Achr receptor

由细胞内细菌引起的反复感染会导致严重的并发症。然而药物联用作为治疗细胞内细菌感染的常用策略,在具体的治疗过程中由于药物差异化代谢、吸收及在细胞水平不同的内化途径和亚细胞器驻留,极大地阻碍了药物的联合治疗效果。在此,本研究提出了一种联用药物在细胞内协同杀菌的策略。该策略通过使用具备巨噬细胞/细胞内细菌双靶向功能的药物递送系统(DDS)实现现场递送药物组合,最终通过细胞内的药物协同效应高效清除细胞内细菌感染。主要内容如下:(1)采用PET-RAFT聚合技术首先引入疏水核心α-N-丙烯酰基-苯丙氨酸(表示为F)、接着通过经典共聚程序成功引入亲水组分β-N-丙烯酰-α-Boc-D-氨基丙氨酸(表示为A_(Boc))以及2-(2′,3′,4′,6′-四-O-乙酰基-α-D-甘露糖基)丙烯酸乙酯(表示为MO_(Ac)),通过共定位实验测试表明DDS具备巨噬细胞/细胞内细菌双靶向功能。(2)在细胞外,万古霉素和姜黄素之间存在协同杀菌效应。万古霉素和姜黄素可以以预设剂量成功包封在DDS中,并以均匀和长期的模式释放。与此同时细胞外抗菌结果证明封装万古霉素和姜黄素的NPs由于药物协同效应表现出最好的细胞外抗菌效果。(3)通过细胞内细菌模型评价结果发现,DDS通过能量依赖的甘露糖受体配体介导的特异性识别的大胞饮方式快速内化进入巨噬细胞,PS-341采购不仅统一了药物内化途径,而且实现巨噬细胞快速内化效果。通过双靶向能力将药物有效递送至细菌感染部Cloning and Expression位,实现高效的细胞内药物协同作用。与其他对照组相比,(Van+Cur)@F(AM)NPs表现出最好的细胞内杀菌效果。此外通过小鼠腹腔感染模型评价发现,DDS能够通过调节促炎症因子进而调节身体免疫,最终进一步提高MLN4924抑制剂了细胞内细菌协同治疗效果。

目的：探讨同步放化疗联合复方苦参注射液用于鼻咽癌的近期疗效及对免疫因子、巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)和可溶性标准CD44(sCD44)水平的影响。方法：选择2019年3月至2022年3月该院收治的鼻咽癌患者60例，采用随机数字表法按1∶1比例随机分为观察组(n=30)与对照组(n=30)。对照组患者采用同步放化疗治疗，观察组患者在同步放Mirdametinib纯度化疗的基础上联合应用复方苦参注射液。两组患者均以21 d为1个周期，连续治疗3个周期。比较两组患者的近期疗效、不良反应，治疗前后卡诺夫斯凯计分(KPS)、Th1细胞因子、Th2细胞因子、血清MIP-3α和sCD44水平变化。结果：观察组鼻咽癌患者的总有效率为70.00%(21/30),高于对照组的43.33%(13/30),差异有统计学意义(P<0.selleck产品05)。两组鼻咽癌患者治疗后的KPS评分高于治疗前，观察组鼻咽癌患者治疗后的KPS评分高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。两组鼻咽癌患者治疗后的血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水平低于治疗前，而白细胞介素(IL)2水平高于治疗前；观察组鼻咽癌患者治疗后的血清TNF-α、IFN-γ水平低于对照组，而IL-2水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。两组鼻咽癌患者治疗后的血清IL-4、IL-6和IL-10水平低于治疗前，且观察组患者低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。两组鼻咽癌患者治疗后的血清MIP-3α、sCD44水平低于治疗前，且观察组患者低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组鼻咽癌患者肝肾功能异常、骨髓抑制、胃肠道反应和乏力的发生率均低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：同步放化疗联合复方苦参注射治疗鼻咽癌的近期疗效良好STI sexually transmitted infection，可调节免疫因子水平，降低血清MIP-3α和sCD44水平，且不良反应少。

