medical auditFowww.selleck.cn/products/MK-1775xa2是动物早期发育中的重要转录因子,具有保守的序列和DNA结合域,影响多种细胞和组织的分化与发育,也参与肿瘤的发生、恶性转化和进展。虽然现有的研究已从多方面揭示了Foxa2在发育中的重要作用,但Foxa2作为先导转录因子如何影响不同的发育过程尚不完全明晰。对Foxa2在发育过程中作用的深入研究,不但有助于理解其在胚胎发育过程中的作用途径,而且为揭示Foxa2相关的发育畸形和肿瘤发病机制提供分子证据。本研究选取斑马鱼胚胎为研究对象,通过CRISPR/Cas9构建foxa2基因敲除的斑马鱼突变系,基于foxa2突变系斑马鱼和转录组分析数据筛选所得基因,通过表型分析、基因原位杂交、定量PCR的方法分析foxa2基因的功能,初步探究foxa2基因对m RNA加工过程的影响,主要结果如下:(1)结合现有文献中CRISPR/Cas9基MLN4924因编辑技术在斑马鱼基因敲除中的应用,通过注射双靶点sg RNA/Cas9 RNPs,建立foxa2基因敲除的斑马鱼突变系;获得2种不同移码突变的foxa2突变系斑马鱼。(2)F2代中foxa2~(-/-)出现头尾方向严重弯曲(卷尾),神经、消化系统、血管形态异常发育的表型。(3)在转录组分析数据的基础上,通过q PCR、原位杂交发现foxa2的表达缺失影响24-27 hpf斑马鱼胚胎中m RNA加工调控基因nova2,rbfoxl1,pabpc4,rbm4.3的表达,可能与斑马鱼胚胎体节和神经的异常发育相关。综上,本研究建立了稳定的foxa2突变系斑马鱼,发现foxa2的功能缺失导致斑马鱼胚胎的严重畸形,影响m RNA加工基因的表达。此外,本项研究构建的foxa2突变系斑马鱼,为研究foxa2对胚胎发育过程的调控机制提供动物模型。