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背景我国老年人的高血压和认知功能障碍患病形势不容乐观，且高血压会增加认知功能障碍的发生风险，因selleck激酶抑制剂此探讨防治老年高血压患者认知功能障碍的方法并在社区进行推广具有十分重要的意义。目的 探讨休闲身体活动对社区老年高血压患者认知功能的影响。方法 于2020年8—12月，采取多阶段随机抽样法，抽取在武汉市社区卫生服务中心接受慢性病管理的≥65岁高血压患者770例。采用问卷调查，获取受试者的一购买BMN 673般资料、休闲身体活动情况（包括6项认知活动和11项体育活动）、认知功能情况[采用简易精神状态评价量表（MMSE）测量]。采用多因素Logistic回归分析老年高血压患者发生认知功能障碍的影响因素，采用多元线性回归分析老年高血压患者休闲身体活动得分对MMSE各维度得分的影响，采用多因素Logistic回归分析17项休闲身体活动每日参与频率对老年高血压患者发生认知功能障碍的影响。结果 社区老年高血压患者的认知功能障碍检出率为39.4%(303/770)。是否发生认知功能障碍患者的性别、年龄、受教育程度、高血压病程、休闲身体活动得分比较，差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，高血压病程[OR(95%CI)=1.02(1.01,1.03)]、休闲身体活动得分[OR(95%CI)0.98(0.96,0.99)]是老年高血压患者发生认知功能障碍的影响因素；进一步分析发现，休闲身体活动得分是MMSE中注意力与计算力维度得分[b(95%CI)=0.02(0.01,0.03)]、语言能力维度得分[b(95%CI)=0.02(0.01,0.03)]的影响因素。将休闲身体活动方式细化分类后，多因素Logistic回归分析结果显示，每日参与写作[b(95%CI)=0.34(0.12,0.95)]、每日参与棋牌游戏[b(95%CI)=0.21(0.06,0.72)]的老GDC-0068试剂年高血压患者认知功能障碍发生率低于偶尔/从不参与该项活动者。结论 休闲身体活动是老年高血压患者认知功能的保护性因素，主要影响认知功能的注意力与计算力、语言能力两个维度。每日参与写作、每日参与棋牌游戏对老年高血压患者的认知功能起积极作用。

目的：观察小檗碱与吴茱萸碱联用对结直肠癌HCT116、RKO细胞迁移、侵袭能力的影响，并探究其可能机制。方法：细胞增殖与活性检测-8(cell counting kit-8，CCK8）法检测小檗碱（30 μmol·L~(-1)）、吴茱萸碱（0.8 μmol·L~(-1)）及两药联用（30+0.8 μmol·L~(-1)）对HCT116及RKO细胞增殖的抑制作用；划痕实验、Transwell实验检测小檗selleck化学碱（30μmol·L~(-1)）、吴茱萸碱（0.8 μmol·L~(-1)）及两药联用（30+0.8 μmol·L~(-1)）对HCT116及RKO细胞迁移、侵袭能力的影响；蛋白免疫印迹法 (Western blot) 法检测小檗碱（30μmol·L~(-1)）、吴茱萸碱（0.8μmol·L~(-1)）及两药联用（30+0.8 μmol·L~(-1)）对HCT116及RKO细胞中上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）蛋白表达的影响。结果：与空白组相比，小檗碱组（30 μmol·L~(-1)）和吴茱萸碱组（0.8 μmol·L~(-1)）对HCT116及RKO细胞增殖、迁移、侵袭能力无明显抑制作用，而两药联用组（30+0.8 μmol·L~(-1)）能显著抑制HCT116及RKO细胞增殖、迁移、侵袭的能力(P<0.01)；与空白Protein Tyrosine Kinase抑制剂组相比，小檗碱组（30 μmol·L~(-1)）和吴茱萸碱组（0.8 μmol·L~(-1)）对HCT116及RKO细胞中PI3K、N-cadherin、E-cadherin蛋白的表达无明显作用，而两药联用组（30+0.8 μmol·L~(-1)）能显著降低HCT116及RKO细胞中PI3K、N-cadherin蛋白的表达Rapamycin临床试验（P<0.01），升高E-cadherin蛋白的表达（P<0.01）。其中，吴茱萸碱组（0.8 μmol·L~(-1)）也能显著抑制HCT116及RKO细胞中Akt蛋白的表达（P<0.05），但这种抑制作用小于两药联用。结论：小檗碱与吴茱萸碱联用能够显著抑制结肠癌HCT116、RKO细胞迁移、侵袭能力，发挥“1+1＞2”的增效作用，其作用机制可能与下调PI3K、Akt蛋白表达水平相关。

