Achr receptor

二氢卟吩铁是一种新型的植物生长调节剂,其安全、绿色无污染,已在粮食作物、经济作物和部分园艺作物上表现出广谱的诱导抗性和增产效果。为了解析该化合物在植物诱导抗性方面的作用机理,以及获悉更多进一步拓展其应用范围,本论文以二氢卟吩铁-番茄-尖孢镰刀菌互作系统,初步探究了二氢卟吩铁诱导番茄抗枯萎病的最佳诱导浓度、间隔时间、抗病效果,并初步解析了其诱导抗性机制等;同时,本论文还评估了二氢卟吩铁在葡萄以及其他水果采后保鲜方面的效果。主要结果如下:1.以番茄品种‘Moneymaker’为试验材料,评估了二氢卟吩铁诱导番茄对枯萎病的抗病效果。筛选出最佳的二氢卟吩铁浓度为0.2μg/m L,最佳的诱导间隔时间为7天,其诱导抗枯萎病的防治效果可达41.6%,通过q RT-PCR对二氢卟吩铁诱导相关抗性基因检测结果表明,PAL和CHI的相对表达量均有不同程度的增高;并且浓度为0.2μg/m L二氢卟吩铁溶液处理过的突变体植株Nah G和Def-1与野生型植株Moneymaker相比防效指数降低,说明二氢卟吩铁可能通过JA或SA路径诱导番茄抗性。为相关研究为后续深入解析二氢卟吩铁的诱导抗性机理奠定的基础。2.以葡萄品种‘白罗莎里奥’为试验材料,本研究评估了不同浓度的二氢卟吩铁对冷库保存的白罗莎里奥葡萄以及新鲜采摘葡萄的保鲜效果,以腐烂Hydrotropic Agents抑制剂率、果实硬度、可滴定酸含量、可溶性固形物含量为评价指标,以水处理、1-甲基环丙烯(1-MCP)处理分别作为空白和阳性对照。结果表明二氢卟吩铁有效成分为0.04μg/m L水溶液的保鲜效果最好,可以延长葡萄在室温密闭条件下的保存时间,为葡萄保鲜提供新思路和参考依据。3.在使用二氢卟吩铁对白罗莎里奥葡萄做保鲜实验的基础上,对巨峰葡萄、红颜草莓、车厘子和香蕉进行保鲜实验。结果表明,二氢卟吩铁处理后巨峰葡萄不能Milk bioactive peptides降低其腐烂率、落粒率。证明二氢卟吩铁处理不同品种的葡萄效果不同。在红颜草莓、车厘子和香蕉实验的结果表明,二氢卟吩铁对不同水果的保鲜效果不同,其中二氢卟吩铁浓度过高或者过低可能还会加速果实的成熟。例如,低浓度刺激车厘子、“红颜”草莓和香蕉的成熟,而高浓度加速白罗莎里奥和巨峰葡萄的成熟。相关研究可进一步拓展二氢卟吩铁的应用范围。

为研究虾Empagliflozin细胞培养肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei， EHP)基因组中SSR (simple sequence repeat， 简单重复序列)基本信息， 给虾肝肠胞虫及其近缘种在分子标记开发、种群进化和遗传多样性研究等提供理论支持， 本研究采用生物信息学方法对虾肝肠胞虫全基因组中SSR位点的数量、分布及频率等信息进行统计分析， 与其他五种微孢子虫真菌物种基因组进行了比较。在虾肝肠胞虫基因组中共搜索到794个SSR， 总长度为21773 bp， 占基因组的0.72%， SSR的平均长度为27.43 bp， 相对丰度为262 loci/Mb， 相对密度为7184.43 bp/Mb。6种SSR类型中community-pharmacy immunizations， 四核苷酸SSR数量最多， 有570个， 总长度为12152 bp， 占SSR总数的71.79%， 平均长度为21.32 bp， 相对丰度为188.08 loci/Mb， 相对密度为4009.79 bp/Mb; 二核苷酸SSR数量最少， 仅有20个， 总长度为280 bp， 占SSR总数的2.52%， 平均长度为14 bp， 相对丰度为6.6 loci/Mb， 相对密度为92.39 bp/Mb。基因组高频率(≥10)出现的SSR重复类型为: AACT， TTAG， TAGT， ACTA， AGTT， CTAA， AACTA， GTTA， TTAGT， TAAC， AT。选择序列长度不小于20 bp的多核苷酸SSR共计30个， 进更多行引物设计用于物种鉴定。利用GO数据库对含SSR基因进行功能注释， 共有28个基因(3.53%)注释到分子功能、生物进程及细胞组分3类中。将虾肝肠胞虫与其他微孢子虫真菌相比， 虾肝肠胞虫中SSR的数量及相对丰度适中， 由此可知基因组大小与SSR数量无关。该研究为虾肝肠胞虫的种群遗传及进化相关研究奠定了基础。

