Achr receptor

目的:研究在高脂膳食中添加烟酰胺单核苷酸对雄性昆明小鼠小腿peripheral blood biomarkers肌肉萎缩的影响,为开发老年肌肉减少症营养干预措施提供理论支持。方法:将27只9月龄雄性昆明小鼠的左腿踝关节钉住固定于背屈位以引起小腿前部肌肉萎缩。异氟烷麻醉小鼠后,将小鼠左侧脚掌前部钉到小腿前部,确保踝关节固定于背屈位。采用随机数字将小鼠随机分为低脂膳食对照组、高脂膳食组和高脂膳食加烟酰胺单核苷酸组。高脂膳食中脂肪提供45%的能量,烟酰胺单核苷酸组烟酰胺单核苷酸添加量相当于体重70kg成人每天摄入250mg。小鼠三只一笼,每周更换垫料,实验室昼夜循环光照12h,温度为22～24℃,相对湿度为50%～55%。头3天每天称体重和剩余饲料量,并检查左足钉是否正常,如有松动或脱落,重新钉上。随后每2-3天检查小鼠状况并记录体重和采食量。喂养两周后隔夜禁食,第二日异氟烷麻醉后行摘眼球取血留样,再放尽血后取肝脏准确称重记录,分离双侧胫骨前肌、趾长伸肌、比目鱼肌和腓肠肌,用万分之一天平称重记录肌肉重量。测定身长和尾长,计算肝脏指数、肌肉器官指数、BMI和Lee’s指数。器官指数等于器官重量除以体重。组间差异采用单因素方差BLZ945分子式分析和事后多重比较,检验显著性水平取α=0.05。结果:有3只小鼠在实验过程中死亡,剩下的24只小鼠数据用于统计分析。单因素方差分析结果显示各组体重、肌肉重量、肝脏重量、肝脏器官指数、肌肉器官指数、BMI和Lee’s指数之间均没有显著差异。24只小鼠左侧胫骨前肌平均值62.88±15.44mg、右侧胫骨前肌平均值65.91±17.32mg、左侧趾长伸肌平均值13.56±4.76mg、右侧趾长伸肌平均值14.65±3.77mg、左侧比目鱼肌平均值10.30±4.05mg、右侧比目鱼肌平均值9.13±2.07mg、左侧腓肠肌平均值185.88±38.14mg、右侧腓肠肌平均值189.39±38.07。24只小鼠中有10只左侧胫骨前肌重量大于右侧,被认定为造模不成功。剔除10只造模不成功小鼠后剩余14只小鼠左右侧肌肉重量采用t检验进行比较,左侧胫骨前肌重量小于右侧胫骨前肌重量(61.17±16.21 vs 72.54±15.74,P=0.07)。其他三种肌肉左右侧差异不显著。结论:钉住左腿踝关节固定于背屈位可引起左侧胫骨前肌肉、左侧趾长伸肌、左侧腓肠肌、左侧比目鱼肌均与右侧对比成萎缩状态,但肌肉重量减少程度不够显著。高脂膳食中添加烟酰胺单核苷酸对雄性昆明小鼠小腿肌肉萎缩没有显著影selleck抑制剂响。

目的 本研究旨在探讨对抑郁症患者实施音乐疗法的效果。方法ABT-263说明书 选取本院2019年4月～2022年5月就诊的抑郁症患者80例作为研究对象，按随机数字表法将患者随机分成观察组和对照组，每组各40例患者。对照组采用常规护理，观察组在对照组的基础上给予音乐疗法。对比两组的治疗有效率、抑郁自评量表（SDS）评分、生活质量综合评定问卷（GQOLI-74）评分以及治疗依从性。正态计量资料采用t检验，计数资料采用x~2检验。结果 治疗后，观察组治疗有效率（97.50%）显著高于对照组（77.50%）(P<0.05)；干预前，两组SDS评分比较差异无统计学意义（P>0.05PLX5622作用），干预后，观察组的SDS评分显著低于对照组（P<0.05）。干预前，两组患者的GQOLI-74评分比较差异无统计学意义（P>0.05）；干预后，观察组GQOLI-74评分显著高于对照组（P<0.05）；且观察组的治疗依从性（92.50%）显著高于对照组（75.00colon biopsy culture%）(P<0.05)。结论 对抑郁症患者采用音乐疗法能够有效改善其抑郁症状，提高治疗有效率，增强其治疗依从性，并显著提高其生活质量。

目的 探讨羟基类固醇脱氢酶基因家族8个单核苷酸多态性(SNPs)与人类指长比(2D∶4D)的关联性。方法 随机选取808名在校大学生(男性400名，女性408名)为研究对象，拍摄双手掌面照片后利用电脑图像软件测量并计算左、右手各指长比；多重PCR法对11β-羟基类固醇脱氢酶(HSD11B)和17β-羟基类固醇脱氢酶(HSD17B)基因家族8个SNPs位点(rs1000283,rs2236903,rs5479,rs56303414,rs676387,rs44458selleck LY283521995,rs2066474,rs8190478)进行基因分型；单因素方差分析法分析不同基因型与2D∶4D的关联。结果 宁夏大学生女性左手(L)2D∶3D,L2D∶4D、L3D∶4D、右手(R)2D∶4D、R2D∶5D均显著高于男性(P<0.05);rs2236903(HSD11B1)的基因型频率在男女间的差异具有统计学意义(P<0.05);HSD11B1基因的rs1000283-rs2236903及HSD11B2基因rs5479-rs56303414存在强关联，但其频3-MA IC50率在男女两性间差异均无统计学意义(P>0.05);不论男性还是女性，8个SNPs位点基因型频率与指长比(2D∶4D)无显著关联(P>0.05)。结论 宁夏汉族大学生群体的指长比性别差异存在显著性，然而，其与HSD11B和HSD17B基因家族8个SNPs位点基因多态性无关联性，提示其可能与人类指长比的形成Drug immunogenicity无关。

