Achr receptor

目的 分析抑郁症使用甘麦大枣汤联合艾司西酞普兰治疗的效果。方法 选取本Vorinostat采购院于2022年4月～2023年2月收治的86例被确诊为抑郁症的患者作为研究对象，根据随机数字表法分为两组，每组43例患者，对照组采用艾司西酞普兰治疗，观察组在对照组的基础上加以甘麦大枣汤。比较两组患者的临床效果、治疗前后患者心理状态、神经递质水平、睡眠质量、认知功能、日常生活能力、自主神经功能。正态计量资料采用t检验，计数资料采用x~2检验。结果 治疗后组间相比，观察组总有效率95.35%，显著高于对照组的79.07%，且观察组汉密尔顿抑郁量表（HAMD）评分显Medial proximal tibial angle著低于对照组（P<0.05）。观察组多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺均显著高于对照组（P<0.05）。观察组认知功能、日常生活能力评分显著均高于对照组，睡眠质量低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组皮肤交感反应（SWnt-C59使用方法SR）起始波潜伏期较对照组显著更短，波幅较对照组显著更大（P<0.05）。结论 患有抑郁症的患者使用甘麦大枣汤、艾司西酞普兰联合治疗后，临床效果提高，能有效改善患者的心理状态和临床生理指标，改善其睡眠质量、认知功能以及日常生活能力。

目的：探究先兆流产患者阴道微生态与血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、核苷酸结合寡聚化结构域祥受体蛋白3(NLRP3)的关系。方法：选取2021年2月-2022年2月本院收治的先兆流产患者96例为流产组，产前检查健康孕妇90例为对照组，酶联免疫吸附法检测血清HMGBPD-0332991体内1、NLRP3、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-2(IL-2)水平；Pearson法分析血清HMGB1、NLRP3水平与阴道微生态指标相关性。结果：与对照组相比，流产组拟杆菌门、变形菌门、放线菌门、普氏菌属、加德纳菌相对丰度升高，梭杆菌门相对丰度降低，TNF-α、IL-2水平升高，IL-4Nucleic Acid Electrophoresis Gels水平降低，流产组HMGB1(MCC950临床试验23.51±2.56μmol/L)、NLRP3(132.35±20.12 pg/ml)均高于对照组(18.24±2.16μmol/L、105.86±19.23 pg/ml)(均P<0.05)。相关性分析，流产组血清HMGB1与NLRP3水平呈正相关(r=0.581),HMGB1、NLRP3水平与拟杆菌门、变形菌门、放线菌门、普氏菌属、加德纳菌属相对丰度呈正相关，与梭杆菌门相对丰度呈负相关(均P<0.05)。结论：先兆流产患者血清HMGB1和NLRP3水平异常升高，且与阴道微生态指标相关。

研究背景及目的:胆囊癌(Gallbladder cancer;GBC)是一种细胞具有高度异质性(Tumor heterogeneity)的肿瘤,且治疗效果及预后极差。随着免疫治疗的发展,癌症患者的治疗发生了巨大的变化,也给癌症患者的治疗及科研工作者带来了希望。目前有不少临床试验针对胆囊癌的免疫治疗,使患者可以获得临床缓解,但是能获益的患者仅占少部分。胆囊癌肿瘤微环境中细胞类型、细胞间的相互作用等都影响着免疫治疗的效果。因此解析胆囊癌肿瘤微环境,在深刻地了解肿瘤的同时,有望探索出胆囊癌潜在的治疗方向和治疗靶点。肿瘤微环境中每个细胞亚群都具有不同功能,CD8~+T细胞可以在识别新抗原后直接识别并杀死癌细胞,CD4~+T细胞也可以协调各种免疫反应,增强或抑制对癌细胞的免疫。树突状细胞(Dendritic cells;DCs)通过呈递肿瘤抗原、分泌促炎和抗炎细胞因子和趋化因子,来启动和调节针对肿瘤的先天和适应性免疫反应。巨噬细胞可以通过刺激血管生成、促进炎症和抑制抗肿瘤免疫来促进癌症的发生、进展甚至转移。内皮细胞可以促进血管生成和淋巴管生成,从而促进肿瘤远处转移。此外,这些免疫细胞间还存在着频繁的、诸如配体-受体等互作关系,达到免疫抑制或者增强免疫作用。