目的 基于网络药理学和体内实验探讨抗衰老片抗衰老的作用机制。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）筛选抗衰老片中组方药材的主要化学成分及其靶点，并通过文献检索、Pubchem对抗衰老片中药材的主要成分进行补充，经SwissTargetPrediction数据库预测靶点；通过GeneCards、OMIM数据库获取衰老相关靶点；通过Venny2.1.0平台获得抗衰老片成分与衰老的共同靶点；基于STRING数据库和Cytoscape 3.8.0软件构建https://www.selleck.cn/products/blz945.html药物与疾病共同靶点的蛋白质相互作用网络（PPI）；基于R语言进行基因本体（GO）生物功能分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。以秀丽隐杆线虫为实验对象，观察抗衰老片对N2野生型秀丽隐杆线虫寿命及百草枯诱导的N2野生型线虫及突变体CB1370、CF1038、MQ1333、MQ887、TJ1052寿命的影响，探究抗衰老片抗衰老的作用及潜在的作用机制。结果 筛选出抗衰老片221个活性成分和1 232个预测靶点，衰老相关靶点12 081个Dolutegravir，抗衰老片成分和疾病的共同靶点1 020个。KEGG富集分析结果主要涉及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、晚期糖基化终末产物/晚期糖基化终末产物受体（AGE/RAGE）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等。线虫实验结果表明，抗衰老片可延长正常情况下及百草枯诱导下的N2野生型秀丽隐杆线虫的寿命，提高秀丽隐杆线虫对百草枯的耐性；与相应各对照组相比，抗衰老片无法延长突变体TJ1052和CF1038在氧化应激下的寿命genetic marker，但突变体CB1370、MQ1333和MQ887在氧化应激下的寿命可被延长。结论 抗衰老片对秀丽隐杆线虫具有延长寿命的作用，其潜在的机制可能依赖于PI3K信号通路和叉头转录因子（FOXO）信号通路，而不依赖于胰岛素受体信号通路和线粒体相关信号通路。

目的:评估临床常用的几种血小板激Biomechanics Level of evidence活剂，即凝血酶、ADP和CaCl_2活化的富血小板血浆(PRP)上清对巨噬细胞表型的影响并探究储存时间对PRP功能的影响。方法:采用含不同激活剂或不同储存时间的活化PRP上清的培养基体外培养人单核衍生RP56976临床试验巨噬细胞，流式细胞仪检测巨噬细胞表selleck合成面标记分子的表达，ELISA方法检测PRP上清中的生长因子浓度。结果:培养24 h后，凝血酶和CaCl_2活化PRP上清刺激的巨噬细胞CD86的表达水平均明显高于PRP组(P<0.05),且CaCl_2活化PRP上清增加了巨噬细胞CD163的表达。而对于不同激活剂组比较，CaCl_2活化组的巨噬细胞CD163的表达明显高于凝血酶和ADP组(P<0.05)。ELISA结果显示，在-80℃储存大于20个月和10-20个月的PRP在CaCl_2活化后，其上清中FGF(P<0.001)和EGF(P<0.05)的浓度明显高于储存小于10个月组，且两组上清处理的巨噬细胞CD86(P<0.01)、CD163(P<0.001)和CD206(P<0.001)表达均明显升高。结论:不同激活剂活化的PRP对巨噬细胞的表型影响不同。同时，储存时间也会影响PRP的生长因子浓度和作用效果。

