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目的 N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine, m6A)修饰通过调节mRNA表达及功能参与免疫炎症过程逐渐被报道，但在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)中研究有限。故本研究将初步探索m6A修饰相关mRNA表达与SLE的关联及影响。方法 利用实时定量聚合酶链反应和蛋白质印迹实验验证m6A修饰相关干扰素诱导蛋白5(interferon induced protein with tetratricopeptide reLY-188011peats 5,IFIT5)在SLE患者T淋巴细胞(T细胞)中表达情况；进一步分析IFIT5差异表达与患者临床表现和临床用药之间的关系。构建干扰和过表达IFIT5的Jurkat细胞系，流式细胞术分析T细胞表型及相关细胞因子表达情况。结果 与正常对照相比，SLE中高表达的IFIT5上m6A修饰显著增强；患者T细胞中IFIT5基因表达和蛋白水平均上调(均P<0.05),且与SLE患者疾病活动程度有关(r_s=0.388,P=0.028)。Jurkat细胞实验发现，敲低IFIT5显著抑制细胞增殖和加速细胞凋亡，并触发BI 10773分子式肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)分泌且降低白介素-2(interleukin-2, IL-2)和白介素-6(interleukin-6, IL-6)的表达。结论 SLE疾病中IFIT5高表达与m6A修饰相关；m6A修饰相关的IFIT5在SLE患者T细胞Immunohistochemistry Kits中高表达，且参与T细胞增殖和凋亡及炎症因子表达。故m6A修饰相关IFIT5可能参与SLE患者T细胞免疫炎症反应，但确切机制值得进一步研究。

背景随着社会的进步和竞争的加剧,慢性失眠症已成为生活中常见的一种疾病。慢性失眠症的危害涉及多个方面,其不仅影响我们的情绪,还可能损害我们的认知功能。目前临床上经常使用镇静催眠药物,其优点是起效相对较快,效果好,服用方便。但在使用过程中也出现了一些副作用,此类药物大多存在具有成瘾性和selleck Barasertib耐药风险,影响记忆力等认知功能以及第二天的宿醉、乏力等缺点。曲唑酮等抗抑郁药也常用于治疗慢性失眠症,且已被证明对有其他药物禁忌症、睡眠呼吸暂停低通气综合征和有药物滥用史的患者有效,但全面评估抗抑郁药对慢性失眠症患者睡眠、焦虑、抑郁和认知功能的有效性和安全性鲜有报道。因此,为了全面评估曲唑酮对慢性失眠症患者的睡眠、焦虑和抑郁以及认知功能有效性和安全性,本研究以慢性失眠症患者为研究对象,探讨了曲唑酮和右佐匹克隆治疗慢性失眠症患者睡眠、焦虑、抑郁和认知功能的有效性和安全性,以期为曲唑酮治疗慢性失眠症RepSox细胞培养提供科学依据和数据支持。目的比较曲唑酮与右佐匹克隆对慢性失眠症患者睡眠、焦虑抑郁和认知功能的疗效,并对药物的安全性进行评价,以期提高患者的治疗效果,为临床提供数据支持。方法选取2022年07月-2023年07月在新乡医学院第二附属医院睡眠医学科和焦作市第四人民医院睡眠科接受治疗的慢性失眠症患者69例。使用随机数表法将患者分为观察组35例和对照组34例,观察组采用曲唑酮治疗4周,对照组采用右佐匹克隆治疗4周。采用自制问卷收集性别、年龄、iPSC-derived hepatocyte身体质量指数(BMI,Body Mass Index)、受教育程度、职业、婚姻状况、月平均经济收入、疾病病程。在治疗前和治疗4周后,对两组患者的睡眠质量、失眠严重程度、焦虑抑郁程度及认知功能进行了评估。采用睡眠质量指数量表(Pittsburgh Sleep Quality Index,PSQI)和失眠严重指数量表(Insomnia Severity Index,ISI)评估了睡眠质量和失眠严重程度,采用汉密尔顿焦虑量表(Hamilton Anxiety Scale,HAMA)和汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Rating scale for Depression,HAMD)评估了焦虑和抑郁程度,采用认知功能成套测验操作手册(MATRICS Consensus Cognitive Battery,MCCB)评估了认知功能。比较了两组患者在这些方面的差异,以了解治疗效果。结果1.对两组患者的一般人口学资料、基线临床数据进行对比,结果发现两组患者在性别、年龄、BMI、受教育程度、职业、婚姻状况、月平均经济收入、疾病病程方面,无显著性差异,不具有统计学意义(P>0.05)。2.睡眠质量:经过治疗后,两组患者的PSQI评分均显著改善,与治疗前相比差异均具有统计学意义(均P<0.05)。