目的 探讨肺总顺应性(C)的容量反应性以及高血压对其反应能力的影响。方法 选择广东省广州市红十字会医院行择期平卧位手术的患者65例为研究对象，记录患者机械通气后不同时点[5 min(t_1)、10 min(t_2)、15 min(t_3)、20 min(t_4)、25 min(t_5)、30 min(t_6)]的C、气道平台压(p_(plat))、气道峰压(p_(peak))、心率(HR)、平均动脉压(MAP)、心排血量(CO)、每搏量变异度(SVV)、每搏输出量(SV)。计算不同时间段[T_1(5～10 min)、T_2(>10～15 min)、T_3(>15～20 min寻找更多)、T_4(>20～25 min)、T_5(>25～30 min)]患者C、SR428 molecular weightV、SVV的变化量(△C、△SV、△SVV)。采用日本科林动脉硬化检测仪采集高血压及非高血压者的肱踝脉搏波传导速度(BaPWV)。结果 t_1至t_6时点，患者HR、MAP、SVV、SV、CO、p_(此网站plat)、p_(peak)、C比较，差异无统计学意义(P>0.05)。受试者分层相关性分析结果显示，T_1至T_5 5个时间段，所有受试者的△C与△SVV的相关系数(r)分别为-0.626、-0.650、-0.676、-0.588、-0.518,△C与△SV的r分别为0.744、0.772、0.785、0.698、0.681; T_1至T_5 5个时间段，△C与△SVV以及△C与△SV的相关性在非高血压受试者中增强，在高血压受试者中减弱，并在T_3时间段高血压及非高血压受试者的△C与△SVV以及△C与△SV的相关性最强。高血压与非高血压者的BaPWV比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 C具有容量反应能力，高血压能够影响其反应能力。

目的 调查我国西北地区社区人群中既往罹患心血管疾病患者的二级预防用药情况，并探Selleckchem EPZ6438索其与个体特征之间的相关性。方法 本研究基于“高危筛查项目”，选取2015—2019年西北地区43E7080分子式个县/区35～75岁的常住居民，通过调查问卷收集调查对象自报的缺血性心脏病或缺血性脑卒中病史以及药物使用情况。使用多变量混合效应模型分析个体特征与二级预防用药的相关性。结果 14 212例患缺血性心脏病和/或缺血性脑卒中患者中，报告使用抗血小板或他汀类药物的比例为22.6%。多因素分析结果显示，高龄（55～<65和65～75岁）、中学及以上、已婚、超重或肥胖、合并高血压的调查对象更倾向于使用抗血小板或他汀类药物（P <0.05）。女性、农民、农Navitoclax试剂村地区、吸烟的调查对象服用抗血小板或他汀类药物的可能性较低（P <0.05）。结论 我国西北地区缺血性心脏病和/或缺血性脑卒中患者中，抗血小板药物及他汀类药物的应用不足，不同个体特征药物使用情况存在差异。

高血压作为一种比较常见的临床病症，是一种发病率较高的慢性病之一。在现有临床研究中发现，高血压的发病率在逐年提高。且血压水平随年龄逐渐升高，其中，收缩压升高Protein Tyrosine Kinase抑制剂情况更为明显，也是导致脑血管疾病的独立危险因素，增加了对生命安全的威胁。所以，在这种情况下应有强化的治疗指导方案。考虑到高血压发病之后的表现不同，所以其治疗的难度也会有所不同。以难治性高血EPZ-6438分子式压为例，该病的发病率约为6.1%，由于患者血压存在反复升高问题，就需要做出Ipatasertib抑制剂的治疗指导分析。鉴于此，本文以综述视角，就老年难治性高血压治疗研究进展进行了分析，主要阐述老年难治性高血压的定义，对其发病诱因以及病变表现做出评价。并且对该病的治疗进展做出评价，以期在本文研究帮助下，能够为老年难治性高血压的临床治疗治疗提供帮助。