<正>患者女caveolae mediated transcytosis，53岁。因面部暗红色斑片30年余，加重伴瘙BI 10773分子式痒1个月，于2019获悉更多年4月来我院皮肤科门诊就诊。患者30余年前外出务农时外伤后左侧颊部出现一黄豆大红色斑丘疹，无痛痒感，无低热、盗汗、咳嗽及乏力等不适。患者未予诊治，后皮损逐渐增大，部分融合成片，无破溃及渗出，曾多次就诊于当地医院，予外用药物治疗（具体不详），无明显好转。1个月前患者皮损面积进一步增大，斑块浸润明显，伴瘙痒，遂至我院就诊。既往体健，否认结核病及家族性遗传病史。家族中无类似疾病患者。体格检查：一般情况可，全身浅表淋巴结无增大，各系统检查无异常。皮肤科检查：左侧颊部可见一12 cm×6 cm暗红色浸润性斑片，皮损中央颜色略淡，毛细血管扩张明显，表面覆有少量细薄鳞屑（图1），无破溃，边界尚清，未见明显萎缩性瘢痕，触之有轻度浸润感，玻片压诊未见明显苹果酱样结节。

玉米产量三要素有粒重、穗粒数、每亩穗数,解析三要素的遗传学基础有助于开展玉米产量遗传改良。在粒重方面,课题组前期通过构建高度饱和的EMS籽粒突变体库,筛选出籽粒灌浆相关的突变体(籽粒突变、植株发育正常) 219个。通过图位克隆,鉴定出三个玉米籽粒灌浆关键基因Zm CTLP1、Mn6、OS1、HSP90.6,分别编码胆碱转运蛋白、信号肽酶、RWP-RK家族转录因子、热激蛋白。研究结果揭示了玉米籽粒灌浆过程中的养分吸收及Adavosertib分子量养分在籽粒内部胚和胚乳之间分配的分子调控机理,为阐明玉米籽粒灌浆的分子调控机制提供了新的线索。在穗粒数方面,克隆控制玉米穗行数新QTL-KRN5b,并对其分子机理进行了深入研究,同时也开展了穗更多行数的遗传改良;为了深入研究穗行数遗传学基础,开展了穗发育动态转录组分析;新玉米单倍体是籽粒双受精的产物,能够诱Redox biology发单倍体的诱导系也会严重影响籽粒的发育。鉴定出了玉米籽粒单倍体诱导新基因Zm PLD3,通过多基因叠加,能够提升单倍体诱导效率6～7倍,为进一步提升玉米单倍体育种效率和深入解析单倍体诱导分子机理奠定了很好的基础。相关研究成果发表在Nature Plants、New Phytologist、Plant Physiology、JIPB、Plant Journal等期刊,该研究为玉米产量性状综合遗传改良、分子育种提供支撑和新的基因资源。

目的：探讨右美托咪定对剖宫产术中缩宫素诱导的镇痛、子宫收缩的影响。方法：选取2021年2月-2022年6月在本院进行剖宫产手术孕妇96例，手术过程中静脉给予右美托咪定为右美托咪定组或生理盐水为对照组，每组48例。评估两组麻醉前(T0)、麻醉后10 min(T1)、右美托咪定后10 min(T2)和手术结束时(T3Pathologic grade)的心率(HR)、收缩压(SBP)和舒张压(DBP),视觉模拟(VAS)评分、Ramsay评分以及子宫收缩强度，记录两组术中不良反应。结MC3细胞培养果：两组与T0比较，T1、T2、T3时HR、SBP和DBP均有波动，且在使用右美托咪定和缩宫素后表现尤为明显，右美托咪定组比对照组更明显；T2、T3时右美托咪定组宫缩痛VAS评分(0.78±0.51分、0.88±0.41分)低于对照组(2.08±1.01分、2.45±0.87分),Ransay评分(2.45±1.04分、2.41±0.78分)高于对照组(1.47±0.88分、1.45±0.55分)(均P<0.05);子宫收缩评分无差异(P>0.05);右美托咪定组发生恶心(10.4%)、呕吐(2.1%)和低血压(27.www.selleck.cn/products/MK-17751%)比例均低于对照组(39.6%、12.5%、58.3%),心动过缓发生率(62.5%)高于对照组(31.3%)(均P<0.05)。结论：右美托咪定对剖宫产术中缩宫素诱导的子宫收缩无显著影响，镇痛镇静效果更好，利于减少并发症发生。