目的 采用Meta分析方法评估COVID-19相关肺曲霉病（CAPA）发病率及其临床特征、治疗和预后。方法 计算机检索PubMed、Web oequine parvovirus-hepatitisf Science、Cochrane Library、Embase、中国生物医学文献数据库、维普网、万方数据知识服务平台、中国知网中有关CAPA的文献，检索时间从建库至2023-03-01。采用RevMan 5.3软件进行Meta分析，合并计算CAPA的发病率、临床特征、治疗及预后。结果 共纳入18篇文献，均为高质量文献，包括6 329例COVID-19患者、1 028例CAPA患者。Meta分析结果显示：CATM/ATR抑制剂APA发病率为0.11[95%CI(0.10,0.11)]。CAPA患者男性Barasertib核磁占比较高，为0.75[95%CI(0.72,0.78)]；发热、咳嗽、呼吸急促发生率较高，分别为0.90[95%CI(0.86,0.93)]、0.64[95%CI(0.58,0.70)]、0.64[95%CI(0.56,0.72)]；斑片状浸润、肺实变检出率较高，分别为0.88[95%CI(0.83,0.94)]、0.73[95%CI(0.68,0.79)]。CAPA患者皮质类固醇使用率最高，为0.96[95%CI(0.95,0.98)]。CAPA患者死亡率为0.52[95%CI(0.48,0.56)]。结论 CAPA发病率为11%，男性居多，其主要临床表现为咳嗽、发热、呼吸急促，绝大多数患者接受皮质类固醇治疗，CT表现主要为斑片状浸润及肺实变，死亡率为52%。

骨肉瘤(Osteosarcoma,OS),是最常见的原发恶性骨肿瘤之一,好发于青少年,恶性程度高,容易早期发生肺转移。骨肉瘤目前的治疗方式主要为外科手术联合围手术期化疗。人工关节重建技术的进步,以及化疗方案的改进和完善,使骨肉瘤患者的保肢率和生存率都得到了显著改善。但是对于出现复发、转移的骨肉瘤,预后仍然很差,5年生存率只有大约20%。在治疗过程中出现化疗药物耐药,以及在根治性手术中存在术区肿瘤残留,可能与骨肉瘤的复发、转移、不良预后密切相关。乏氧是肿瘤微环境的特点之一。由于肿瘤的生长速度超过了供氧血管的生长速度,大多数实体肿瘤内部都会出现乏氧现象。乏氧微环境,已被证实是引起包括骨肉瘤在内的多种实体肿瘤恶性程度增加、转selleckchem SB203580移能力增强,以及药物耐药的因素之一,与肿瘤进展、转移和不良预后密切相关。缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)是重要的乏氧标记物,常常在乏氧细胞中高表达。HIF-1α已被证实能通过促进肿瘤细胞的增殖和侵袭,提高肿瘤细胞在乏氧环境中的生存能力。乏氧激活前药替拉扎明(Tirapazamine,TPZ)在乏氧细胞内代谢后,能产生可以与DNA结合的自由基,导致细胞的DNA损害和死亡。但替拉扎明对常氧环境中的细胞毒性有限。替拉扎明还被发现可以增强多柔比星、顺铂等化疗药物的作用。替拉扎明用于骨肉瘤治疗的研究,在2021年才见报道,现有文献很少。目前对于替拉扎明对骨肉瘤的作用及相关机制有很大的研究前景。此外,在骨肉瘤等恶性骨肿瘤的根治性手术中,由于肿瘤常常毗邻重要血管、神经,以及需要兼顾保留软组织和获取足够切缘之间的平衡,需要一个有效的方法灭活创面内潜在的残余肿瘤,以降低肿瘤复发的风险。根据骨肉瘤等恶性骨肿瘤的临床特点和治疗需求,开发替拉扎明局部应用等新使用方式,可能是目前替拉扎明等乏氧激活前药值得探索的方向。本研究旨在利用体外和体内实验探讨乏氧对骨肉瘤的影响,阐述替拉扎明对常氧和乏氧骨肉瘤细胞的效应及作用机制,展示替拉扎明局部应用对骨肉瘤的治疗效果。第一部分:乏氧骨肉瘤细胞增殖与侵袭的动物研究研究目的和意义:目前尚未见在动物模型中对比乏氧环境中存活的骨肉瘤细胞与常氧环境培养的骨肉瘤细胞差异的报道。