目的研究益气养阴活血汤辅助激光治疗糖尿病视网膜病变（diabeticretinopathy，DR）对可溶性selleckchem细胞粘附分子（solubleintercellularadBMN 673hesionmolecule-1，sICAM-1）、结缔组织生长因子（connectivetissuegrowthfactor，CTGF）水平的影响。方法选择河南省中医院收治的60例DR患者作为研究对象，将其随机分为观察组和对照组，各30例，其中对照组使用视网膜激光光凝进行治疗，观察组在对照组基础上加服益气养阴活血汤。观察两组临床疗效，比较两组治疗前1d和治疗后3个月中医证候积分、眼部相关指标（黄斑厚度、血管瘤体积、视野灰度值、出血斑面积）、血清学指标[sICAM-1、CTGF、肿瘤坏死因子（tumournecrosisfactor-α，TNF-α）、转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）、核因子-κB（nuclearfactorkappa-B，NF-κB）]，观察并记录治疗期间不良反应发生情况。结果与对照组（73.33%）相比，观察组（93.33%）治疗总有效率较高，P＜0.05；治疗后，观察组视物昏花、眼睛干涩、五心烦热、头晕头痛、口渴喜饮证候积分及总分均有所降低，对照组视物昏花、眼睛干涩证候积分及总分有所降低，P＜0.05；治疗后，与对照组相比，观察组视物昏花、眼睛干涩、五心烦热、头晕头痛、口渴喜饮证候积分及总分较低，P＜0.05；治疗后，两组黄斑厚度、血管瘤体积、视野灰度值、出血斑面积均有所下降，P＜0.05；治疗后，与对照组相比，观察组黄斑厚度、血管瘤体积、视野灰度值、出血斑面积较小，P＜0.05；治疗后，两组sICAM-1、CTGF、TNF-α水平均有所降低，P＜0.05；治疗后，与对照组相比，观察组sICAM-1、CTGF、TNF-α水平较低，P＜0.05；治疗后，两组TGF-β、NF-κB水平均有所降低，P＜0.05；治疗后，与对照组相比，观察组PD0325901使用方法TGF-β、NF-κB水平较低，P＜0.05；治疗期间，观察组发生食欲减退1例，暂时性高眼压2例，对照组暂时性高眼压1例，两组不良反应发生率无明显差异（χ~(2)=0.268，P=0.605）。结论益气养阴活血汤辅助视网膜激光光凝治疗DR疗效较好，有利于改善视物不清、眼睛干涩等多种症状，可降低血清sICAM-1、CTGF水平，其机制可能与TGF-β、NF-κB信号通路的调控作用有关。

ＯＡ 是老年人中最常见的慢性关节疾病，主要表现为关节软骨逐渐退化，滑膜发炎疼痛，严重者可能导致患者残疾［１２］。关节软骨是一种高度特化组织，主要由软骨细胞和细胞外基质组成，软骨细胞是形成关节软骨的唯一细胞，正常软骨细胞能够分泌细胞外基质， 维持软骨组织整体形态，并增加软骨组织韧度，但在炎 症条件下，炎症细胞因子和基质降解酶的过度产生，引 起细胞外基质的合成和降解失衡，从而引起关节软骨破坏、骨质增生等病理改变［１３］。本研究通过切断大鼠前交叉韧带和内侧副韧带，并摘除内侧半月板构建ＯＡ 大鼠模型，ＨＥ 染色结果表明模型组大鼠关节软骨表面粗糙，表层不完整，且出现局部软骨增厚和软骨纤 维化，细胞排列混乱，细胞因损伤出现簇集现象，与假手术组大鼠比较，ＯＡ 模型大鼠压痛阈值、热痛阈值显著降低，Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分显著升高，提示 ＯＡ 大鼠模型构建成功。细胞凋亡在维持人体内各组织稳态和调节 正常胚胎发育过程中起着关键的作用，研究表明在人ＯＡ 软骨细胞中发现了与 ＯＡ 有关的凋亡，而在正常软骨细胞中未发现［１４］，软骨细胞凋亡导致细胞外基质降解是 ＯＡ 发生和进展的主要原因［１５］。本研究结果表明 ＯＡ 组大鼠软骨细胞凋亡数目显著高于假手术组，与Ｓｈａｏ等［３］研究结果一致，提示软骨细胞凋亡可能与 ＯＡ 的发生有关。ＯＡ 是一种由多种因素介导的慢性炎症反应，炎症反应发生在 ＯＡ 的整个进展过程中，ＴＮＦ－α及ＩＬ－１β是常见的炎症细胞因子，有研究表明 ＴＮMK-1775分子量Ｆ－α及ＩＬ－１β是诱导软骨细胞凋亡和破坏软骨的关键细胞因子［１６］，本研究结果表明 ＯＡ 大鼠血清 ＴＮＦ－α及ＩＬ－１β水平显著高于假手术组，提示炎症细胞因子与 ＯＡ 的发生有关。