穿孔素（perforin, PFN）是存在于细胞毒性细胞[又称杀伤细胞，包括自然杀伤（natural killer, NK）细胞、细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells, CTL）等]的糖蛋白，颗粒酶（granzyme, Gzm）B是表达于杀伤细胞的小分子蛋白质。PFN和Gzm B贮存在细胞毒性细胞的胞浆颗粒中，在与靶细胞接触后通过胞吐而释放。作为细胞毒性细获悉更多胞所具有的2类重要效应分子，PFN和Gzm B在各种类型肝损伤免疫反应中发挥重要作用。在造成肝损伤的众多原因中，对乙型肝炎所致肝损伤研究较多。HBV复制与宿主抗病毒免疫的相互作用决定了HBCH-223191作用V感染的最终结果，PFN和Gzm B是病毒感染的病原清除和靶细胞凋musculoskeletal infection (MSKI)亡重要的介导物质，在HBV感染的不同阶段，PFN和Gzm B表达水平呈现不同特点：在急性HBV感染期，CTL高表达PFN、Gzm B；在慢性HBV感染期，NK细胞、CTL表达PFN、Gzm B呈下调趋势；在重症乙型肝炎阶段，CTL表达PFN、Gzm B的上调可能参与HBV感染重症化。本文主要对HBV感染免疫阶段PFN和Gzm B在不同免疫状态中具体作用特点作一介绍。

光selleck产品动力治疗(PDT)是利用光敏剂(PS)在适当光源激发下，与氧气等MCC950分子发生反应，生成具有细胞毒性的活性氧物质(ROS),进而杀死肿瘤细胞。与传统治疗方法相比，光动力治疗具有副作用小、精准治疗、毒性低、美容效果好等众多优点，是近年来备受关注的癌症治疗方法。然而光动力治疗具有严重的氧依赖性质，会导致组织中的氧气浓度迅速下降，而肿瘤部位本身因无限增殖而处于乏氧状态，这会严重影响光动力治疗效果。另外，肿瘤部位的内源还原性物质会升高，进而灭活PDT所产生的活性氧物质，导致疗效降低。因此，单一的光动力治疗效果并不理想。为了解决该问题，将光敏剂Ce6通过介孔二氧化硅共水解的方式装载到上转换纳米颗粒表面，在808 nm光照射下实现PDT。随后包裹聚多巴胺，在增加生物相容性的同时，financing of medical infrastructure还能利用其自身的光热性质，进行光热治疗。最终通过光热治疗的辅助成功提高了上转换光动力治疗的治疗效果。

目的 探讨低温等离子消融联合平阳霉素及生理盐水治疗咽喉部巨大血管瘤的临床效果。方法 回顾性分析2013年4月至2022年1月在郑州大学第一附属医院咽喉头颈外科就诊的78例咽喉部巨大血管瘤患者的临床资料，其中接受平阳霉素注射配合低温等离子消融治疗的为对照组，接受低温等离子消融联合平阳霉素及生理盐水注射治疗的为观察组，每组39例。统计分析两组患者咽喉部血管瘤的治疗效果，并观察治疗后的不良反应发生情况。结果 随访1 a,观察组的治疗有效率为100.00%Topical antibiotics,对照组的治疗有效率89.74%,差异有统计学意义(P<0.05),观察组手术时间、切口愈合Dibutyryl-cAMP细胞培养时间短于对照组，术中出血量少于对照组(P<0.05)。治疗期间两组肺部CT、肝肾功能、凝血功能均无明显异常，观察组的不良反应发生率为5.13%,对照组不良反应发生率为20.51%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 低Staurosporine化学结构温等离子联合平阳霉素及生理盐水局部注射治疗咽喉部血管瘤的效果确切，能够减少手术次数，安全性高。