目前相关研究进展揭示,肿瘤微环境中CD8~+T细胞普遍具有耗竭性现象,而效应CD8~+T细胞接受抗原刺激后也可转变为耗竭性CD8~+T细胞;CD4~+T细胞中的大多数亚型具有免疫抑制作用;巨噬细胞的主要作用是免疫抑制和促进肿瘤生长。近年来多项研究通过解析肿瘤微环境中不同免疫细胞的作用,已陆续发现新的、潜在的肿瘤治疗靶点。近年来,单细胞测序技术为我们在解析肿瘤微环境提供了强有力的工具,可获得单个细胞及其组合的CHIR-99021临床试验表观基因组学、基因组学、转录组学和蛋白质组学特征等多层信息,从而充分了解肿瘤微环境中的肿瘤细胞类型、免疫细胞的各种亚型、不同细胞的差异基因、细胞之间相关作用及转化等。进而不断找出新的基因靶点,以及基于基因层面的生物标记物。随着单细胞测序技术的发展,单细胞转录测序(single-cell RNA sequencing;scRNA-seq)和单细胞染色质转座酶可及性测序(single-cell Assay for Transposase-Accessible Chromatin with highthroughput sequencing;sc ATAC-seq)受到广大关注。scRNA-seq可以提供单细胞转录组学的信息,了解单个细胞的基因表达状态、即细胞的转录状态。而sc ATAC-seq可以揭示细胞转录相关调控的基因景观。将scRNA-seq与sc ATAC-seq联合分析能够将基因表达与调控元件的可及性联系起来,能够更准确地重建细胞生理学基础的分子过程。本课题组前期通过scRNA-seq对胆囊癌进行研究,解析了肿瘤微环境中的细胞异质性和相互作用,发现微环境中免疫细胞普遍具有免疫抑制,但基于sc ATAC-seq、关于胆囊癌细胞转录相关调控基因景观的研究尚存在空白,因此采用sc ATAC-seq和scRNA-seq联合分析方案,将为全面揭示胆囊癌微环境和异质性、以及发Puromycin价格现新型精准治疗靶点,提供充分的科学依据。研究方法:本研究从入组的胆囊腺癌患者获取胆囊原发肿瘤及肿瘤旁组织进行分析。测序方法选择10X Genomics公司提供的Tn5转座酶测序和单细胞转录组测序。然后使用Harmony、Signac、Seurat、Monocle、Cicero、Cellchat等算法对胆囊癌微环境进行分群、功能富集,探索细胞间转化关系及不同细胞亚群之间的相互作用。研究结果:1、通过scRNA-seq获得了40129个细胞,通过sc ATAC-seq获得了13844个细胞,从中鉴定出8个细胞群,包括上皮细胞、T&NK细胞、B细胞、髓系细胞、内皮细胞、成纤维细胞、周细胞和肥大细胞。2、T&NK细胞鉴定出12个亚群,其中CXCL13~+CD4~+T细胞、FOXP3~+CD4~+T细胞和GZMB~+CD8~+T细胞在胆囊癌组织中具有较强的免疫抑制作用,其高表达的免疫抑制基因(HAVCR2、LAG3、PDCD1、TIGIT)可能是胆囊癌潜在的治疗靶点;此外,细胞毒性GZMK~+CD8~+T细胞在胆囊癌中可转变为GZMB~+CD8~+T细胞,体现出胆囊癌中T细胞普遍存在免疫抑制表现。髓系细胞鉴定出11个亚群,巨噬细胞在胆囊癌中主要进行M2极化且M2型巨噬细胞占大多数,提示肿瘤相关巨噬细胞在胆囊癌中的免疫抑制和促癌作用;LAMP3~+树突状细胞在肿瘤微环境中具有多种功能。内皮细胞鉴定出2个亚群,主要参与血管生成和淋巴管生成,在促进胆囊癌远处转移中可能起着重要作用。上皮细胞鉴定出4个亚群,发现Epi＿C4作为肿瘤中特异性的细胞,高表达MHC I类和MHC II类分子,且在多方面的功能上具有重要作用。3、成纤维细胞、内皮细胞与众多细胞之间存在广泛的细胞通信,其中与肿瘤上皮细胞间的交流尤为活跃;此外,成纤维细胞与肿瘤上皮细胞、巨噬细胞与T细胞、及肿瘤上皮细胞与T细胞之间,通过配体-受体结合形成了密切的互作关系。结论:本研究鉴定出胆囊癌中存在8个特征细胞群及其亚群,阐明了微环境各类型细胞间存在的相互作Airborne microbiome用关系,相关研究结果为靶向或免疫治疗胆囊癌提供了潜在的干预靶点。