夏枯草属于唇形科多年生草本植物，是一种常见的中草药，具有清肝火、明目、消肿、散结等功效［１７］。夏枯草含有三萜类、多糖类、黄酮类、甾体类和有机酸类等多种化合物成分，具有降血糖、降血压、抗肿瘤、抗炎、退热等多种病理作用［１８］。李坤阳等［５］研究表明夏枯草黄酮能够减轻牙周炎大鼠炎性程度，对大鼠牙周 炎有很好的治疗效果。本研究发现夏枯草黄酮能够抑 制 ＯＡ 大鼠软骨组织损伤，抑制软骨细胞的凋亡和炎症因子 ＴＮＦ－α及ＩＬ－１β水平，提高大鼠压痛阈值和热痛阈值，并降低大鼠 RapamycinＭａｎｋｉｎ’ｓ评分，提示夏枯草黄酮对 ＯＡ 治疗具有一定的疗效，猜测可能与抑制炎症因子和软骨细胞凋亡有关，具体机制有待进一步研究。
ＲｈｏＡ 是 Ｒｈｏ家族的一个小 ＧＴＰａｓｅ单倍，在人体正常组织、胚胎组织和干细胞在内的所有组织中均有表达，ＲＯＣＫ 属于丝氨酸／苏氨酸激酶家族，是 ＲｈｏＡ 的下游效应因子，ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 信号通路与细胞生长、分化和凋亡等多种细胞过程有关，参与 ＯＡ、糖尿病、神经性障碍、癌症等多种疾病的发生［１９］。ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 信号通路能够被 ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）等炎性介质诱导激活，诱导 ＯＡ 中关节软骨的降解，参与 ＯＡ 的发生发展［２０］。本研究结果表明 ＯＡ 组大鼠软骨组织中 ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 蛋白表达显著高于假手术组，提示 ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 信号通路与 ＯＡ 的发生有关。Ｙ－ ２７６３２是 ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 信号通路的抑制剂［１０］，本研究中 Ｙ－２７６３２ 组大鼠压痛阈值和热痛阈值显著升高， Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分显著降低，且 ＨＥ 染色结果表明 Ｙ－２７６３２能够减轻 ＯＡ 大鼠软骨组织损伤程度，减少大鼠软骨细胞的凋亡，进一步提示 ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 信号通路参与 ＯＡ 的发生，猜测可能是炎性因子激活 ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ信号通路，导致软骨细胞的凋亡，引起 ＯＡ。本研究还发现夏枯草黄酮低、中、高剂量组大鼠软骨组织中 ＲｈｏＡ及 ＲＯＣＫ 蛋白表达显著低于 ＯＡ 组，且 Ｙ－２７６３２组大鼠软骨病理组织损伤程度、软 骨细胞凋亡数及 ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ 蛋白表达与夏枯草黄酮高剂量组无显著差异，提示夏枯草黄酮可能通过抑制 ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 信号通路，进而抑制软骨细胞的凋亡，减轻大鼠软骨损伤，具体机 制有待进一步探讨。
综上所述，夏枯草黄酮能够抑制 ＯＡ 大鼠软骨细胞的凋亡，减轻大鼠关节软骨损伤，可能与抑制 ＲｈｏＡ及 ＲＯＣＫ 信号通路有关。本研究仅通过大鼠实验探讨了夏枯草黄酮在 ＯＡ 中的可能机制，下一步需结合细胞实验和临床研究，进一步分析其在 ＯＡ 治疗中的效应和可能机制，为 ＯＡ 治疗提供新思路。ABT-199化学结构

１．１ 材料
１．１．１ 动物 雄性ＳＰＦ 级ＳＤ 大鼠（７～８ 周龄，体质量（２４０±２０）ｇ），购自北京唯尚立德生物科技有限公司，生产许可证号为 ＳＣＸＫ（京）２０１８－００４４，动物质量合格证号为 ＺＳ－２０２０－０６１７，大鼠饲养于通风良好的实验室普通清洁环境（温度２２～２５ ℃，相对湿度５０％ ～ ７０％），所有大鼠均可自由获得食物和水，适应性饲养 １周。本研究经北京朝阳急诊抢救中心伦理委员会批准。
１．１．２ 主要药品、试剂及仪器 夏枯草黄酮（原料药，纯度为９９．９５％，批号为 Ｃ１０７８－１９）购自陕西天瑞生物技术有限公司，将夏枯草黄酮和生理盐水配制成浓度为６．１２５，１２．２５０，２４．５００ ｍｇ／ｋｇ 的混悬液；ＲｈｏＡ 通路抑制剂（Ｙ－２７６BMN 673３２）（批号为Ｓ１５４１）购自美国 Ｓｅｌｌｅｃｋ

