目的:胰腺癌是常见的胃肠道恶性肿瘤之一,病理类型以胰腺导管腺癌为主。胰腺癌的五年生存率远低于其他癌症,发病机制不明确以及有效治疗靶点的缺失给胰腺癌的治疗带来巨大的困难。本研究旨在探索CERK L对胰腺癌增殖、迁移、侵袭的影响及其相关机制,进一步阐述胰腺癌的发病机制,为胰腺癌的治疗寻找新的靶点。方法:在本实验中,(1)利用GEPIA在线数据库分析胰腺癌组织与正常胰腺组织中CERKL mRNA的表达差异,利用免疫组织化学染色检测胰腺癌组织芯片胰腺癌组织和癌旁组织CERKL的蛋白表达水平,评分后分析胰腺癌组织及癌旁组织CERKL蛋白表达差异。(2)利用CCK-8实验、Transwell迁移及侵袭实验检测CERKL的高低表达对胰腺癌细胞生物Genetic basis学功能的影响,利用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)的方法检测EMT相关蛋白标志物的表达。此外,还通过尾静脉注射法建立胰腺癌血行转移小鼠动物模型,检测CERKL在小鼠体内对胰腺癌细胞转移的影响。(3)通过COSMIC数据库,分析CERKL的基因突变情况,检测CERKL突变后胰腺癌细胞迁移、侵袭能力的变化。利用生信分析预测可调节CERKL表达的E3酶并利用免疫共沉淀及WB技术验证E3连接酶对CERKL的作用。(4)通过质谱检测(非靶标脂质组学分析)的方法,分析CERKL对胰腺癌细胞脂质的影响。利用WB、免疫荧光检测、Elisa技术检测CERKL对自selleckchem GW4869噬及脂质相关基因表达的影响,对CREKL在胰腺癌中的发生发展机制进行探讨。结果:CERKL mRNA及蛋白表达水平在胰腺癌组织中均显著升高。同时,CERKL高表达促进胰腺癌细胞迁移侵袭的能力,低表达则抑制胰腺癌的细胞迁移侵袭,但CERKL对胰腺癌细胞的增殖能力无明显影响。体内实验发现,CERKL可明显促进小鼠中胰腺癌细胞的转移。COSMIC数据库检索发现,CERKL在胰腺癌样本中存在L296V突变体。与CERKL相比,CERKL-L296V可进一步促进胰腺癌细胞迁移侵袭的能力。生信分析提示TRIM21与CERKL表达量存在负相关。进一步发现,TRIM21可对CERKL蛋白水平进行负向调节且两者存在相互作用。与CERKL相比,CERKLL296V与TRIM21的相互作用减弱,且泛素化水平降低。CERKL低表达后可增加胰腺癌细胞内磷脂酰肌醇(Phosphatidyl inositol,PI)的含量。CERKL低表达可增加磷脂酰肌醇3-磷酸(Phosphatidylinositol 3-phosphate,PI3P)含量、自噬指示因子的蛋白水平及荧光亮度。CERKL获悉更多过表达后,PI3P及自噬指示因子的变化相反,且CERKL-L296V的作用较CERKL更强。最后发现,CERKL高表达可抑制PI相关因子PLPP2的蛋白水平,CERKL低表达则结果相反。结论:CERKL在胰腺癌中高表达,并促进胰腺癌迁移、侵袭的能力,L296V突变增加CERKL的促肿瘤作用。胰腺癌中存在TRIM21/CERKL/自噬这一信号调节通路。