喜树(Camptotheca acuminata Decne)是蓝果树科、喜树属植物,是中国特有的多年生高大落叶hepatic cirrhosis乔木。喜树碱(Camptothecin,CPT)和10-羟基喜树碱(10-Hydroxycamp tothecin,10-HCPT/HCPT)是喜树中所含有的吲哚类生物碱。作为具有高效抗癌作用的天然成分,CPT和HCPT具有广谱的抗癌效果,在临床上用于治疗原发性肝癌、胃癌、肺癌、直肠癌、膀胱癌等。CPT和HCPT难溶于水,生物利用度低,导致药物分子在体内循环过程中不稳定,提取过程耗时费力,操作技术冗长,需要大量溶剂,最终目标分子在连续高温下热分解,对CPT和HCPT的大规模生产带来了很大的困难。本研究选取易于储藏的喜树种子作为提取原材料,建立一种现代提取技术与绿色溶剂相结合、操作简单、效率高、能耗低的绿色高效提取方法。在此基础上,制备了具有“归巢效应”的仿生给药体系,并评价其体内外抗癌活性,具体研究结果如下:(1)采用超高压(UHP)结合十二烷基磺酸钠(SLS)水溶液胶束介质同时提取喜树种子中CPT和HCPT两种难溶生物碱。通过单因素与响应面结合法获得CPT与HCPT的最佳提取工艺:SLS的浓度是60 mg/m L,料液比为1:25,保压时间为3.9 min,提取压力为110 MPa,CPT和HCPT的提取率分别为82.68±1.2%和89.02±1.2%。经脱色,固液萃取,柱层析,反溶剂重结晶纯化后CPT和HCPT的纯度分别为94.51±0.22%和96.76±0.29%。研究表明此提取方法稳定性好,重复性高。(2)超高压提取(UHPE)与索氏提取、乙醇匀浆提取、微波提取和超声提取等传统提取方法在提取两种难溶生物碱时的能耗、提取率及提取机制研究。结果显示:UHPE具有提取效率高能耗低的特点。UHPE的提取率与索氏提取、乙醇匀浆提取、微波提取以及超声提取法的提取率相当,但能耗最低,单位能耗仅为4.68×10~3 J/mg(以提取CPT和HCPT总量为计算基准),并显著缩短了提取时间。索氏提取和乙醇匀浆提取的单位能耗分别为3.29×10~6 J/mg和3.24×10~6 J/mg,微波提取和超声提取的单位能耗分别为1.09×10~6 J/mg和1.07×10~6 J/mg。对密度泛函理论(DFT)和传质动力学的研究验证了超高压结合胶束介质提取的机理,SLS与CPT和HCPT通过分子间氢键和静电作用力结合成超分子折叠成胶束从而将喜树种子中CPT和HCPT高效的提取Bucladesine小鼠出来,作用力的结合增加了目标成分在混合体系中的溶解度。从植物组织中提取目标活性成分由快速洗涤和缓慢扩散两个同时进行的过程组成,高压高效破碎喜树种子细胞的亚结构,活性成分从胚乳中快速释放。(3)将羟基喜树碱(HCPT)与白芨多糖(BSP)通过丁二酸酐化学偶联,制备得到的前药胶束外部包被肿瘤细胞膜脂质体杂化仿生外壳,最终得到仿生给药体系(T-Lipo-HCPT-BSP)。通过红外光谱(FTIR),核磁共振氢谱(~1HNMR),X射线衍射(XRD),差示扫描量热(DSC)和热重(TG)以及紫外分光光度计(UV)等表征,证明HCPT和BSP成功合成。对不同配比的HCPT和BSP进行反应,得到的样品测其临界胶束浓度分别为0.004(6:1)、0.008(5:1)、0.063(4:1)、0.080(3:1)、0.360(2:1)、0.507(1:1)、0.725(0.5:1)和1.212 mg/m L(0.1:1),根据载药量和得率的优化,最终选择HCPT:BSP=3:1为最佳的合成比例。