本部分拟利用动物植瘤实验,对比乏氧和常氧骨肉瘤细胞所形成的实体骨肉瘤在增殖、侵袭等相关蛋白表达方面的差异。研究方法:培养了能在乏氧环境中稳定生长的HOS骨肉瘤细胞。将12只裸鼠平均分为常氧组和乏氧组。常氧组裸鼠皮下植入常氧环境中培养的HOS骨肉瘤细胞。乏氧组裸鼠皮下植入经乏氧环境处理的HOS骨肉瘤细胞。绘制两组裸鼠皮下骨肉瘤的生长曲线。处死裸鼠后,称量两组肿瘤的质量。使用蛋白质免疫印迹,比较两组肿瘤组织内Ki-67、MMP2、HIF-1α表达的差异。结果:与常氧组相比,乏氧组裸鼠皮下的肿瘤生长更快,质量更高。乏氧组的实体骨肉瘤Ki-67和MMP2蛋白表达更高。两组实体骨肉瘤中的HIF-1α表达未发现差异。结论:乏氧环境中存活的骨肉瘤细胞所形成的实体骨肉瘤,具有更强的增殖能力和侵袭潜力。实体骨肉瘤内的HIF-1α表达程度可能不能完全反映实体肿瘤的增殖、侵袭能力。第二部分:乏氧和替拉扎明对骨肉瘤细胞的效应及机制研究研究目的和意义:本部分拟探索乏氧、替拉扎明,以及两者的交互作用对骨肉瘤细胞的影响。这是目前相对全面的替拉扎明对骨肉瘤的效应及机制的研究。本研究还发现,替拉扎明会引起骨肉瘤细胞HIF-1α表达和Akt磷酸化改变。此前没有替拉扎明引起Akt细胞通路改变的报道。研究方法:选择HOS和K7M2-WT骨肉瘤细胞系,分别利用MTT实验、Ed U实验、Transwell实验、细胞凋亡实验、细胞周期实验、蛋白质免疫印迹等方法,探索乏氧环境和替拉扎明对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、细胞周期、细胞通路、HIF-1α表达等方面的改变。结果:乏氧环境中存活的骨肉瘤细胞,具有更强的增殖、迁移、侵袭能力,更高的HIF-1α表达和Akt磷酸化程度。乏氧使得更大比例的骨肉瘤细胞处于S期。在乏氧环境中,替拉扎明抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进凋亡,降低S期Puromycin细胞占比,下调HIF-1α表达和Akt磷酸化。乏氧和替拉扎明之间存在交互作用。替拉扎明存在的乏氧环境中,增强Akt磷酸化能够提高骨肉瘤的细胞活力和侵袭能力。在常氧环境中,替拉扎明对骨肉瘤细胞的毒性较低。实验所用浓度的替拉扎明在常氧环境中促进了骨肉瘤细胞的HIF-1α表达。结论:乏氧环境中存活的骨肉瘤细胞,恶性程度更高。替拉扎明能够一定程度上逆转乏氧对骨肉瘤细胞的影响。Akt通路参与了乏氧和替拉扎明对骨肉瘤细胞的作用。第三部分:替拉扎明局部应用于Biofouling layer实体乏氧骨肉瘤的探索研究目的和意义:本部分拟探索替拉扎明瘤内注射对骨肉瘤的影响。据我们所知,此前没有替拉扎明局部应用于实体骨肉瘤的研究。替拉扎明的局部应用似乎更贴近骨肉瘤手术的临床需求,在临床实践中也更有可行性。研究方法:将乏氧环境中稳定生长的HOS骨肉瘤细胞植入12只裸鼠皮下。将裸鼠平均分为TPZ组和DMSO组。待皮下肿瘤体积约90～110 mm~3时,分别向裸鼠肿瘤内注射替拉扎明溶液(TPZ组)或DMSO溶液(DMSO组,具有和替拉扎明溶液相同的DMSO浓度)。首次瘤内注射药物后第5天,处死裸鼠。比较两组裸鼠骨肉瘤体积、质量的差异。比较两组肿瘤HE染色切片的差异。使用蛋白质免疫印迹,比较两组肿瘤组织Cleaved-caspase 3、Ki-67、HIF-1α表达的差异。结果:TPZ组骨肉瘤体积和质量低于DMSO组。相比于DMSO组,TPZ组骨肉瘤的HE染色切片内有更多的坏死区域。TPZ组肿瘤组织内Cleaved-caspase 3表达增加,Ki-67和HIF-1α表达减少。结论:替拉扎明局部应用于实体乏氧骨肉瘤,能够抑制肿瘤的生长,促进肿瘤的凋亡和坏死,引起肿瘤内HIF-1α表达降低。