玉米(Zea Mays)是重要的粮食、饲料和经济兼用作物,在粮食安全和国民经济中占有重要地位。玉米籽粒发育情况是决定其产量和品质的重要因素,一直是科研人员关注的重点领域。利用种子发育突变体,一些籽粒发育相关基因被相继克隆,对玉米籽粒发育的遗传调控有了一定的了解,然而玉米种子发育是一个多基因协同调控的复杂过程,目前其遗传调控网络还相当不完善。筛选新的籽粒发育突变体,开展重要功能基因的挖掘和作用机制研究,将促进籽粒发育遗传调控网络的解析,为玉米产量和品质性状分子设计改良提供候选基因和理论依据。前期,实验室利用EMS诱变筛选获得了一个种子发育突变体dek570-1,该突变体的种子明显变小,利用dek570-1与自交系W64A构建了 F2定位群体。本论文图位克隆了目的基因Dek570-1,并对其进行了初步的功能研究。具体结果如下:1、突变体dek5 70-1的形态学鉴定突变体dek570-1籽粒较野生型籽粒显著减小,中部纵切观察发现突变体的胚乳和胚的面积比野生型的均明显变小,但胚的形态结构似乎正常。萌发实验显示,绝大多数突变体籽粒能够萌发,突变体植株矮小、叶片发黄,但仍可生长和繁殖后代。上述结果表明,Dek570-1突变使玉米籽粒及植株的生长发育能力明显弱化。2、突变体dek570-1的遗传学分析W64A × dek5 70-1F2分离果穗上,正常籽粒与突变籽粒的分离比大约为3:1,卡方检验结果表明突变体dek5 70-1的小种子表型是由单个核基因控制的隐性性状。3、Dek570-1的图位克隆与验证以W64A×dek570-1 F2分离果穗上突变籽粒的基因组DNA为模板,筛选Indel标记将突变基因定位至Chr1上641.21 kb的物理区间内,该区间内含有16个预测基因。测序比对发现,与野生型相比只有Zm00001d02842SB431542半抑制浓度2基因在突变体dek570-1中起始密码子ATG下游的第966个碱基发生了 G-A的替换,导致蛋白翻译提前终止,并通过等位测试验证了目的基因的正确性。目前正在通过CRISPR/Cas9技术敲除Dek570-1,以进一步明确Dek570-1的功能。4、Dek570-1的表达模式和亚细胞定位qRT-PCR分析表明,Dek570-1在检测的玉米各组织中均表达,其中在雌穗中表达强度最高,在籽粒早期发育阶段也具有较高水平的表达,随着籽粒发育进程其表达水平逐渐下降,表明Dek570-1可能在雌穗及籽粒早期发育中发挥重要作用。亚细胞定位结果表明,Zheng58中的Dek570-1蛋白既定位于线粒体,也定位于叶绿体。5、不同遗传背景下,Dek570-1突变对玉米籽粒发育的影响授粉16天籽粒的石蜡切片显示,突变体dek570-1(Zheng58遗传背景)和等位突变体emp17(W22遗传背景)的胚乳和胚的面积比来源亲本(野生型)的明显更小,胚乳储藏物质累积减少,胚的发育受到严重影响。值得注意的是,dek5 70-1STM2457的胚虽然比野生型的明显更小,但形态结构似乎完整,而emp17籽粒未发育出完整形态结构的胚,这与授粉24天的dek570-1的胚能够萌发,而emp17胚致死的结果一致。上述结果预示着Dek5 70-Superior tibiofibular joint1在玉米籽粒发育中的生物学功能既具有保守性,也存在一定的遗传背景差异。6、Dek570-1编码一个PPR蛋白,参与线粒体和叶绿体C-to-U的编辑Dek570-1编码一个DYW型的PPR蛋白,Zheng58和W22遗传背景下,Dek570-1在线粒体ccmFC-799和nad2-677位点的C-to-U编辑是保守的,但也存在一些其它的差异编辑位点。另外,在Zheng58遗传背景下Dek570-1也参与叶绿体rpl20-308位点的C-to-U编辑,而在W22背景下Dek570-1被报道仅定位于线粒体。上述结果表明Dek570-1可能通过参与线粒体和叶绿体基因编辑调节细胞器功能,进而影响玉米籽粒发育,但在不同玉米遗传背景下也存在一定的功能差异。7、Dek570-1突变导致植株光合能力减弱由于Zheng58遗传背景下Dek570-1也定位于叶绿体,并且参与叶绿体基因的编辑,我们测定了突变体dek570-1的光合作用相关指标。与野生型相比,dek5-0-1的叶绿素含量显著减少,光合效率明显降低,表明Dek570-1突变严重影响了叶绿体的功能,这可能与dek570-1植株和籽粒发育能力减弱,叶片变黄相关。8、Dek570-1突变引起了 ROS含量的显著增加NBT和DAB染色显示,突变体dek570-1叶片和根中的ROS含量较野生型Zheng58明显升高,说明Dek570-1突变影响了线粒体和叶绿体基因的编辑,扰乱了叶绿体和线粒体的正常功能,引起了 ROS水平的大幅度升高,这可能与籽粒及植株生长发育缺陷密切相关。