通过动态光散射(DLS)、Zeta电位和扫描电子显微镜(SEM)的表征,证实所制备的前药胶束纳米粒子的粒径均一,形貌良好,平均粒径为210±2.3 nm。同时在前药胶束外部包被肿瘤细胞膜脂质体杂化仿生外壳,选择载药量高,得率高,CMC为0.080 mg/m L(3:1)的前药胶束进行肿瘤细胞膜脂质体杂化膜的包被,通过透射电子显微镜(TEM)和凝胶电泳(SDS-PAGE)的表征证明仿生外壳的成功包被。(4)T-Lipo-HCPT-BSP在生理环境下的PBS缓冲液中的稳定性及溶血性实验,表明了T-Lipo-HCPT-BSP的静脉注射安全性。体外释放及细胞摄取实验进一步证明了T-Lipo-HCPT-BSP可以在肿瘤环境条件下释放和积累,并通过不同方式进入细胞发挥抑制肿瘤细胞血管生成作用从而抑制肿瘤生长。在生理环境下的PBS缓冲溶液中,纳米粒子未出现明显的团聚现象,粒子的大小趋于稳定,并未出现溶血现象,由此证明T-Lipo-HCPT-BSP可实现静脉注射的方式给药。HCPT-BSP和T-Lipo-HCPT-BSP可以通过网格蛋白、小窝蛋白和能量消耗介导的细胞内吞途径被摄取,从而进入肠道上皮细胞,T-Lipo-HCPT-BSP由于粒径的增大部分粒子也可通过巨胞饮的方式进入细胞。鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验发现BSP、HCPT、HCPT-BSP和T-Lipo-HCPT-BSP均具有抑制血管生成的作用,并且协同给药的效果大于单独给药,T-Lipo-HCPT-BSP组血管普遍变细,血管形态异常,未生成完整的血管脉络,证明了HCPT与BSP协同作用在高效抑制肿瘤生长的上的潜能。T-Lipo-HCPT-BSP在不同的p H缓冲液中释放的药物含量不同,在模拟肿瘤部位的酸性环境中药物的累积释放量最高120 h达到84.67%,T-Lipo-HCPT-BSP的药物累计释放量比HCPT-BSP组更高,这也在Caco-2细胞内化实验证明中得到印证,在HCPT-BSP和T-Lipo-HCPT-BSP中检测到平均荧光强度在1 h和4 h时都远高于游离的HCPT,其中包被仿生细胞膜的前药T-Lipo-HCPT-BSP更易于被细胞摄取,并呈现高度的时间依赖性。这主要是由于T-Lipo-HCPT-BSP表现出良好的表观渗透系数。与游离的HCPT相比,HCPT-BSP和T-Lipo-HCPT-BSP的表观渗透系数分别为原药的4.15倍和8.61倍。(5)考察HCPT-BSP以及T-Lipo-HCPT-BSP在体内外的抗肿瘤效果。通过体外的细胞以及体内小鼠活体实验分别验证了T-Lipo-HCPT-BSP发挥细胞毒性,促进细胞凋亡,抑制细胞周期,阻止细胞迁移以及靶向肿瘤部位抑制荷瘤小鼠肿瘤生长的能力。HCPT-BSP和T-Lipo-HCPT-BSP组在体外对LLC细胞和Caco-2细胞均呈现出高于原药HCPT组的细胞毒性,并且由于包被的LLC细胞的同源细胞膜,T-Lipo-HCPT-BSP对LLC的细胞毒性远大于对Caco-2细胞的细胞毒性。细胞毒性作用的增强也进一步说明LLC细胞对T-Lipo-HCPT-BSP有较好的摄取作用,使药物在细胞中达到有效的积累。此外HCPT作为一种周期特异性药物,细胞周期实验看出高剂量T-Lipo-HCPT-BSP治疗组可以使LLC细胞阻滞在S期43.01±2.1%,阻滞在G_2/M3-Methyladenine纯度期10.27±2.6%,从而诱导其凋亡。T-Lipo-HCPT-BSP对LLC细胞的迁移能力有明显的抑制作用,与空白对照组相比(以100%的细胞迁移率计算),100μg/m L的T-Lipo-HCPT-BSP细胞迁移率仅为9.26%。另外,在流式细胞仪对细胞凋亡的考察中进一步证明了T-Lipo-HCPT-BSP诱导细胞凋亡的能力,在细胞与药物共同孵育36 h后,与HCPT原药的晚期凋亡率相比(45.03%),T-Lipo-HCPT-BSP给药组的细胞晚期凋亡率高达95.68%。