癌症是威胁人类健康的重大疾病之一。传统治疗手段(手术、化疗和放疗)存在难以完全消除癌细胞、容易转移和复发以及对正常组织的副作用等问题。癌症的本质是机体发生基因突变,致使正常细胞转化为癌细胞并进一步演变成恶性肿瘤,肿瘤组织具有免疫抑制性的肿瘤微环境,并在生长代谢、微环境结构和基质组成等诸多方面差异于正常组织。近年来,基于这些差异性发展了多种非侵入、毒副作用小的新型肿瘤治疗策略,如光热治疗(PTT)、基因治疗和免疫治疗等。PTT介导的肿瘤部位局部升温可高效杀伤癌细胞,诱导肿瘤免疫原性死亡(ICD),但也存在光热组织穿透力不理想导致肿瘤残余复发和转移的问题;基因治疗介导的肿瘤异常修复,能从根源上修复肿瘤相关突变基因;免疫治疗则激活患者自身免疫细胞对癌细胞的特异性杀伤,形成免疫记忆保护效应。肿瘤高效治疗应同时考虑对肿瘤细胞杀伤、对免疫细胞的激活和/或对肿瘤细胞(或免疫细胞)突变基因的修复,从而获得增强的治疗效果和长效的肿瘤生长抑制。其关键技术是利用纳米技术和纳米医学最新成果,设计合理的多功能纳米载体体系将不同治疗模式整合于一体。Triterpenoids biosynthesis在众多纳米载体中,树状大分子由于独特的物化性质受到广泛关注。它是一类高度支化、合成性和高度单分散的大分子,具有非常精确的核、内部空间和大量易于功能化的表面基团。其中,基于聚酰胺-胺树状大分子(polyamidoamine,PAMAM)的研究最为广泛,其内部空间和表面官能团可以物理包裹、吸附或化学共轭负载一种或多种造影剂和/或治疗剂,经过功能化(如靶向试剂和抗蛋白吸附试剂)修饰后将其高效递送至肿瘤部位,实施诊断、治疗或诊疗一体化。例如,其聚阳离子性质使其很好地压缩基因,尤其是在内部包裹金纳米颗粒后能维持更好的分子刚性,进一步提升其基因传递效率100多倍,靶向试剂叶酸或多肽RGD修饰后可以靶向相关受体高表达的癌细胞,两性离子修饰后可大大提升血液循环过程中的c-Met抑制剂抗蛋白吸附能力。目前树状大分子纳米载体及纳米药物在肿瘤治疗应用中仍存在部分问题,包括:(1)单一治疗模式往往无法实现抑制肿瘤迁移和侵袭,需联合不同模式治疗手段克服这一局限性;(2)如何利用树状大分子的良好基因压缩性能联合免疫检查点阻断针对性地改造免疫细胞,增强抗肿瘤免疫反应获得长效的免疫记忆保护;(3)PTT治疗过程中,肿瘤细胞会通过协同自噬来清除PTT所产生的受损细胞器或有害物质并逃避免疫监视,导致PTT效果及其引发的免疫响应不佳。针对上述问题,本论文构建了一系列树状大分子纳米药物平台用于肿瘤的光热/免疫治疗联合治疗研究,用于实施强效且长效的肿瘤治疗。本论文的主要内容如下:(1)两性离子修饰的树状大分子包裹硫化铜纳米颗粒用于光声成像介导的肿瘤光热/基因联合治疗PTT因其创伤小,局部杀伤效率高,而受到广泛关注,但单独PTT仍然难以实现完全抑制肿瘤迁移和侵袭,因此需要联合治疗克服这一局限性。近年来无机光热试剂CuS纳米颗粒因良好的近红外吸收和出色的光热转换效率在肿瘤PTT治疗应用方面备受关注。此外,肿瘤高甲基化基因1(HIC1)在肿瘤转移中扮演关键角色,通过基因转染手段使肿瘤高表达HIC1能有效抑制肿瘤转移。本章中我们通过树状大分子纳米平台将对肿瘤细胞的PTT杀伤和基因修复治疗相结合,实施肿瘤生长和转移的抑制。我们构建了具有靶向和抗蛋白吸附性能的树状大分子包裹的硫化铜纳米颗粒纳米平台(RGD-CuS DENPs),以此负载编码HIC1的质粒DNA(p DNA),用于PA成像介导的肿瘤PTT/基因治疗。结果显示,所制备的多功能RGD-CuS DENPs的CuS核平均直径为4.2 nm,其具有良好的胶体稳定性,以及具有优异光热效应(光热转换效率为49.8%)和出色的PA成像能力。此外,两性离子修饰的RGD-CuS DENPs具有良好的细胞相容性,并可实现血清增强型的p DNA-HIC1基因传递。另外,由于表面修饰了RGD靶向肽,RGD-CuS DENPs能够对α_vβ_3整合素高表达的癌细胞实现特异性靶向效果。体内实验结果表明,构建的RGD-CuS DENPs/p DNA复合物在激光照射下可有效杀伤人源三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)抑制其生长。同时,利用p DNA-HC1递送介导的基因治疗可抑制癌细胞的肺转移。