治疗后,观察组患者的睡眠质量维度评分为(0.65±0.16)分,低于对照组的(0.87±0.32)分,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组患者睡眠情况改善总有效率为91.42%,对照组为85.29%,差异不具有统计学意义(P>0.05)。3.失眠严重程度:治疗后两组失眠严重程度均有改善,与治疗前相比差异均具有统计学意义(均P<0.05)。治疗后,观察组日间功能维度评分、注意力受损维度评分分别为(0.74±0.41)分和(0.46±0.12)分,低于对照组的(1.14±0.42)分和(0.70±0.38)分,比较差异具有统计学意义(P<0.05)。4.焦虑:患者的HAMA评分在治疗前后两组相比较改变差异较小,不具有统计学意义(P>0.05)。治疗后两组患者的HAMA得分都有所降低,与治疗前比较,有显著性差异,均具有统计学意义(P<0.05)。5.抑郁:两组在治疗后HAMD得分较前降低,与治疗前比较,有显著性差异,均具有统计学意义(均P<0.05),观察组患者HAMD得分为(3.03±1.41)分,明显优于对照组的(5.67±1.79)分,两者比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.认知功能:治疗后两组认知功能各维度及总评分与治疗前相比均有不同程度升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。治疗后,观察组患者注意警觉性维度得分(79.61±8.54)高于对照组(68.41±10.27)(P<0.05);治疗后,观察组患者工作记忆维度、推理问题解决维度、认知功能总得分分别为(74.47±6.92)分、(82.39±8.62)分和(76.64±8.36)分,高于相应的对照组得分,差异具有统计学意义(P<0.05)。7.不良反应:治疗后,观察组患者出现乏力1例,头疼2例,头晕0例,胃肠道反应2例,嗜睡1例,不良反应总发生率为17.14%,对照组患者出现乏力0例,头疼1例,头晕1例,胃肠道反应1例,嗜睡1例,不良反应总发生率为11.76%,两组患者不良反应发生率差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论1.慢性失眠症患者的睡眠质量差、失眠严重程度重,存在焦虑抑郁情绪和认知功能受损。2.与右佐匹克隆相比,曲唑酮在改善慢性失眠症患者抑郁程度、认知功能方面优于右佐匹克隆;在提高睡眠质量、降低失眠严重程度、改善焦虑程度方面与右佐匹克隆相当。3.与右佐匹克隆相比,曲唑酮在治疗慢性失眠症中不良反应发生率方面与右佐匹克隆相当。

为探究柴胡-川芎治疗抑郁症与肝损伤的共同作用机制,本研究采用网络药理学和体内试验研究柴胡-川芎治疗抑郁症和肝损伤的作用机制,使用TCMSP数据库筛选柴胡、川芎的活性成分和作用靶点,使用CTD、GeneCards、DisGeNET数据库搜索抑郁症和肝损伤的相关靶基因,利用STRING数据库和Cytoscape分析构建PPI网络并进行可视化分析,使寻找更多用Metascape平台进行GO功能分析和KEGG富集分析,通过分子对接,验证活性成分与关键靶点的结合能力,采用不可预测慢性温和刺激(CUMS)的方法,建立大鼠抑郁症模型,比较各组大鼠行为学改变。采用腹腔注射CCl4方法建立大鼠肝损伤模型,比较各组大鼠血清ALT、AST、ALP、GGTAngioimmunoblastic T cell lymphoma水平变化;最后采用Western blot法检测抑郁症大鼠脑内以selleckchem FG-4592及肝损伤大鼠肝脏TNF-α、IL-6的表达水平。结果显示,筛选得到柴胡-川芎活性成分31种,治疗二疾病的靶点212个,如TNF-α、IL-6等,主要富集在癌症通路、PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路等。分子对接表明,药物的主要活性成分与IL-6和TNF-α具有较为稳定的结合活性。Western blot试验显示,给药后,抑郁症大鼠脑内TNF-α、IL-6的表达下调;肝损伤大鼠肝脏TNF-α、IL-6的表达下调。根据网络药理学分析结果结合分子对接及体内试验验证表明,抑制炎症反应可能是柴胡-川芎“异病同治”抑郁症和肝损伤的重要机制。