综上所述,突变体dek570-1籽粒和植株的生长发育能力严重弱化,实验图位克隆并验证确认了目的基因Dek570-1;Dek570-1在雌穗及籽粒早期发育表达较高,其编码一个线粒体和叶绿体双定位的PPR蛋白,参与细胞器C-to-U的编辑;Dek570-1功能缺失的植株光合能力减弱,ROS含量的显著增加,可能导致籽粒及植株生长发育缺陷:同时Dek570-1在玉米籽粒发育中的生物学功能既具有保守性,也存在一定的遗传背景差异。本论文明确了Dek570-1在玉米籽粒发育中重要的作用,初步研究了Dek570-1调控玉米种子发育的相关机制,上述结果将促进我们对玉米种子发育调控的认识,为玉米高产育种和品质改良提供可供选择的基因资源和理论依据。

鹿鞭(Penis et Testis Cervi)为鹿科动物梅花鹿(Cervusnippon Temminck)或马鹿(Cervuselaphus Linnaeus)的阴茎和睾丸。宰杀后,割取阴茎及睾丸,除去残肉及油脂、固定于木板上风干。亦可用沸水浇烫后置烤箱80℃烤干。具有补肾精、壮肾阳、强腰膝的功效。目的:为了挖掘鹿鞭中潜在的活性成分;研究鹿鞭治疗肾阳虚大鼠生精功能障碍的生物学机制;探讨鹿鞭治疗肾阳虚生精功能障碍的作用及疗效;为推广和应用鹿鞭治疗肾阳虚生精功能障碍提供理论基础。方法:1.首先使用BCA蛋白浓度试剂盒对鹿鞭水提物进行蛋白浓度的测定;再利用凝胶渗透色谱仪对鹿鞭水提物蛋白分子量分布检测;最后利用液相色谱法,超高效液相色谱-串联质谱法,气相色谱-质谱联用法对鹿鞭水提物的中的氨基酸类成分,固醇类成分,长链脂肪酸类成分,短链脂肪酸类成分,核苷酸类成分,生物胺类成分进行分析。2.通过Genecards数据库获取疾病主要靶点,利用BAT-MAN数据库收集鹿鞭的活性成分、作用靶点,并用STRING数据库对靶点基因进行GO与KEGG富集,同时构建“药物-成分-靶点-通路”网络。利用Cytoscape对网络进行可视化分析。筛选出鹿鞭治疗肾阳虚潜在的生精功能障碍的通路与靶点;利用分子对接进行验证分析。3.通过氢化可的松诱导肾阳虚模型;通过H&E染色观察睾丸、肾脏和肾上腺的病理变化;ELISA法测定大鼠血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT);使用q RT-PCR检测生殖相关基因的表达水平;通过免疫组化检测睾丸中ARG1的表达量;使用湿片法检测大鼠精子浓度与活力。结果:1.鹿鞭水提物的蛋白含量为50.7%。在70-130k Da蛋白占10.71%,小于70k Da蛋白占82.7%;鹿鞭水提物中有16种氨基酸,排名前五的是甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸、丙氨酸、精氨酸;鹿鞭水提物中有15种激素,排名前五的是17-羟基孕烯醇酮、雌三醇、17-羟孕酮、21-羟孕酮、雌二醇;鹿鞭水提物中24种长链脂肪酸,排名前5的是棕榈酸、硬脂酸、油酸、二十二碳六烯酸甲酯、花生四烯酸;鹿鞭水提物中含有8中短链脂肪酸,有乙酸、己酸、正丁酸、丙酸、异戊酸、异丁酸、正戊酸;鹿鞭水提物中含有5种核苷酸,有鸟嘌呤核苷酸、腺嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、次黄嘌呤核苷酸、胞嘧啶核苷酸;鹿鞭水提物中含有4种生物胺,有酪胺、β-苯乙胺、色胺、组胺。2.网络药理学分析结果显示鹿鞭潜在化合物与疾病的交叉靶www.selleck.cn/products/INCB18424点一共有303个;鹿鞭能调控2802个GO条目与206条KEGG条目发挥治疗生精功能障碍的作用;精氨酸生物合成通路是治疗肾阳虚生精功能障碍的潜在通路;分子对接结果显示精氨酸生物合成通路中的NOS1,NOS2,NOS3,ARBest medical therapyG1,CPS1,GLUL与雌二醇具有强烈的结合能。3.鹿鞭水提物能够显著恢肾阳虚大鼠血清中睾酮,黄体生成素,卵泡刺激素,促肾上腺皮质激素、皮质醇五种激素水平,同时鹿鞭能够激活精氨酸生物合成通路,能改善肾阳虚大鼠睾丸,肾,肾上腺的病理状态;显著恢复睾丸中生殖相关标志物的表达水平,抑制睾丸中ARG1蛋白表达水平;鹿鞭水提物能显著恢复肾阳虚大鼠精子浓度与精子活力。