目的 探讨小骨窗显微术治疗高血压脑出血的效果。方法 选择高血压脑出血患者95例，采用随机数表法分为观察组48例和对照composite hepatic events组47例。对照组采用去骨瓣减压术治疗，观察组采用小骨LY2835219分子量窗显微术治疗。比较两组手术情况，包括手术时间、术中出血量、住院时间和血肿清除率；术后4周进行疗效评定，比较两组临床疗效；治疗前及治疗后15 d检测血清细胞间黏附分子1(ICAM-1)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、视黄醇结合蛋白4(RBP4)，治疗后15 d采用神经功能缺损量表（NIHSS）评估神经功能恢复情况、格拉斯哥预估评分（GOS）评分评估预后情况；记录术后30 d并发症的发生情况。结果 观察组总有效率为95.83%，对照组为82.98%，观察组高于对照组（P<0.05）。与对照组Bafilomycin A1化学结构比较，观察组手术时间、住院时间缩短，术中出血量降低，血肿清除率升高（P均<0.05）。两组治疗后血清ICAM-1、GM-CSF、RBP4水平均较治疗前降低，且观察组低于对照组；两组治疗后NIHSS评分降低，GOS评分升高，且观察组NIHSS评分低于对照组、GOS评分高于对照组（P均<0.05）。观察组并发症发生率低于对照组（P<0.05）。结论 高血压脑出血患者采用小骨窗显微术较去骨瓣减压术具有更好的治疗效果，并降低血清ICAM-1、GM-CSF、RBP4水平，能够改善患者预后，减少并发症的发生。

卡培他滨为基础的三联药物(卡培他滨+奥沙利铂+亚叶酸)是治疗肠癌肝转移的一线药物,但其毒副作用大,且易耐药,急需发展高效低毒的新药。基于双硫仑(DSF)联合铜离子具有抗肿瘤的潜力,本论文采用白蛋白(BSA)包载铜掺杂介孔硅(MSNs-Cu)为载体,负载DSF,研究其对肠癌肝转移的抑制作用。主要研究结果如下:1、DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒制备及其工艺优化:首先通过硬模板法制备球状二氧化硅,然后采用去模板的方法得到介孔硅,通过单因素法优化后得到的结果如下:十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的量0.5 g,三乙醇胺(TEA)的量为0.06 g,硅酸四乙酯(TEOS)的量为1.5 m L,温度为80℃。经过后续铜掺杂、连接白蛋白等所有步骤制备的DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒的最终粒径为160.8±20.7 nm,电位为-22.6±4.5 m V。2、DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒的表征:(1)Cu-MSNs-NH2的红外谱图中,3457 cm~(-1)处有-NH2的伸缩振动峰,并且在1653,1541cm~(-1)处有两个NH2的弯曲振动峰,证明NH2成功连接在介孔硅上。通过高效液相色谱法得到了DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒的载药量和包封率分别为:12.69%±2.47%,44.58%±1.32%。(2)扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)测得介孔硅和铜掺杂介孔硅排列紧密,呈现出圆球形态,并具有介孔结构。(3)X射线电子能谱(XPS)和能谱(EDS)测得介孔硅表面含铜量为4.74%。稳定性实验证明DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒在24 h能保持稳定,粒径和电位在160-180 nm、20-30 m V范围内。(4)BET测得Cu-MSNs的比表面积为670.28 m~2/g,孔径为5.77 nm。(5)体外释放量实验证明了DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒在48 h释放量为27.2±4.1%,72 h为48.7±5.1%,说明纳米粒能缓慢释放药物。结果表明制备的DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒能够对包载的药物进行缓释。