目的 探讨复方嗜酸乳杆菌联合四联疗法在幽门螺杆菌（Hp）感染Trichostatin A分子量消化性溃疡患者中的应用价值。方法 选取兴国县中医院2019年6月—2021年6月收治的Hp感染消化性溃疡患者120例，按随机数字表法分为2组。对照组（60例）予以常规四联疗法治疗，研究组（60例）加用复方嗜酸乳杆菌治疗，均持续治疗8周。对比分析2组患者抗菌效果、临床疗效、炎症因子水平、肠道菌群及不良反应。结果 研究组Hp根除率、治疗总有效率分别为95.00%、96.67%，高于对照组的78.33%、83.33%，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗前，2组患者炎症因子水平、肠道菌群相比，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，研究组内皮素（ET）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子（TNF-α）均较对照组低，产气荚膜梭菌低于对照组，乳杆菌、双歧杆菌、B/E值高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;2组患者不良反应相比，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 在Hp感染消化性溃疡患者中采用复方嗜酸乳杆菌联合四联疗法治疗能够有效提高Hp根除率，减轻炎症反应，改购买CB-839善肠道菌群，且不会增加不良反应，值得临床推广biocidal effect应用。

目的 建立一种慢性阻塞性肺疾病Steamed ginseng(COPD)相关性气管支气管软化症模型制备方法，并评价丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB203580)的作用效果。方法 通过烟熏联合脂多糖气管滴入法制备大鼠COPD模型，分离COPD大鼠气管支气管软骨细胞、培养及传代，然后加入10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β处理筛选的软骨细胞24 h诱导软骨细胞退变，建立COPD相关性气管支气管软化症模型。采用SB203580干预退变软骨细胞，流式凋亡和CCK8法分别检测软骨细胞凋亡、增殖活性；甲苯胺蓝染色和免疫组织化学法观察软骨细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量；Western印迹检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13蛋白表达；荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测软骨细胞caveolin-1、p38MAPK、IL-1β、MMP-13表达水平。结果 COPD大鼠支气管软骨细胞分离鉴定成功，10 ng/ml IL-1β即能诱导构建稳定的COPD相关性气管支气管软化症细胞模型；通过CCK8法筛选确定第4代支气管软骨细胞、5μmol/LCL 318952体外 SB203580为最佳传代细胞和干预剂量，依上述条件分别处理各组软骨细胞48 h。甲苯胺蓝染色和免疫组织化学分析表明，SB203580处理可以有效提高COPD相关性气管支气管软化症细胞模型软骨细胞的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量；细胞流式检测结果显示：SB203580可以显著降低细胞凋亡，显著增强细胞增殖活性(P<0.05);Western印迹检测结果表明：SB203580可以有效抑制caveolin-1、p38MAPK、MMP-13、1L-1β蛋白表达；qPCR检测结果表明SB203580可以有效抑制MMP-13、p38MAPK、caveolin-1、IL-1β基因的表达。结论 10 ng/ml IL-1β可诱导构建稳定的MCC950化学结构COPD相关性气管支气管软化症细胞模型；SB203580可提高该模型软骨细胞的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量及提高细胞活性，同时减少软骨细胞凋亡。其作用可能与SB203580抑制caveolin-1-p38MAPK信号通路中关键信号分子caveolin-1、p38MAPK表达及降低下游效应产物MMP-13、1L-1β的表达水平有关。

目的 原核表达纯化重组蛋白GP900，初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白GP900通过NF-κB/MAPK信号通路对RAW264.7细胞的免疫调节作用。方法 微小隐孢子虫GP900蛋白的氨基酸序列经在线网站ExPASy、SOPMA预测其的理化性质和二级结构；通过DNAStar软件和SYFPEITHI在线服务器预测GP900蛋白的B细胞及T细胞优势抗原表位，筛选获得最佳GP900重组蛋白氨基酸位置。以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板，PCR扩增GP900基因片段，构建pET-32a-GP900重组质粒并转化到BL21感受态细胞中诱导表达。重组蛋白经纯化、超滤浓缩并去内毒素。采用不同浓度的GP900重组蛋白刺激RAW264.7细胞24 h后，检测其对巨噬细胞的活力。