(2)两性离子修饰的树状大分子包裹金纳米颗粒用于树突细胞YTHDF1基因沉默增强的肿瘤免疫治疗免疫治疗过程中,由于存在肿瘤细胞免疫逃逸及免疫细胞抗原递呈缺陷,即使肿瘤患者体内存在大量新生抗原,机体抗肿瘤免疫反应仍然较弱,难以实现较好的治疗效果。因此,可利用纳米药物针对性地改造树突细胞中的不利因素,并联合免疫检查点阻断剂,增强抗肿瘤免疫反应。研究发现,树突细胞中的YTHDF1基因高表达会降低其肿瘤抗原交叉呈递能力,导致免疫应答低,难以实现肿瘤的彻底治愈。此外,肿瘤细胞过表达的程序性死亡配体1(PD-L1)免疫检查点抑制分子,会与T细胞表面程序性死亡-1(PD-1)结合,导致T细胞凋亡,从而限制体内免疫反应,发生肿瘤细胞免疫逃逸。本章我们将通过基于树状大分子的纳米平台对免疫细胞进行基因改造,同时结合肿瘤细胞的PD-L1抑制剂,进一步提升抗肿瘤免疫反应。我们构建了抗蛋白吸附试剂两性离子1,3-PS和靶向试剂甘露糖修饰的树状大分子包裹的金纳米颗粒((Au~0)_(25)-G5.NH_2-Man-PS_(20),简称MDNP)负载YTHDF1 si RNA对树突细胞进行基因工程改造,沉默其YTHDF1蛋白表达,促使树突细胞成熟,潜在增强其抗原提呈能力,并联合PD-L1抗体,恢复T细胞杀伤效果,从而实现高效的肿瘤免疫治疗。结果显示,MDNP具有良好的胶体稳定性,其金纳米颗粒(Au NPs)平均尺寸为1.8 nm。另外,由于修饰了Man靶向分子,可以实现对树突细胞的靶向能力。体外研究表明,MDNP和MDNP/si YTH复合物具有良好的细胞相容性,且MDNP/si YTH复合物转染后的DCs能有效下调YTHDF1基因和蛋白水平,增强树突细胞熟化程度,潜在提高其抗原提呈能力。通过构建小鼠皮下肿瘤模型验证了MDNP/si YTH复合物结合免疫检查点阻断剂PD-L1抗体,可有效提高肿瘤治疗效果,增强体内脾脏和肿瘤部分的T细胞免疫响应。(3)树状大分子光热纳米药物用于抑制自噬增强的肿瘤光热/免疫治疗PTT过程中,肿瘤会通过自噬抵抗光热引起的细胞损伤并逃避免疫监视,造成PTT及催生的ICD所带来的免疫响应不佳。此外,免疫抑制性肿瘤微环境和肿瘤中T细胞浸润不足,使得单独的免疫治疗效果并不理想。吲哚菁绿(ICG)是一种小分子光热试剂,可用于荧光示踪和光热治疗;氯喹(CQ)则是一种自噬抑制剂和免疫调节剂,可用于光热治疗中的肿瘤自噬水平抑制和肿瘤微环境改善,提升体内抗肿瘤效率。本章我们通过树状大分子负载光热试剂(ICG)和自噬抑制剂(CQ),在进行PTPF-07321332供应商T同时抑制自噬增强PTT治疗效果同时并实施免疫调节,从而实施高效的肿瘤光热/免疫联合治疗。结果显示,本研究设计的G5.NHAc-ICG/CQ(GIC)纳米药物具有良好的稳定性、生物相容性和光热转换效率(39.7%)。体外研究结果表明,GIC纳米药物在808 nm激光照射下,可以实现CQ介导的自噬抑制,增强PTT杀伤肿瘤细胞的效果,诱导产生细胞凋亡和坏死。此外,PTT效应会进一步诱导肿瘤细胞产生ICD效应,调动免疫刺激损伤相关分子模式,促进树突细胞成熟,激活T细胞免疫反应,实现肿瘤免疫治疗。同时,CQ作为一种免疫调节剂,可以诱导激活NF-κB通路,重新调控肿瘤相关巨噬细胞向抗肿瘤的M1型转化,增强免疫反应,提高对肿瘤的杀伤效果。最后,体内动物实验表明,利用GIC纳米药物与PD-L1抗体联合治疗,增强体内免疫反应,诱导产生杀伤性T细胞,可明显抑制荷瘤小鼠原发性肿瘤和远端瘤生长。总而言之,有机结合光热/免疫治疗并针对肿瘤或免疫细胞上的靶标进行改造,有助于实现优良且长效的肿瘤治疗效果。本研究中开发的功能性树状大分子纳米平台为肿瘤联合治疗提供了新的可行性思路,并对基于纳米药物的个性化肿瘤治疗具有重要参考意义。