公司；大鼠肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）（批号为 ＳＹＩＮ－ ０２７８６）、白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）（批号为 ＳＹＩＮ－０２１８７）酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）试剂盒购自上海双赢生物科技有限公司；苏 木精－伊 红 （ＨＥ）染 色试剂盒 （批 号为Ｃ０１０５Ｍ）、一步法原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）细胞凋亡检测试剂盒（批号为 Ｃ１０８６）、４′，６－二脒基－２－苯基吲哚
（ＤＡＰＩ）染色液（批号为 Ｃ９５１７３）购自上海碧云天生物技术有限公司；兔 抗鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－３
（Ｃａｓｐａｓｅ－３）（批 号 为 ａｂ１８４７８７）、ＲｈｏＡ （批 号 为 ａｂ１８９４９４）、ＲＯＣＫ（批号为ａｂ２１０４９８）、甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）（批号为ａｂ２０１７９６）单克隆抗体、山羊抗兔二抗（批号为ａｂ１５００７７）购自英国ａｂｃａｍ 公司；电子压痛仪（型号为 ＹＬＳ－３Ｅ）购自天津诺雷信达科技有限公司；足底热测痛仪（型号为 ＢＷ－Ｐｌａｎｔａｒ３９０）购自美国ＩＩＴＣ 公司；酶标仪（型号为 ＨＢＳ－１０９６Ａ）购自深圳市良谊实验室仪器有限公司；荧光显微镜（型号为ＤＭ２５００）购自德国 ＬＥＩＣＡ 公司；凝胶成像系统（型号为 Ｇｅｌ－Ｄｏｃ）购自美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司。
１．２ 方法
１．２．１ 模型构建 参照文献［７］的方法进行造模，随机选取６０只大鼠，３％戊巴比妥钠腹部麻醉，仰卧位固定，无菌条件下，眼科剪沿右后膝关节前侧纵向切开皮 肤组织，暴露关节腔，切断前交叉副韧带、内侧副韧带， 摘除内侧半月板，操作过程中避免软骨损伤。另取１２只大鼠仅剪开皮肤暴露关节腔，作为假手术组。手术完成后，消毒并对关节囊和皮肤进行缝合，之后放于笼中，自由活动。术后每只大鼠肌内注射４０万单位青霉素，１ 次／ｄ，连 续 ３ ｄ，预 防关节感染。 关节炎指数
（ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＩｎｄｅｘ，ＡＩ）评分≥４分，则视为造模成功［８］，本次实验中所有 ＯＡ 模型均构建成功。
１．２．２ 分组及给药 造模１周后，ＯＡ 大鼠随机分为 ＯＡ 组、夏枯草黄酮低、中、高剂量组、Ｙ－２７６３２ 组，每组１２只。假手术组和 ＯＡ 组大鼠均给予生理盐水灌胃，夏 枯 草 黄 酮 低、中、高 剂 量 组 分 别 给 予６．１２５， １２．２５０，２４．５００ ｍｇ／ｋｇ 夏枯草黄酮灌胃［９］，Ｙ－２７６３２组给５ｍｇ／ｋｇ的 Ｙ－２７６３２灌胃［１０］，各组灌胃体积均是 １０ ｍＬ／ｋｇ，１次／ｄ，连续８周。PD0325901
１．２．３ 大鼠压痛阈值、热痛阈值检测 末次给药后 ２４ｈ，大鼠用圆桶固定，电子压痛仪扁型头压向大鼠患侧后足背，大鼠鸣叫或挣扎时的压力值即为压痛阈值。大鼠置于透明有机玻璃箱内，足底热测痛仪置于大鼠患侧足底中央，打开仪器计时，大鼠鸣叫或抬腿回避时所用时间即为热痛阈值，测定时间不超过２０ｓ，温度不超过３０ ℃。压痛阈值、热痛阈值每只大鼠均测量 ３次，取平均值。
１．２．４ 组织取材及保存 ３％戊巴比妥钠腹部麻醉大鼠，腹 主动脉取血，离 心，收 集上清至新离心管中，
－８０ ℃保存。颈椎脱臼法处死大鼠，无菌条件下取大鼠右侧膝关节股骨髁关节，固 定于 ４％ 多聚甲醛中２４ｈ，１０％乙二胺四乙酸脱钙液脱钙 ８ 周，脱钙完成后，弃脱钙液，清水漂洗３ｈ。切出股骨髁关节软骨， 分为两部分，一部分梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡组织包埋；另一部分保存于－８０ ℃ 冰箱，用于后续蛋白免疫印迹实验检测。
１．２．５ ＥＬＩＳＡ 法检测大鼠血清 ＴＮＦ－α及ＩＬ－１β水平
ＥＬＩＳＡ试剂盒对大鼠血清ＴＮＦ－α及ＩＬ－１β水平进行检测，实验严格按照试剂盒说明书进行操作。