3、强力霉素(DOX)联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒体外抑制CT26.WT细胞实验:(1)通过MTT法探究DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒对肠癌细胞的体外抑制活性,给药48 h后,DOX、DSF、DSF@Cu/MSNs-BSA、DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA、5-氟尿嘧啶组的IC_(50)值分别为37.98、30.82、13.05、6.82/17.14(DSF@Cu/MSNs-BSA/DOX)、25.92μM,72 h的IC_(50)值分别为18.88、8.57、6.02、2.38/5.95(DSF@Cu/MSNs-BSA/DOX)、8.52μM,在DOX、DSF@Cu/MSNs-BSA、DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA加入N-乙酰半胱胺酸之后48h的IC_(50)值为45.55、18.28、7.34/18.34μM(DSF@Cu/MSNs-BSA/DOX),72 h的IC_(50)值为21.66、8.18、4.45/11.13μM(DSF@Cu/MSNs-BSA/DOX),据此结果推测DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA对CT26.WT细胞具有较强的抑制能力,并且抑制能力与产生活性氧有关。(2)高内涵和流式细胞仪测定CT26.WT细胞对Cu-MSNs、DSF-Cu-MSNs和DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒的摄取情况,测得荧光强度分别为1200±102、1454±155、5009±selleck化学214(高内涵);50443.1±1022.1、37295.2±898.2、29082.2±679.3(流式)(n=3,P<0.01),据此推断BSA能增加CT26.WT对药物的摄取。高内涵成像测定DOX、DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒和DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒使CT26.WT细胞产生活性氧情况,测得荧光强度分别为1306±182、3090±272、3927±387,说明药物抑制CT26.WT细胞与活性氧有关。流式细胞仪评估线粒体膜电位,DOX和DSF@Cu/MSNs-BSA能导致线粒体膜电位的下降和丢失,异常细胞占比分别为61.84%、53.77%。(3)利用Pubchem、Swiss Target Prediction筛选DOX和DSF的体内活性成分的作用靶点,结果显示双硫仑的体内分解的活性成分二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDC)能与碳酸酐酶家族结合,DOX可能与MCL1和PIK3CA进行结合。(4)利用Pubchem、PDB蛋白数据库、Ahttps://www.selleck.cn/products/valemetostat-ds-3201.htmlutoduck Vina进行分子对接,结果显示DDC与CA9和CA12对接的结合能均小于0;DOX与MCL1和PIK3CA对接的结合能均小于0,说明药物的活性成分可以和筛选出的靶点进行结合。4、DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒抑制肠癌肝转移的体内活性研究:(1)DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒组的小鼠体重在第5天开始上升,而DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒组的小鼠在第8天才上升,推测DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒能降低毒性。(2)阴性对照组、DOX组、DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组、DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组和卡培他滨组的平均生存时间为(18.33±1.37 d)、(22.50±1.87 d)、(24.17±1.17d)、(27.67±1.75 d)、(28.00±1.78 d),结果表明DOImmediate accessX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组相较于卡培他滨组抗肠癌肝转移活性上无显著差异(n=6,P>0.05)。