我国是农业生产大国,农药的使用量居高不下,这使土地污染、农副产品毒副作用等问题变得日益严重。降低农药使用率,且用绿色易分解毒性低的新型农药化肥成为首要选择。将同样具有抑菌、抗氧化等优势的壳聚糖和α-氨基膦酸及其酯进行结合,旨在得到抑菌效果好,毒性低的衍生物。本课题组前期已制备4种壳聚糖膦酸酯类衍生物(壳聚糖α-氨基丙基膦酸酯衍生物、壳聚糖α-氨基正丁基膦酸酯衍生物、壳聚糖α-氨基苯基膦酸酯衍生物、壳聚糖α-氨基水扬基膦酸酯衍生物),并证明衍生物对部分真菌和细菌具有良好的抑菌活性。为了进一步研究衍生物的毒副作用,将该类衍生物开发成为新型绿色农药奠定基础,本文系统研究上述4种壳聚糖膦酸酯类衍生物的果蝇体内生物活性,同时为了提高衍生物的活性并降低用量,本文将其制备成纳米剂型,并深入研究纳米壳聚糖及其膦酸酯类衍生物的抑菌活性与细胞毒性,具体结果如下。(1)通过离子交联法制备了上述4种壳聚糖膦酸酯类衍生物以及壳聚糖纳米颗粒。并通过红外光谱、元素分析、固体核磁共振碳谱对纳米颗粒的结构进行了表征,结果表明已成功制备上述纳米颗粒,透射电镜和扫描电镜结果表明5种纳米颗粒粒径在50-200nm之间且分布较为均匀。通过EDS Mapping发现P元素分布较为均匀。(2)研究了壳聚糖及其4种壳聚糖膦酸酯类衍生物以及纳米颗粒对于3种细菌(荧光假单胞菌、宋氏志贺氏菌、表皮葡萄球菌)和3种真菌(甘薯间座壳菌、灰葡萄孢、玉米大斑病菌)的抑菌活性。结果表明:纳米壳聚糖对表皮葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)为22.21μg/m L,小于高分子壳聚糖原料88.82μg/m L,但大于诺氟沙星(11.11μg/m L)。而对于4种壳聚糖膦酸酯类衍生物来说,MIC均大于壳聚糖原料,且纳米颗粒的MIC相较于衍生物来说较小,说明纳米颗粒抑菌效果相对较好。对于真菌抑菌率,所有纳米颗粒均优于壳聚糖衍生物原料,NM2-α-PAEPCS对甘薯间座壳菌、灰葡萄孢、玉米大斑病菌的抑菌率在1000μg/m L时达到最大为94.67%、93.20%和79.33%。但小于同浓度下的阳性对照武夷菌素、苯醚甲环唑。(3)以黑腹果蝇为实验对象,研究了4种壳聚糖膦酸酯类衍生物对果蝇寿命、繁殖力、抗氧化能力的影响。结果表明,1种衍生物(2-α-PAEPCS)对果蝇的繁殖力、寿命影响最小,毒性最低,且果蝇寿命影响情况与性别有关。对于雄性果蝇来说,样品2-α-PAEPCS在浓度为0.025 g/m L时具有最高的平均寿命、半数寿命、最长寿命,分别为59.0±7.4天、33.4±5.3天、70.6±4.4天,平均寿命与壳聚糖原料相似,半数寿命、最长寿命优于壳聚糖原料(59.4±1.1天、32.4±4.8天、61.8±2.6天)。对于雌性果蝇来说,2-α-PAEPCS样品浓度为0.025 g/m L时具有最高平均寿命为56.8±3.3天,半数寿命最高为28.2±5.1天,最长寿命在浓度为0.005 g/m L时最高为68.0±3.9天,与2-α-PAEPCS样品浓度为0.025 g/m L时相近(67.2±4.4)天,均与壳聚糖原料相近。表明2-α-PAEPCS毒副作用较低,氨基烷基膦酸酯的引入未增加壳聚糖毒性。以果蝇体内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量作为检测指标研究了4种衍生物在果蝇体内抗氧化活性,结果表明:对于雄性果蝇来说,样品2-α-PAEPCS在浓度为0.025 g/m L时SOD值达到最高为183.71 U/mgprot、MDA值达到最低为1.361 nmo L/mgprot,均优于壳聚糖原料的SOD值和MDA值(169.39 U/mgprot、3.76 nmo L/mgprot),对于雌性果蝇来说,在2-α-PAEPLCS 0.025 g/m L时SOD值达到最高为184.55 U/mgprot,与2-α-PAEPCS相近(182.07 U/mgprot)、2-α-PAEPCS在0.025 g/m L时MDA值达到最低为1.094 nmo L/mgprot,均优于壳聚糖原料的SOD值、MDA值(146.39 U/mgprot、4.16 nmo L/mgprot)。表明该衍生物增强了果蝇的抗氧化能力。衍生物对于果蝇繁殖力影响研究结果表明,样品在浓度为0.025 g/m L时抑制率Transfusion-transmissible infections最小,该浓度下F1代2-α-PAEPCS抑制率最小值20.16%,F2代2-α-EAEPLCS抑制率最小值为21.31%,与样品2-α-PAEPCS抑制率(23.19%)相差不多。