１．２．６ ＨＥ 染色法观察大鼠关节软骨形态变化 全自动切片机对石蜡标本进行４μｍ 切片，ＨＥ 染色试剂盒染色，透明，封片，显微镜下观察大鼠关节软骨形态变 化 。 每 张 切 片 随 机 选 取 ５ 个 视 野 拍 照 ， 参 照Ｍａｎｋｉｎ’ｓ关节软骨病理评分标准［１１］，根据大鼠软骨组织病理改变情况对大鼠进行评分，Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分越高表示软骨组织病理损伤越严重。
１．２．７ ＴＵＮＥＬ法检测大鼠软骨细胞凋亡情况 全自动切片机对石蜡组织进行４μｍ 切片，常规脱蜡至水，不含ＤＮＡ 酶的蛋白酶Ｋ 工作液处理１５ｍｉｎ，ＰＢＳ漂洗，加入 ＴＵＮＥＬ 反应液，ＰＢＳ 配置的３％ 过氧化氢溶液中 ３７ ℃孵育２０ ｍｉｎ，ＰＢＳ 漂洗，加５０μＬ ＴＵＮＥＬ 检测液
（绿色），ＤＡＰＩ染核，３７ ℃遮光孵育６０ ｍｉｎ；ＰＢＳ 漂洗，
抗荧光淬灭封片液封片，荧光显微镜下观察，随机选取５个视野，计数凋亡细胞，取平均值。
１．２．８ 蛋 白 免 疫 印 迹 法 检 测 大 鼠 软 骨 组 织 中 Ｃａｓｐａｓｅ－３、ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ 蛋白表达 取－８０ ℃ 冰箱中保 存 的 大 鼠 软 骨 组 织，研 磨 成 粉，装 至 预 冷 的１．５ ｍＬ离心管中，加入蛋白裂解液，冰上裂解３０ ｍｉｎ， ４ ℃，１５０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ，转移上清液至新离心管中，ＢＣＡ 蛋白试剂盒Navitoclax检测蛋白浓度。之后进行凝胶电泳，电 泳 结 束 后，转 膜，封 闭，分 别 加 入 兔 抗 鼠Ｃａｓｐａｓｅ－３、ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ、ＧＡＰＤＨ 一抗稀释液（均是１∶５００ 稀释），４ ℃孵育过夜，ＴＢＳＴ 洗膜，加入山羊抗兔二抗稀释液（１∶１０００稀释），室温孵育１ｈ，ＴＢＳＴ 洗膜。蛋白凝胶成像系统成像，ＩｍａｇｅＰｒｏＰｌｕｓ６．０ 图像软件分析蛋白条带灰度值。

２．１ 各组大鼠压痛阈值及热痛阈值比较
与假手术组比较，ＯＡ 组大鼠压痛阈值、热痛阈值显著降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；与 ＯＡ 组比较，夏枯草黄酮低、中、高剂量组大鼠压痛阈值、热痛阈 值显著升高，随着夏枯草黄酮剂量的增加，压痛阈值、热痛阈值逐渐升高，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；夏枯草黄酮高剂量组和 Ｙ－２７６３２ 组大鼠压痛阈值、热痛阈值比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），与假手术组比较，ＯＡ 组大鼠血清 ＴＮＦ－α及ＩＬ－１β水平显著升高，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；与 ＯＡ组比较，夏枯草黄酮低、Ipatasertib IC50中、高剂量组大鼠血清 ＴＮＦ－α 及ＩＬ－１β水平显著降低，随着夏枯草黄酮剂量的增加，血清 ＴＮＦ－α及ＩＬ－１β水平逐渐降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；夏枯草黄酮高剂量组和 Ｙ－２７６３２ 组大鼠血清 ＴＮＦ－α及ＩＬ－１β 水平比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）
２．３ 各组大鼠骨关节软骨形态比较
假手术组大鼠关节软骨结构清晰，排列规整，表层光滑无缺损，各层细胞排列整齐，分布均匀；ＯＡ 组大鼠关节软骨表层粗糙且不完整，软骨纤维化明显，细胞排列紊乱；夏枯草黄酮各剂量组、Ｙ－２７６３２组大鼠表层缺损程度显著轻于 ＯＡ 组，表层细胞结构正常，但部分区域仍存在细胞排列紊乱现象，随着夏枯草黄酮浓度 的增加，软骨损伤逐渐减轻；夏枯草黄酮高剂量组与Ｙ－２７６３２ 组两组间大鼠骨关节软骨形态差异不明显，见图１。