以上细胞实验结果也在荷瘤小鼠的近红外荧光分布以及荷瘤小鼠的治疗实验中得到体现,证明了T-Lipo-BSP-HCPT能更好的靶向肿瘤部位,克服化疗中肿瘤药物的多药耐药(MDR)性,然后在肿瘤部位分布和积累。通过21天的治疗,与空白生理盐水组相比,T-Lipo-HCPT-BSP/H组荷瘤小鼠的肿瘤抑制率高达89.9%,并且治疗效果优于HCPT原药组和HCPT-BSP组。H&E切片染色实验结果可以看出高剂量组在达到较高抗癌活性的同时,对荷瘤小鼠的内脏组织没有明显的毒性,具有安全性,低毒性的特点。综合以上实验结果,可发挥协同给药作用的T-Lipo-HCPT-BSP作为一种具有“归巢效应”的仿生给药体系,具有很高的应用前景和临床价值。

老黄酶(Old Yellow Enzyme,OYE)属于含有核黄素单核苷酸(FMN)的氧化还原酶家族(EC 1.6.99.1),该酶天然反应涉及到Cr(VI)的还原,而谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)被证实能够有效修复污染土壤中的重金属,但该菌属的老黄酶从未被探索过,因此研究该菌属的老黄酶具有重要意义。此外,老黄酶具有不对称还原C=C键的烯烃还原酶活性,可以在水基介质和温和条件下生物催化柠檬醛生产香茅醛,但该类酶普遍存在催化活性低、稳定性较差等问题,其应用受到限制。本寻找更多研究在谷氨酸棒杆菌ATCC 13032中首次鉴定出一种具有六价铬还原酶活性以及烯烃还原酶活性的老黄酶(Cg OYE),通过半理性设计成功提高了该酶对底物Cr O_3的六价铬还原酶活性以及对底物柠檬醛的烯烃还原酶活性,进行了六价铬还原和不对称还原C=C键获得(R)-香茅醛或(S)-香茅醛的应用。具体研究内容如下:(1)将来源于C.glutamicum的老黄酶编码序列(Coding sequence,CDS)在E.coli BLPF-6463922采购21/p XMJ-19上克隆表达,以Cr O_3为底物进行酶学性质的检测,结果显示Cg OYE的比酶活为6.5 U·mg~(-1),最适温度为45℃、最适p H为7.5,温度在40-50℃和p H在7.0-7.5范围内具有较好的稳定性;(2)针对Cg OYE六价铬还原酶活性低、稳定性差等问题。以Cr O_3作为底物,通过分子动力学(MD)模拟,预测影响Cg OYE六价铬还原酶活性的相关位点。采用丙氨酸扫描突变以及饱和诱变方法,成功筛选出一株正向突变体I81G。该突变体比酶活为18.0 U·mg~(-1),相比于野生型比酶活提高了2.77倍,其热稳定性和p H耐受性得到改善。将该突变体在大肠杆菌中外源表达,并应用于六价铬的还原,反应48 h后E.coli BL21/p XMJ-19-Cg OYE(对照组)的Cr(VI)还原率为38.1%,而E.coli BL21/p XMJ-19_(I81G)将Cr(VI)全部还原成Cr(III),Cr(VI)还原率是对照组的2.62倍,菌体的OD_(600)是对照组的1.52倍;(3)Cg OYE具有烯烃还原酶活性,将其应用于生物催化(E/Z)-柠檬醛合成(R)-/(S)-香茅醛。由于底物(E/Z)-柠檬醛是混合异构体,将显著影响Cg OYE的催化活性以及立体选择性。针对Cg OYE催化(E/Z)-柠檬醛活性低下、稳定性差等问题,通过截短Cg OYE氮端区history of pathology域的肽链(Met1-Arg31),提高该酶的烯烃还原酶活性。