(3)DOX组、DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组、DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组和卡培他滨组的肿瘤抑制率分别为15.02%、21.38%、39.30%、36.99%,DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组的抑制率相较于单一给药组(DOX组,DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组)具有显著性差异(n=6,P<0.01),通过金氏公式得到q=1.18,表明二者具有协同效应。(4)观察各组药物小鼠的肝脏标本,DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组的肿瘤结节最少,说明DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒抗肠癌肝转移作用较强(n=6,P<0.01)。HE染色病理切片表明DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒能降低纳米粒的毒性以及增强其对肿瘤细胞的抑制作用。综上所述,推测DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒具有高效低毒的特点,具有成为抗肠癌肝转移二线药物的潜力,值得更深入的研究。

卡培他滨为基础的三联药物(卡培他滨+奥沙利铂+亚叶酸)是治疗肠癌肝转移的一线药物,但其毒副作用大,且易耐药,急需发展高效低毒的新药。基于双硫仑(DSF)联合铜离子具有抗肿瘤的潜力,本论文采用白蛋白(BSA)包载铜掺杂介孔硅(MSNs-Cu)为载体,负载DSF,研究其对肠癌肝转移的抑制作用。主要研究结果如下:1、DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒制备及其工艺优化:首先通过硬模板法制备球状二氧化硅,然后采用去模板的方法得到介孔硅,通过单因素法优化后得到的结果如下:十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的量0.5 g,三乙醇胺(TEA)的量为0.06 g,硅酸四乙酯(TEOS)的量为1.5 m L,温度为80℃。经过后续铜掺杂、连接白蛋白等所有步骤制备的DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒的最终粒径为160.8±20.7 nm,电位为-22.6±4.5 m V。2、DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒的表征:(1)Cu-MSNs-NH2的红外谱图中,3457 cm~(-1)处有-NH2的伸缩振动峰,并且在1653,1541cm~(-1)处有两个NH2的弯曲振动峰,证明NH2成功连接在介孔硅上。通过高效液相色谱法得到了DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒的载药量和包封率分别为:12.69%±2.47%,44.58%±1.32%。(2)扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)测得介孔硅和铜掺杂介孔硅排列紧密,呈现出圆球形态,并具有介孔结构。(3)X射线电子能谱(XPS)和能谱(EDS)测得介孔硅表面含铜量为4.74%。稳定性实验证明DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒在24 h能保持稳定,粒径和电位在160-180 nm、20-30 m V范围内。(4)BET测得Cu-MSNs的比表面积为670.28 m~2/g,孔径为5.77 nm。(5)体外释放量实验证明了DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒在48 h释放量为27.2±4.1%,72 h为48.7±5.1%,说明纳米粒能缓慢释放药物。结果表明制备的DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒能够对包载的药物进行缓释。