与假手术组比较，ＯＡ 组大鼠 Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分显著升高（Ｐ＜０．０５）；与 ＯＡ 组比较，夏枯草黄酮低、中、高剂量组大鼠 Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分显著降低，随着夏枯草黄酮剂量的增加，Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分逐渐降低（Ｐ＜０．０５）；夏枯草黄酮高剂量组和 Ｙ－２７６３２ 组大鼠 Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见表３。
表３ 各组大鼠 Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分比较（ｘ±ｓ，ｎ＝１２）组别 Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分／分假手术组 ０．５６±０．１７
ＯＡ 组 ９．２３±２．１５１）
夏枯草黄酮低剂量组 ７．３５±１．９４２）
夏枯草黄酮中剂量组 ５．４２±１．７８２）３）
夏枯草黄酮高剂量组 ３．１１±１．２０２）３）４）
Ｙ－２７６３２组 ３．２５±１．２４２）３）４）
注：１）与假手术组比较，Ｐ＜０．０５；２）与 ＯＡ 组比较，Ｐ＜０．０５； ３）与夏枯草黄酮低剂量组比较，Ｐ＜０．０５；４）与夏枯草黄酮中剂量组比较，Ｐ＜０．０５。
２．４ 各组大鼠软骨细胞凋亡数及软骨组织 Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达与假手术组比较，ＯＡ 确认细节组大鼠软骨细胞凋亡数及软骨组织 Ｃａｓｐａｓｅ－３ 蛋白表达显著升高，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；与 ＯＡ 组比较，夏枯草黄酮低、中、高剂量组大鼠软骨细胞凋亡数及软骨组织 Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达显著降低，且随着夏枯草黄酮剂量的增加，大鼠软骨细胞凋亡数及软骨组织 Ｃａｓｐａｓｅ－３ 蛋白表达逐渐降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；夏枯草黄酮高剂量组和 Ｙ－２７６３２ 组大鼠软骨细胞凋亡数及软骨组织 Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见表４及图２－图３。

表４ 各组大鼠软骨细胞凋亡数及软骨组织 Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达比较（ｘ±ｓ，ｎ＝１２）
组别 细胞凋亡数／个 Ｃａｓｐａｓｅ－３／ＧＡＰＤＨ
假手术组 １２．３４±２．１８ ０．２６±０．０４
ＯＡ 组 ５４．８５±４．７２１） ０．８３±０．０９１）
夏枯草黄酮低剂量组 ４２．７６±３．９４２） ０．６９±０．０７２）
夏枯草黄酮中剂量组 ３１．５２±３．６９２）３） ０．５２±０．０４２）３）
夏枯草黄酮高剂量组 １５．９３±３．１１２）３）４） ０．３３±０．０５２）３）４）
Ｙ－２７６３２组 １７．８６±３．１４２）３）４） ０．３１±０．０４２）３）４）
注：１）与假手术组比较，Ｐ＜０．０５；２）与 ＯＡ 组比较，Ｐ＜０．０５； ３）与夏枯草黄酮低剂量组比较，Ｐ＜０．０５；４）与夏枯草黄酮中剂量组比较，Ｐ＜０．０５。
２．５ 各组大鼠软骨组织 ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ 通路蛋白表达比较与假手术组比较，ＯＡ 组大鼠软骨组织 ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ 蛋白表达显著升高，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；与 ＯＡ 组比较，夏枯草黄酮低、中、高剂量组大鼠软骨组织 ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 蛋白表达显著降低，随着夏枯草黄酮剂量的增加，ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 蛋白表达逐渐降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；夏枯草黄酮高剂量组和 Ｙ－２７６３２组大鼠软骨组织 ＲｈｏＡ 及 ＲＯＣＫ 蛋白表达比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）Y-27632