在截短突变体N8、N20和N31中,N31的比酶活最高,为野生型的4.86倍,且该突变体的热稳定性和p H耐受性均得到显著提高;(4)针对N31-Cg OYE立体选择性较差问题,采用聚焦理化迭代位点特异性突变(Focused rational iterative site-specific mutagenesis,FRISM)作为Cg OYE突变的理论指导,对突变体N31进行半理性设计与改造。根据产物构型设计两条突变路线,最终获得两株优质突变体N31-Cg OYE_(I81L/W128A/H190A)和N31-Cg OYE_(H198A/H295L),其中突变数据表明Cg OYE保守位点H190和其它非保守组氨酸残基可作为“可调节门控”影响底物柠檬醛与酶活性口袋的结合,从而改变产物香茅醛的构象。最后,将Cg OYE突变体与枯草芽孢杆菌来源的葡萄糖脱氢酶(Bs GDH)偶联,对反应体系进行优化。以220 m M(E/Z)-柠檬醛为底物,N31-Cg OYE_(I81L/W128A/H190A)提供(R)-香茅醛的绝对产量为2452.8 mg,转化率和ee值分别为99.4%和99.0%,另一个突变体N31-Cg OYE_(H198A/H295L)提供(S)-香茅醛的绝对产量为2781.2 mg,转化率和ee值分别为99.6%和98.7%。

目的 探讨细胞毒性T淋巴细胞（CTL）来源外泌体能否下调HBx表达从而抑制肝星状细胞（HSC）活化。方法 收集HepG2、HepGA14、CTL细胞上清液提取外泌体（分别简写为NC-exo、HBV-exo、CTL-exo），透射电镜观察其形态，Western Blot检测外泌体标志物CD63和TSG101的表达。将氟硼二吡咯染料（BODIPY）标记的NC-exo、HBV-exo以及CTL-exo与HBV-exo按不同比例混合后，分别与HCobimetinib临床试验SC LX-2(HSC-LX2)共培养，荧光显微镜观察外泌体能否进入LX-2细胞，倒置显微镜观察细胞形态学改变，实时荧光定量PCR (qPCR)检测LX-2细胞中TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（Collagen1）等活化生物标志物的表达。将CTL-exo加入到HepGA14培养体系中，qPCR检测HepGA14细胞内HBV DNA、cccDNA及外泌体中HBx mRNA表达Taurine浓度水平，Western Blot检测外泌体HBx蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 外泌体均为双层膜结构的微囊，呈圆形或椭圆形，囊泡的直径为50～100 nm，表达标志性蛋白CD63和TSG101。荧光显微镜观察示外泌体可进入LX-2细胞，并且HBV-exo进入LX-2细胞后，HSCcoronavirus infected disease胞体增大、胞突伸展。qPCR结果示NC-exo、HBV-exo、NC-exo+HBV-exo和Con组LX-2细胞中TGF-β1、α-SMA、Collagen1基因表达水平差异均有统计学意义（F值分别为444.678、417.144、571.508,P值均<0.05）。CTLexo干预HepGA14细胞后，qPCR结果显示HepGA14细胞中HBV DNA、cccDNA表达水平较对照组明显下降（P值均<0.05），外泌体中HBx mRNA相对表达量明显下降（P<0.05）;HBx蛋白表达水平与对照组相比也明显下降，差异有统计学意义（P<0.05）。CTL-exo和HBV-exo按照不同比例（2∶1、5∶1、10∶1）进行混合后干预LX-2细胞，qPCR结果显示各组间LX-2细胞中TGF-β1、α-SMA和Collagen1基因表达随着CTL-exo比例的增加而逐渐减弱，差异有统计学意义（P值均<0.05）。结论 CTL-exo可下调HBV-exo中HBx蛋白表达抑制HSC活化，提示CTL-exo有抗乙型肝炎肝纤维化作用。