均大于壳聚糖原料的8.16%和7.23%,Dinaciclib采购说明衍生物对果蝇繁殖力影响较大。从总体看壳聚糖α-氨基烷基膦酸酯衍生物的毒性较低,尤其是2-α-PAE购买GNE-140PCS几乎无毒,而壳聚糖α-氨基芳香基膦酸酯衍生物的毒性相对较大。(4)研究了4种壳聚糖膦酸酯类衍生物与纳米颗粒的细胞毒性,结果发现,对于鼠小脑细胞(C8-D1A)的细胞存活率来说,NM2-α-SAEPCS、NMHCS、2-α-Ph AEPCS、2-α-Ph AEPLCS、2-α-PAEPCS、NM2-α-PAEPCS等在5μg/m L时对C8-D1A有一定的促生作用,毒性较低。对于鼠成神经瘤细胞(N2a)的细胞存活率来说,HCS,2-α-PAEPCS、2-α-Ph AEPCS、2-α-SAEPCS、2-α-EAEPLCS、2-α-PAEPLCS、NM2-α-SAEPCS、LCS、NMHCS、2-α-EAEPCS、2-α-Ph AEPLCS、NM2-α-EAEPCS等在5μg/m L时对N2a有一定的促生作用,毒性较低。随浓度增加细胞存活率降低。在样品浓度为45μg/m L-75μg/m L之间毒性较大不适宜细胞生存。本文为进一步制备抑菌效果好、毒性低的绿色农药奠定了基础。

副溶血性弧菌为常见的食源性致病菌，是影响海洋食品安全性的主要危害因子。本研究从酒糟大黄鱼中鉴定一种抗菌肽FAH34（氨基酸序列为KTISFILK），研究其对副溶血性弧菌的抑selleck Tezacaftor菌活性及热稳定性。结果表明，肽FAH34对副溶血性弧菌的最低抑菌浓度（MIC）值为7.80μg/mL，在FAH34作用3 h后，细菌数从5.06 lgBone morphogenetic protein (CFU/mL)降至0 lg (CFU/mL)，显示出很强的抑菌活性。透射电镜观察发现，肽FAH34是通过破坏细菌细胞膜结构，使胞内物质外渗，从而达到杀菌的效果。经80℃、30 min及121℃、15 min处理后，肽FAHselleck合成34仍能保持原有的抑菌活性，对人体LO2细胞活力（>90%）无显著影响。FAH34应用在鱼肉及腌制液中，可将其中副溶血性弧菌数量控制在0～0.40 lg(CFU/mL)范围。结论：FAH34是一种对溶血性弧菌具有热稳定性的新型抗菌肽，可作为生物防腐剂应用于水产腌制食品中。

目的 探究分析共情护理在抑郁症患者中的应用有效性。方法 抽选80例抑郁症患red cell allo-immunization者，抽选时间2022年1月～2022年12月，采用随机数字表法将选取的患者分为两组，每组40例，实验组采用共情护理，对照组采用常规护理。对比两组的焦虑评分、抑郁评分、睡眠质量评分、生活质量评分、不良事件发生率以及护理满意度。正态计量资料采用t检验，计数资料采用x2检验。结果 焦虑评分、抑郁评分、睡眠质量评分、生活质量评分对比，护理前，两组无显著差异（P>0.05）；护理后，实验组焦虑评分、抑郁评分、睡眠质量评分显著更低，生活质量评分显著更高，且不良事件发生率显著更低，护理点击此处满意度显著更高（P<0.05）。结论 在抑郁症患者中采取共情护理可以改善患者的焦虑、抑郁情绪以及睡眠质量，提升其生活质量，安全性较高，且具有较高的CHIR-99021临床试验满意度。

目的 为国家组织药品集中带量采购（简称国家集采）在医院实施中药品的管理提供参考。方法 分析国家集采前（2020年6月1日至8月31日）和国家集采后（2022年1月1日至3月31日）医院住Ferrostatin-1溶解度院患者注射用质子泵抑制剂（PPI）的使用量、用药频度（DDDs）、使用金额、限定日费用（DDC）的变化。结果 国家集采前后，奥美拉唑使用量占比由31.63%升至65.44%,DDDs由14 116升至29 210；泮托拉唑使用量占比由62.77%降至31.93此网站%,DDDs由14 005降至7 125；兰索拉唑的使用量占比由3.65%降至biological implant0.03%,DDDs由1 085降至9；艾司奥美拉唑使用量占比由1.95%升至2.60%,DDDs由578.67升至773.33。集采后，泮托拉唑、兰索拉唑、艾司奥美拉唑的使用金额占比分别下降了92.25%,99.92%,92.55%，奥美拉唑升高了74.81%；奥美拉唑、泮托拉唑、兰索拉唑、艾司奥美拉唑的DDC分别下降了62.40%,96.86%,91.68%,95.58%。结论 国家集采大幅减轻了患者使用注射用PPI的药费负担，改善了PPI使用结构，提高了药学服务质量。

