN更高（t=2.894、2.616,P均<0.01），差异均有统计学意义。偏相关selleck激酶抑制剂分析显示，首发抑郁症患者KYN/TRP与HAMD-17的焦虑/躯体化因子评分呈正相关Coloration genetics（r=0.261,P<0.05）,KYNA/KYN与HAMD-17总评分及阻滞评分均呈负相关（r=-0.286、-0.282,P均<0.05）；复发抑郁症患者KYN/TRP与焦虑/躯体化评分呈正相关（r=0.280,P<0.05）。结论 首发和复发抑郁症患者血清KP代谢物水平存在差异，且复发患者KP代谢物水平异常更明显，KP代谢物可能是抑郁症辅助诊断及判断复发的潜在生物标志物。

目的 探讨阴道乳杆菌活菌制剂与局部抗真菌药物联合应用治疗外阴阴道假丝酵母菌病购买S63845(vulvovaginal candidiasis, VVC)合并细菌性阴道炎(bacterial vaginosis, BV)混合感染的有效性及复发情况，探讨VVC合并BV的合适治疗方案。方法 选取2019年1月～2021年1Etoposide纯度月上海市青浦区朱家角人民医院妇科门诊诊断为VVC合并BV患者164例。随机将患者分为两组，单药组79例，给予单纯局部用硝呋太尔制霉菌素阴道栓治疗；联合组85例，给予阴道局部硝呋太尔制霉菌素栓联合延华胶囊治疗，统计两组Immune clusters的治愈率、有效率及复发率。结果 VVC合并BV治疗前后两组患者症状体征、复发率差异无统计学意义，治愈率、有效率差异有统计学意义(P<0.05)。第1次复查时，乳酸杆菌分级差异有统计学意义(P<0.05)。结论 乳杆菌制剂与硝呋太尔制霉菌素阴道栓联合用药治疗VVC合并BV可达到更高的有效率和治愈率，联合用药效果更佳，但长期复发率无明显改善。