3、强力霉素(DOX)联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒体外抑制CT26.WT细胞实验:(1)通过MTT法探究DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒对肠癌细胞的体外抑制活性,给药48 h后,DOX、DSF、DSF@Cu/MSNs-BSA、DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA、5-氟尿嘧啶组的IC_(50)值分别为37.98、30.82、13.05、6.82/17.14(DSF@Cu/MSNs-BSA/DOX)、25.92μM,72 h的IC_(50)值分别为18.88、8.57、6.02、2.38/5.95(DSF@Cu/MSNs-BSA/DOX)、8.52μM,在DOX、DSF@Cu/MSNs-BSA、DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA加入N-乙酰半胱胺酸之后48h的IC_(50)值为45.55、18.28、7.34/18.34μM(DSF@Cu/MSNs-BSA/DOX),72 h的IC_(50)值为21.66、8.18、4.45/11.13μM(DSF@Cu/MSNs-BSA/DOX),据此结果推测DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA对CT26.WT细胞具有较强的抑制能力,并且抑制能力与产生活性氧有关。(2)高内涵和流式细胞仪测定CT26.WT细胞对Cu-MSNs、DSF-Cu-MSNs和DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒的摄取情况,测得荧光强度分别为1200±102、1454±155、5009±selleck化学214(高内涵);50443.1±1022.1、37295.2±898.2、29082.2±679.3(流式)(n=3,P<0.01),据此推断BSA能增加CT26.WT对药物的摄取。高内涵成像测定DOX、DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒和DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒使CT26.WT细胞产生活性氧情况,测得荧光强度分别为1306±182、3090±272、3927±387,说明药物抑制CT26.WT细胞与活性氧有关。流式细胞仪评估线粒体膜电位,DOX和DSF@Cu/MSNs-BSA能导致线粒体膜电位的下降和丢失,异常细胞占比分别为61.84%、53.77%。(3)利用Pubchem、Swiss Target Prediction筛选DOX和DSF的体内活性成分的作用靶点,结果显示双硫仑的体内分解的活性成分二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDC)能与碳酸酐酶家族结合,DOX可能与MCL1和PIK3CA进行结合。(4)利用Pubchem、PDB蛋白数据库、Ahttps://www.selleck.cn/products/valemetostat-ds-3201.htmlutoduck Vina进行分子对接,结果显示DDC与CA9和CA12对接的结合能均小于0;DOX与MCL1和PIK3CA对接的结合能均小于0,说明药物的活性成分可以和筛选出的靶点进行结合。4、DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒抑制肠癌肝转移的体内活性研究:(1)DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒组的小鼠体重在第5天开始上升,而DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒组的小鼠在第8天才上升,推测DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒能降低毒性。(2)阴性对照组、DOX组、DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组、DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组和卡培他滨组的平均生存时间为(18.33±1.37 d)、(22.50±1.87 d)、(24.17±1.17d)、(27.67±1.75 d)、(28.00±1.78 d),结果表明DOImmediate accessX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组相较于卡培他滨组抗肠癌肝转移活性上无显著差异(n=6,P>0.05)。