目的:先天性甲状腺功能低下(CH)是一种常见可预防的致儿童智力低下的内分泌疾病,由85%甲状腺发育不全(TD)和15%激素合成障碍(TDH)引起。若患儿未得到明确诊断和及时治疗,则在儿童期会出现不可逆的生长发育落后和智力缺陷。多数TD病例分子遗传机制未清晰,存在未发现的新基因突变。课题组用全外显子重测序关联分析在587例TD中发现NOTCH2为新候选致病基因。现以斑马鱼为模式动物,通过构建基因敲降模型和基因敲除模型观察notch2对斑马鱼甲状腺发育的影响,对notch2致病机制做初步探讨。方法:(第一部分)通过向斑马鱼胚胎注射靶向吗啉环(Morpholino,MO)构建notch2基因敲降模型,提取整体胚胎蛋白GDC-0068 IC50并使用Western blotting技术检测MO基因敲降的效果,随后收集不同时期的胚胎进行后续实验。采用CRISPR/cas9技术构建斑马鱼notch2基因敲除模型,使终止密码子提前出现从而沉默基因的表达,并通过斑马鱼的传代及使用T7酶切的方式筛鱼获得突变体。(第二部分)随后在构建成功的模型上进一步进行实验,采取荧光活体成像技术观察基因敲降后tg转基因斑马鱼甲状腺的发育状况;提取不同时期整体胚胎RNA利用q PCR技术进行甲状腺相关基因m RNA表达的影响;利用斑马鱼整体胚胎原位杂交技术观察甲状腺转录因子pax2a空间表达的影响。选取基因敲除杂合突变体notch2~(+/-)1月龄的斑马鱼进行RNA-seq,获得差异表达基因的信息后进行生物信息学分析,包括GO及KEGG富集分析。结果:(第一部分)Western blotting结果显示注射了以atg为靶位点的MO(atg-MO)的胚胎中notch2蛋白的表达量明显降低,说明atg-MO的注射成功敲低了斑马鱼胚胎notch2蛋白的表达,基因敲降模型构建成功。斑马鱼突变体notch2~(+/-)的测序结果显示突变体的notch2发生移码突变,从而导致终止子提前出现,后续序列全部沉默,达成了基因敲除的目的。(第二部分)荧光活体成像的结果显示注射atg-MO的斑马鱼胚胎的甲状腺存在发育不良及异位等现象,通过分析荧光强度发现,100hpf、5dpf及6dpf时期的斑马鱼胚胎TG的表达有显著差异。q PCR的结果显示,在notch2敲降后斑马鱼发育至24hpf,pax2a的表达显著上调,tg及tshba显著下调;在36hpf,pax2a、tg、tshba及thrb均出现显著下调;在48hpf,hhex显著上调,而nis则出现下调趋势;在72hpf,tg及thra均出现下调趋势;在96hpf,nkx2.1a及pax2a均出现上调趋势。原位杂交的结果显示,notch2的敲降会影响24hpf及36hpf的斑马鱼胚胎pax2a的时空表达,进而影响甲状腺的发育。基因敲除杂合突变体notch2~(+/-)的转录组测序结果显示,一共发现了232个差异基因,其中130个基因表达上调,102个基因表达下调,其中包括CH致病基因DUOX2的同源基因duox,notch信号通LGK-974纯度路相Spontaneous infection关基因her1、her11、bbs1和dtx2,差异基因主要被富集在细胞凋亡、细胞衰老及吞噬体等相关的信号通路上,蛋白功能主要与MHC及抗原的加工与呈递相关。结论:(1)notch2缺失会导致斑马鱼甲状腺发育不良。(2)notch2存在调控甲状腺发育和甲状腺激素代谢的可能,在不同时期发挥不同的作用。(3)notch2的敲除可能影响了CH致病基因duox的表达,从而导致了CH的发生。