组别 ＲｈｏＡ／ＧＡＰＤＨ ＲＯＣＫ／ＧＡＰＤＨ
假手术组 ０．３１±０．０３ ０．４２±０．０５
ＯＡ 组 ０．８７±０．０７１） ０．９５±０．０９１）
夏枯草黄酮低剂量组 ０．６９±０．０６２） ０．７３±０．０７２）
夏枯草黄酮中剂量组 ０．４５±０．０４２）３） ０．６５±０．０６２）３）
夏枯草黄酮高剂量组 ０．３６±０．０５２）３）４） ０．４６±０．０５２）３）４）
Ｙ－２７６３２组 ０．３８±０．０４２）３）４） ０．４８±０．０４２）３）４）
注：１）与假手术组比较，Ｐ＜０．０５；２）与 ＯＡ 组比较，Ｐ＜０．０５； ３）与夏枯草黄酮低剂量组比较，Ｐ＜０．０５；４）与夏枯草黄酮中剂量组比较，Ｐ＜０．０５。

目的：探讨夏枯草黄酮对骨关节炎（ＯＡ）大鼠软骨细胞凋亡及 Ｒａｓ 同源基因家族成员 Ａ（ＲｈｏＡ）／Ｒｈｏ相关卷曲螺旋蛋白激酶（ＲＯＣＫ）通路的影响。方法：通过切断大鼠前交叉副韧带、内侧副韧带，摘除内侧半月板构建 ＯＡ 大鼠模型，将造模成功大鼠随机分为 ＯＡ 组、夏枯草黄酮低、中、高剂量组和 ＲｈｏＡ 通路抑制剂（Ｙ－２７６３２）组；另取１２GDC-0068体外只大鼠仅剪开皮肤暴露关节腔，作为假手术组；假手术组和 ＯＡ 组 大 鼠 均 给 予 生 理 盐 水 灌 胃，夏 枯 草 黄 酮 低、中、高 剂 量 组 分 别 给 予 ６．１２５，１２．２５０， ２４．５００ ｍｇ／ｋｇ夏枯草黄酮灌胃，Ｙ－２７６３２组给５ ｍｇ／ｋｇ 的 Ｙ－２７６３２ 灌胃；１ 次／ｄ，连续８ 周。末次给药后２４ｈ，检测大鼠压痛阈值、热痛阈值，酶联免疫吸附法检测大鼠血清肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）、白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）水 平，苏 木精－伊 红 （ＨＥ）染 色法观察大鼠关节软骨形态，一 步法原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法检测大鼠软骨细胞凋亡，蛋白免疫印迹法检测大鼠软骨组织凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－３（Ｃａｓｐａｓｅ－３）及 ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ 通路蛋白的表达。结果：假手术组大鼠关节软骨结构清晰，排列规整，表层光滑无缺损，各层LY2835219采购细胞分布均匀；ＯＡ 组大鼠关节软骨表层粗糙且不完整，纤维化明显，各层细胞排列紊乱；夏枯草黄酮各剂量组、Ｙ－２７６３２ 组大鼠表层结构相对正常，但部分区域仍存在细胞紊乱现象；夏枯草黄酮高剂量组与 Ｙ－２７６３２ 组两组间大鼠骨关节软骨形态差异不明显。与假手术组比较，ＯＡ 组大鼠压痛阈值及热痛阈值显著降低，Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分、血清 ＴＮＦ－α 及ＩＬ－１β 水平、软骨细胞凋亡数、软骨组织 Ｃａｓｐａｓｅ－３、ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫ 蛋白表达显著升高（Ｐ＜０．０５）；与 ＯＡ 组比较，夏枯草黄酮低、中、高剂量组压痛阈值及热痛阈值显著升高，Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分、血清 ＴＮＦ－α 及ＩＬ－１β水平、软骨细胞凋亡数、软骨组织 Ｃａｓｐａｓｅ－３、ＲｈｏＡ、ＲＯＣＫEPZ-6438分子量 蛋白表达显著降低，且呈现夏枯草黄酮剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）；夏枯草黄酮高剂量组和 Ｙ－２７６３２组上述指标差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论：夏枯草黄酮通过抑制 ＯＡ 大鼠软骨细胞凋亡改善大鼠关节软骨损伤，可能与抑制 ＲｈｏＡ／ＲＯＣＫ 信号通路有关。