结论:鹿鞭水提物中蛋白含量高IDN-6556 MW达50.7%并且富含16种氨基酸,15种激素,24种长链脂肪酸,8种短链脂肪酸,5种核苷酸,4种生物胺,是一种高营养膳食补充剂,为治疗肾阳虚生精功能障碍提供物质基础。鹿鞭潜在化合物与疾病的交叉靶点一共有303个,鹿鞭中能够通过2802个GO条目与206条KEGG条目发挥治疗生精功能障碍的作用鹿鞭潜在化合物众多,调控肾阳虚大鼠生精功能障碍的生物学机制复杂,为治疗肾阳虚生精功能障碍提供理论依据。鹿鞭水提物能够改善肾阳虚大鼠睾丸,肾,肾上腺的病理变化;恢复肾阳虚大鼠睾酮,黄体生成素,卵泡刺激素,促肾上腺皮质激素、皮质醇激素水平,恢复睾丸中生殖相关标志物的表达水平。为治疗肾阳虚生精功能障碍提供数据支撑。鹿鞭水提物可能通过精氨酸生物合成通路来调控肾阳虚生精功能障碍大鼠,恢复大鼠的精子活力与浓度。

马齿苋(Portulaca oleracea L.)为马齿苋科马齿苋属一年生肉质草本,药食两用。《中国药典》记载马齿苋能清热解毒、凉血止血、止痢。除了具有抗菌、抗炎和抗氧化等多种药理作用外,伊朗传统医药记载马齿苋还可治疗哮喘。临床试验、动物实验及体外实验均证明马齿苋抗哮喘药效确凿,但其抗哮喘药效物质尚不清楚。马齿苋主要含有生物碱、有机酸和多酚,儿茶酚型生物碱是其特征性成分,具有数量多(60个)、结构类型多样的特点。鉴于激动β2-AR缓解支气管痉挛和抗炎是哮喘治疗的两大策略,本课题组前期通过初筛发现马齿苋中多种儿茶酚型生物碱具有不同程度的体外激动β2-AR和抗炎双功能,推测这些生物碱可能是马齿苋抗哮喘药效物质基础。上述成分中1-苄基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉(1-benzyl-6,7-dihydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline,BTQ)和 6,7-二羟基-1-异丁基-1,2,3,4-四氢异喹啉(6,7-dihydroxy-1-isobutyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline,ITQ)为β2-AR强激动剂或选择性激动剂,动物实验表明BTQ和ITQ具有舒张豚鼠气管、缓解OVA或LPS诱导的小鼠气道炎症作用,但其抗炎分子机制不明。NF-κB/MAPK信号通路是调控炎症和氧化应激的关键信号通路,与哮喘气道炎症和上皮细胞损伤密切相关。鉴于马齿苋中四氢异喹啉类生物碱BTQ和ITQ具有气管舒张强活性和抗炎双功能的前期发现,本文基于NF-κB/MAPK信号通路进一步在细胞水平上探究了 BTQ和ITQ的抗炎和抗氧化作用及其分子机制。本文研究内容包括以下两方面:一、BTQ和ITQ对LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症反应的影响及其机制研究目的:研究BTQ和ITQ对LPS诱导的RAW 2 64.7小鼠巨噬细胞炎症反应的影响及其分子机制。方法:通过比色法或酶联免疫法测定Pidnarulex生产商炎症介质NO、TNF-α和IL-1β的水平,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS和COX-2的mRNA水平,免疫印迹分析测定iNOShepatic toxicity、COX-2以及NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白表达水平,免疫荧光法检测NF-κB p65的细胞定位。结果:与LPS诱导的炎性细胞模型组相比,BTQ和ITQ剂量依赖性地显著抑制NO的产生,其EC50值分别为67.91和80.40μM;BTQ和ITQ(50～100μM)可显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS和COX-2的mRNA和蛋白表达;BTQ和ITQ(100 μM)均可明显提高NF-κB抑制蛋白IκBα的水平,显著抑制IκBα和p65的磷酸化,减少NF-κBp65的核易位。此外BTQ和ITQ(25～100μM)可显著抑制MAPK信号通路中JNK磷酸化,BTQ还能显著降低p38 MAPK的磷酸化水平,但二者对ERK的活化无影响;结论:本研究首次阐明了 BTQ和ITQ对LPS诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞炎症反应具有抑制作用,其抗炎分子机制与抑制NF-κB和MAPK信号通路的激活有关。