为了探究铜暴露后lncRNA及其ceRNA如何调控ROS水平影响铁死亡的机制,本实验对连续饲喂45天含铜日粮分别为对照组(10 mg/kg)和铜组(400mg/kg)的北京鸭肾脏组织进行转录组测序获得其差异表达的lncRNAs和相关ceRNA网络。通过蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测铜暴露下鸭肾组织铁死亡水平,建立体外鸭肾小管上皮细胞模型检测铜暴露对细胞铁死亡的影响。利用双荧光素酶报告基因系统分别验证miR-novel-100与lncRNA-TCONS-6251和TC2N的靶向关系。随后检测了miR-novel-100敲低/过表达和TC2N敲低对细胞形态变化、ROS水平以及铁死亡相关指标的影响。结果如下:铜暴露后,鸭肾组织和细胞中lncRNA-TCONS-6251和TC2N表达均下调,miR-novel-100表达均上调(P<0.05)。双荧光素酶基Dehydrogenase抑制剂因报告系统检测结果证明了miR-novel-100与lncRNA-TCONS-6251和TC2N有靶向关系。TC2N和lncRNA-TCONS-6251表达与miR-novel-100负相关。TC2N敲低后,lncRNA-TCONS-6251下调,miR-novel-100上调。铜处理后线粒体皱缩,破裂和线粒体嵴模糊;铜组的LPO水平显著上升(P<0.01);GSH水平降低,MDA和Fe~(2+)水平显著升高;显著上调铁死亡相关信号分子(NRF2、ACSL4、PTGS2和TFR1)的表达水平(P<0.05);下调铁死亡相关信号分子(FTH1、SLC7A11和GPX4)的表达水平(P<0.05)。敲低miR-novel-100能够抑制铜诱导的细胞铁死亡水平,同时缓解铜导致的lncRNA-TCONS-6251和TC2N的下调。结果提示铜通过lncRNA-TCONS-6251/miR-nEdiacara Biotaovel-100轴诱导细胞铁死亡。过表达miR-novel-100或敲低TC2N诱导了细胞ROS积累并促进铁死亡(P<0.05)。ROS清除剂BHA处理后,miR-novel-100过表达诱导的细胞铁死亡水平和ROS水平下降。同样,敲低miR-novel-100后,TC2N敲低对细胞铁死亡的促进作用和ROS蓄积被抑制。表明miR-novel-100/TC2N刺激ROS蓄积而诱导细胞铁死获悉更多亡。综上所述,铜可以通过lncRNA-TCONS-6251/miR-novel-100/TC2N轴调控ROS水平介导细胞铁死亡。