(3)DOX组、DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组、DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组和卡培他滨组的肿瘤抑制率分别为15.02%、21.38%、39.30%、36.99%,DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组的抑制率相较于单一给药组(DOX组,DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组)具有显著性差异(n=6,P<0.01),通过金氏公式得到q=1.18,表明二者具有协同效应。(4)观察各组药物小鼠的肝脏标本,DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒组的肿瘤结节最少,说明DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒抗肠癌肝转移作用较强(n=6,P<0.01)。HE染色病理切片表明DOX联合DSF@Cu/MSNs-BSA纳米粒能降低纳米粒的毒性以及增强其对肿瘤细胞的抑制作用。综上所述,推测DOX联合DSF@Cu-MSNs-BSA纳米粒具有高效低毒的特点,具有成为抗肠癌肝转移二线药物的潜力,值得更深入的研究。

橄榄来源的天然酚类化合物羟基酪醇,因其强抗氧化活性和抗癌保护特性而对人体有益,被广泛的应用于食品,医药保健品和化妆品等领域。目前报道的化学合成和天然提取获得羟基酪醇的方法仍存在较多的不足,相对而言,生物转化法具有绿色可持续,反应工艺简单,底物特异性高,不依赖于金属催化剂等优点,逐渐成为合成天然产物羟基酪醇的有利工具in vivo infection。在这项研究中,我们设计并重建了一条新型的四酶级联系统,将L-氨基酸氧化酶(LAAD)、α-酮酸脱羧酶(Pm KDC)、醛还原酶(Yah K)和葡萄糖脱氢酶(GDH)的基因共同于Escherichia coli BL21(DE3)内表达,使3,4-二羟基苯基丙氨酸(L-DOPA)依次通过脱氨、脱羧和还原反应最终转化为羟基酪醇。GDH的作用则是催化葡萄糖脱氢以实现辅因子NADH的再生,而NADH是Yah K催化合成羟基酪醇必需的氢供体。随后采取不同拷贝数质粒组合的策略来协调途径内酶的表达,以实现LAAD,Pm KDC,Yah K和GDH在级联反应中发挥出较好的协调性。本论文主要研究内容及结果如下:(1)多酶级联途径内酶的选择和体外验证。采用实验室前期筛选的来源于Cosenzaea myxofaciens的LAAD;来源于Proteus mirabilis JN458的Pm KDC;来源于Escherichia coli BL21的Yah K和来源于Bacillus subtilis ATCC 13952的GDH作为级联路径的酶催化剂。首先使用LAAD,Pm KDC,Yah K和GDH的酶提取液进行体外级联反应,HPLC法检测羟基酪醇的产生情况,证明了级联路径的可行性。(2)共表达E.coli重组工程菌株的构建及酶的表达水平优化。将aad L,pmkdc,yahk和gdh基因以双质粒共同表达的策略整合于E.coli BL21(DE3)内,以调节酶的相对活性同时平衡反应速率。成功构建了9株重组菌,确定Pm KDC为本途径最主要的限速酶,最终9株菌株中HTG7(E.coli BL21(DE3)/p RSF-aad L-pmkdc-yahk/p ET-gdIDN-6556化学结构h)内的各酶表达协调性最佳,www.selleck.cn/products/canagliflozin全细胞催化剂在4 h内催化生成的羟基酪醇的最高产量为36.40mmol·L~(-1)。(3)对重组菌株培养和转化条件进行系列优化。确定最优培养基组成为:15 g·L~(-1)甘油,25 g·L~(-1)酵母膏,20 g·L~(-1)蛋白胨,1.5 g·L~(-1)硫酸镁,2.2 g·L~(-1)磷酸二氢钾,9.4 g·L~(-1)磷酸氢二钾;最优诱导表达条件为:开始诱导的菌体浓度OD_(600)为0.8,IPTG诱导浓度为0.4 mmol·L~(-1),诱导温度为20℃;最优转化条件为:NAD~+浓度为0.3 g·L~(-1),温度为30℃,p H为7.0,湿菌体浓度为35 g·L~(-1),转速为200 r·min~(-1)。经系列优化后,羟基酪醇的产量提升至45.27 mmol·L~(-1)。随后,最适条件下,在5 L发酵罐内扩大生产羟基酪醇,最终在8 h内从60.91 mmol·L~(-1)的L-DOPA合成了56.85 mmol·L~(-1)(8.75 g·L~(-1))的羟基酪醇,时空生产率为1.1 g·L~(-1)·h~(-1)。最后利用乙酸乙酯多次萃取反应液,有机相经旋转蒸发仪蒸馏后得到色谱纯度较高的羟基酪醇,乙酸乙酯对羟基酪醇的萃取率高达95.9%。