二、BTQ和ITQ对亚砷酸钠诱导Beas-2B人肺上皮细胞氧化损伤的影PLX5622响及其机制研究目的:研究BTQ和ITQ对亚砷酸钠诱导Beas-2B人肺上皮细胞氧化损伤的保护作用及其分子机制。方法:通过比色法测定化合物对DPPH·和·OH的体外清除活性、GSH含量及CAT和T-SOD的活力,MTT法测定细胞存活率,免疫印迹分析测定MAPK信号通路蛋白表达。结果:BTQ清除DPPH.(EC50=34.20μM)的能力略强于ITQ(EC50=53.47 μM),前者活性略弱于VC(EC50=26.94μM);BTQ清除.OH的能力也比ITQ略高,其EC50值分别为447.85和577.17μM,二者活性略弱于VC(EC50=213.59μM)。BTQ在50～100 μM时剂量依赖性地显著提高亚砷酸钠损伤的Beas-2B细胞的生存率,而ITQ无保护作用;100μM的BTQ或ITQ不仅可显著提高正常Beas-2B细胞中GSH含量及T-SOD活力,还可显著提高亚砷酸钠损伤的Beas-2B细胞中GSH含量、CAT和T-SOD的活力,缓解亚砷酸钠引起的Beas-2B细胞氧化应激损伤;100μM的BTQ可以显著抑制亚砷酸钠损伤细胞中JNK和ERK的磷酸化,但对p38 MAPK的磷酸化无显著抑制作用。而100 μM的ITQ仅下调ERK的磷酸化水平,对JNK和p38 MAPK的磷酸化水平均无作用。结论:首次发现BTQ通过抑制氧化应激以及MAPK信号通路中JNK和ERK的磷酸化,在亚砷酸钠损伤的Beas-2B细胞中发挥保护作用。综上所述,BTQ和ITQ通过调控NF-κB/MAPK信号通路,缓解了 LPS诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞中炎症反应和亚砷酸钠诱导的Beas-2B人肺上皮细胞氧化应激损伤。论文研究结果为阐明马齿苋的平喘物质及其抗炎和抗氧化机制提供了科学依据。

研究背景及目的:流感病毒(Influenselleck CP-690550za viruses)是造成病毒性肺炎感染的主要病原体。在世界范围内由流感病毒引起的季节性流感每年约造成10亿人感染。体内发生“细胞因子风暴”是流感病毒感染后死亡的重要原因之一。“细胞因子风暴”是危及生命的全身性炎症综合征,会引起多器官功能不全,导致极高的死亡率,所以控制体内“细胞因子风暴”的进展十分重要。前期研究表明抑制性寡核苷酸MS19具有抑制炎症的作用,但单独的核苷酸类药物易被核酸酶降解,在体内不稳定。本课题探究使用纳米载体PEI-PLA递送抑制性寡核苷酸MS19是否可增强其抑制炎症的作用,并在病毒性肺炎小鼠模型中观察PEI-PLA-MS19是否可以缓解小鼠的肺损伤并延长小鼠生存期。从而为机体病原体感染诱发过激炎症反应的治疗提供新的思路。研究方法:本研究将亲水性PEI和疏水性PLA偶联,使用纳米沉淀法自组装成纳米颗粒PEI-PLA,再通过电荷吸引力制备PEI-PLA-MS19。采用动态粒径散射法和透射电镜对纳米材料进行表征,筛选并制备出尺寸合适,稳定性强的纳米递送载体。制备完PEI-PLA-MS19后,首先使用共聚焦显微镜观察PEI-PLA纳米载体递送MS19进入RAW264.7细胞的效果,并采用小动物活体成像观察PEI-PLAMS19在小鼠体内的存在及分布特点;之后通过ELISA实验检测PEI-PLA-MS19对流感病毒刺激后RAW264.7细胞分泌的炎症因子IL-6的影响。在体内实验中我们评估了PEI-PLA-MS19在病毒性肺炎小鼠中的治疗作用,主要包括观察小鼠生存期,HE染色观察小鼠肺组织的病理学改变,ELISA检测肺泡灌洗液中炎症因子IL-6和TNF-α的水平,流式细胞术检测小鼠肺部及脾脏中巨噬细胞和中性粒细胞比例的变化。最后,通过RNA-Seq技术分析MS19处理流感病毒感染RAW264.7细胞的差异性表达基因,并采用Western Blot方法进行验证。研究结果:获得了稳定性较好的PEI-PLA纳米颗粒,Psychosocial oncology尺寸在220 nm左右,Zate电位为21.2m V左右,通过电荷吸附力获得了PEI-PLA-MS19,尺寸在295nm左右,Zate电位在-8.2m V左右。共聚焦微镜结果显示PEI-PLA纳米颗粒能更有效的促进MS19进入到细胞内,小动物活体成像结果显示PEI-PLA-MS19与MS19相比在小鼠体内存留时间更长,分布范围更广。ELISA结果显示PEI-PLA-MS19可以显著降低流感病毒刺激RAW264.7细胞分泌IL-6的水平。体内研究结果也显示PEI-PLA-MS19会有效延长病毒性肺炎小鼠的生存期;明显缓解病毒性肺炎小鼠的肺部病理变化,并显著降低了小鼠肺泡灌洗液中炎症因子IL-6与TNF-α的水平;抑制了中性粒细胞在小鼠肺部和脾脏中的浸润;且提高了M2型巨噬细胞在小鼠肺组织中的比例。此外,RNA-Seq及Western Blot结果显示PEIPLA-MS19促进RAW264.7细胞内Adcy4的表达,达到抑制Barasertib炎症的作用。结论:1.成功构建PEI-PLA-MS19共聚物,具有合适的尺寸和良好的稳定性;2.PEI-PLA纳米载体可以有效的将MS19递送到细胞内,提高了MS19在小鼠体内的稳定性及持久性;3.PEI-PLA-MS19在体内,体外抑制流感病毒诱导的炎症反应;对小鼠病毒性肺炎起到显著的治疗作用。

过氧化物还原酶(Peroxiredoxin,PRDX)1是PRDX家族的成员之一,可清除细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)。研究发现PRDX1不仅在癌症中发挥了重要的作用,在博莱霉素(Bleomycin,BLM)处理构建小鼠肺纤维化(Pulmonary Fibrosis,PF)模型中,PRDX1基因敲除小鼠产生了更严重的肺部炎症和PF。目前研发治疗PF的药物具有严重的不良反应,且只能延缓肺功能的衰竭,无法有效地治愈疾病。因此,本研究旨在更加深入了解PF的发病机制,找寻高效的治疗方法。为了探究PRDX1在BLM诱导的PF过程中扮演的角色,以及PRDX1通过哪些具体的分子机制在BLM诱导的PF过程中发挥作用。我们利用MTT法、形态学检测、划痕实验、荧光显微镜成像、流式细胞术、TGF-β1 ELISA试剂盒、Western blot、转录组测序分析和组织病理学检测等实验方法进行了进一步的探索。肺组织中功能性细胞的丧失以及肺成纤维细胞的增殖是PF疾病发病的两大主要原因,因此本研究通过上皮细胞和成纤维细胞的体外实验以及小鼠体内实验这三部分主要内容进行探究。第一部分为PRDX1在BLM诱导的肺上皮细胞损伤过程中的具体机制。利用慢病毒转染构建PRDX1敲降的肺上皮细胞,并分别命名为Mock组和sh PRDX1组细胞,MTT法检测显示随着BLM药物浓度的逐渐升高,PRDX1敲降后细胞的存活率明显升高,并且细胞内ROS水平也显著提升,细胞线粒体膜电位逐渐下降,这预示着BLM处理能通过ROS诱发线粒体的损伤,并且敲降PRDX1能显著促进线粒体的损伤。sh PRDX1组细胞发生了明显的纤维化形态的改变,细胞的迁移能力同样显著增强。sh PRDX1组细胞中上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)和纤维化相关标志性蛋白表达水平升高,表明敲降PRDX1能显著促进细胞发生EMT并进一步向间质性细胞转化,这一过程能够激活PI3K/AKT和JNK/Smad信号通路,其中JNK信号通路的激活更为显著,PI3K和JNK抑制剂的处理进一步证明了上述结果。第二部分为PRDX1在BLM诱导成纤维细胞增殖和胶原蛋白分泌过程的调控机制。选取PRDX1基因敲除小鼠,PCR鉴定小鼠基因型后,提取WT和PRDX1基因敲除小鼠原代肺成纤维细胞,BLM处理后,检测结果Belnacasan显示敲除PRDX1能显著促进细胞的活力和细胞增殖能力,并促进成纤维细胞分泌转化生长因子-β,细胞内ROS水平的升高,细胞迁移能力的升高,但是对线粒体ROS以及线粒体膜电位没有明显影响。PRDX1敲除后能显著影响到细胞周期蛋白,从而促进细胞增殖以及纤维化相关蛋白的表达,这些现象主要是通过PI3K/AKT和JNK/Smad信号通路的激活产生的。第三部分主要是利用正常小鼠和PRDX1基因敲除小鼠进行体内实验,利用BLM进行小鼠体内纤维化造模,结果显示BLM处理后在PRDX1基因敲除小鼠体内产生了更严重的PF,小鼠死亡率增加,肺组织中细胞增殖相关蛋白表达量升高,纤维化相关蛋白发生显著改变,PI3K/AKT和JNK/Smad信号通路也被进一步激活。综上所述,PRDX1在BLM诱导的PF中起着重要作用。一方面,BLM可导致上皮细胞ROS水平升高,从而导致细胞线粒体和EMT的损伤或细胞凋亡。敲降Normalized phylogenetic profiling (NPP)PRDX1通过增加细胞ROS进而促进上皮细胞损伤,最终导致PF的发生。另一方面,BLM可诱导成纤维细胞增殖和胶原表达,敲除PRDX1可以进一步促进成纤维细胞增殖和胶原分泌来促进PF的发展,这一过程主要通Metabolism抑制剂过PI3K/AKT和JNK/Smad信号通路实现的。本文首次较为全面的阐明了PRDX1在肺纤维化疾病中的作用。这些发现有力地表明,PRDX1是BLM诱导的肺纤维化进展的关键分子,通过调节EMT和肺成纤维细胞增殖;因此,它可能是BLM诱导的肺纤维化的临床治疗靶点。

目的 调查佛山市南海区鼠类自然感染恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi, Ot)的Adezmapimod配制情况，了解当地Ot基因型的分布及特点，为防控恙虫病提供科学依据。方法 2017年7月利用鼠夹和鼠笼，在佛山市南海区恙虫病高发镇街采集鼠类动物样本，应用巢式聚合酶链反应(nested polymearse chain reaction, nPCR)扩增技术检测Ot 56kDa型特异性抗原(type-specific antigen, TSA)基因核酸片段，通过核酸序列比对确定Ot基因分型。用MEGA 10.0.5、DNAStar Hepatitis B chronic7.1、MegAlig获悉更多n等生物信息学软件进行同源性与遗传进化分析。结果 共捕获鼠类200只，褐家鼠检出56kDa TSA基因片段6份，黄胸鼠检出1份，阳性率为3.5%(7/200)。南海序列(L65、L68、L118、L119、L122、L150和L153)在核苷酸水平与Kawasaki、Gilliam、TA763、Kato、Kuroki、Karp基因型相似性为71.8%～100.0%,氨基酸水平相似性为54.9%～100.0%。同源性和系统进化分析表明，南海序列与Ot中的Karp型具有较高的同源性和较近的亲缘关系，与其他型同源性较低，亲缘关系较远。L65、L119、L150和L153与台湾TW45R株、云南TN16-28株的核苷酸同源性为100.0%。结论 佛山市南海区存在鼠类Ot自然感染，褐家鼠为其主要宿主，当地恙虫病病原体属于Karp型。

由细胞内细菌引起的反复感染会导致严重的并发症。然而药物联用作为治疗细胞内细菌感染的常用策略,在具体的治疗过程中由于药物差异化代谢、吸收及在细胞水平不同的内化途径和亚细胞器驻留,极大地阻碍了药物的联合治疗效果。在此,本研究提出了一种联用药物在细胞内协同杀菌的策略。该策略通过使用具备巨噬细胞/细胞内细菌双靶向功能的药物递送系统(DDS)实现现场递送药物组合,最终通过细胞内的药物协同效应高效清除细胞内细菌感染。主要内容如下:(1)采用PET-RAFT聚合技术首先引入疏水核心α-N-丙烯酰基-苯丙氨酸(表示为F)、接着通过经典共聚程序成功引入亲水组分β-N-丙烯酰-α-Boc-D-氨基丙氨酸(表示为A_(Boc))以及2-(2′,3′,4′,6′-四-O-乙酰基-α-D-甘露糖基)丙烯酸乙酯(表示为MO_(Ac)),通过共定位实验测试表明DDS具备巨噬细胞/细胞内细菌双靶向功能。(2)在细胞外,万古霉素和姜黄素之间存在协同杀菌效应。万古霉素和姜黄素可以以预设剂量成功包封在DDS中,并以均匀和长期的模式释放。与此同时细胞外抗菌结果证明封装万古霉素和姜黄素的NPs由于药物协同效应表现出最好的细胞外抗菌效果。(3)通过细胞内细菌模型评价结果发现,DDS通过能量依赖的甘露糖受体配体介导的特异性识别的大胞饮方式快速内化进入巨噬细胞,PS-341采购不仅统一了药物内化途径,而且实现巨噬细胞快速内化效果。通过双靶向能力将药物有效递送至细菌感染部Cloning and Expression位,实现高效的细胞内药物协同作用。与其他对照组相比,(Van+Cur)@F(AM)NPs表现出最好的细胞内杀菌效果。此外通过小鼠腹腔感染模型评价发现,DDS能够通过调节促炎症因子进而调节身体免疫,最终进一步提高MLN4924抑制剂了细胞内细菌协同治疗效果。