以LPS(1μg/ml)为阳性对照，通过流式细胞术检测CD86表达量；通过RT-PCR和ELISA检测RAW264.7细胞中IL-6和TNF-ɑ表达量；采用Western blotting实验检测NF-κB和MAPK信号通路中P65蛋白和ERK蛋白磷酸化水平。结果生物信息学分析发现，当GP900蛋白的氨基酸位置位于871-1070时，重组蛋白为稳定的亲水性蛋白，二级结构中β转角和无规则卷曲的占比较高且含有较丰富的T、B细胞抗原表位。表达的重组蛋白GPGDC-0973900871-1070分子质量与理论值相符。CCK8结果显示重组蛋白GP900871-1070对细胞没有毒性作用，后续作用浓度选择0.16μg/ml、0.8μg/ml和4μg/ml。流式细胞术结果显示，CD86的表达量分别为13.500±0.815,18.670±0.657,20.470±1.271，后两者均高于空白对照组14.500±0.872 (t=3.818、3.872，均P <0.05)。RT-PCR结果显示，3个浓度梯度组巨噬细胞的IL-6 mRNA相对转录水平分别为1.409±0.050,2.052±0.098,3.284±0.097，三者均高于空白对照组1.010±0.096(t=3.700,7.595,16.700，均P <0.05);3个浓度梯度组巨噬细胞的TNF-ɑmRNA相对转录水平分别为1.077±0.034,1.440±0.021,2.378±0.037，后两者均高于空白对照组1.000±0.025 (t=13.380,30.850，均P <0.01)。ELISA检测结果显示，巨噬细胞培养上清中，3个浓度梯度组IL-6细胞因子的表达量分别为535Staurosporine细胞培养.400±17.230,572.800±8.286, 555.600±23.940，三者均高于空白对照组454.400±18.630 (t=3.193, 5.809, 3.339，均P <0.05);3个浓度梯度组TNF-genetic resourceɑ细胞因子的表达量分别为351.800±12.270,386.400±10.250,489.800±10.540，后两者均高于空白对照组324.200±11.070 (t=4.125,10.830，均P <0.01)。Western blotting结果显示，3个浓度梯度组巨噬细胞的p-P65蛋白和p-ERK蛋白相对表达量分别为2.294±0.254,1.714±0.205,1.877±0.309,1.522±0.054,1.760±0.066,1.582±0.027，三者均高于空白对照组1.0±0.0 (t=5.100,3.489,2.836,9.737,11.450,21.900，均P <0.05)。结论 不同浓度GP900871-1070重组蛋白刺激巨噬细胞后，通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导RAW264.7细胞活化,通过促进TNF-α和IL-6 mRNA的转录参与巨噬细胞的免疫调节，促进宿主防御寄生虫的感染。

随着纳米技术的发展,纳米银(AgNPs)在纳米尺度上显示出独特的物理、化学和生化特性,在生物医学领域和日常生活中应用广泛。AgNPs及其相关产品在生产、使用和废弃的过程中不可避免地导致了银颗粒在环境中的释放,极大地增加了职业人群和一般公众暴露的潜在风险。随着对环境安全和人类健康的日益关注,AgNPs的毒性机制尤其是其遗传毒性机制的研究以及评估AgNPs的潜在风险是目前两个急需解决的问题。本论文主要是以人鼠杂交瘤AL细胞为研究对象,在亚细胞器层面探究不同尺寸AgNPs诱导多位点基因缺失突变的作用机制。首先,研究了三种粒径AgNPs的内化途径差异对其遗传毒性的影响。利用透射式电子显微镜(TEM)结合细胞切片技术研究了不同粒径AgNPs在细胞内的分布情况,研究结果发现5 nm粒径AgNPs主要通过质膜的液相入胞,25 nm粒径AgNPs主要通过网格蛋白和小窝蛋白介导的胞吞作用内化到细胞中,75nm粒径AgNPs主要通过能量依赖的胞饮作用。通过微核形成率及CD59基因突变率的检测,发现AgNPs诱导的遗传毒性与其粒径呈负相关关系,而与处理时间、剂量呈正相关关系;利用CD59基因突变谱实验检测,发现了小粒径AgNPs可以诱导产生基因多位点缺失突变。其次,探究了 AgNPs对溶酶体及线粒体结构及功能的影响,研究溶酶体及线粒体功能障碍对AgNPs诱导的基因缺失突变的贡献。研究发现,AgNPs诱导了粒径依赖的线粒体及溶酶体结构和功能损伤;ROS清除剂N-Acetyl-L-cysteine(NAC)或Mito-TEMPO存在的情况下,可以显著降低5 nm AgNPs的遗传毒性;线粒体DNA缺失型—ρ0AL细胞对AgNPs诱导产生的CD59基因突变和微核形成的弱响应性,揭示了线粒体在AgNPs诱导遗传毒性中的重要作IDN-6556配制用。进一步研究显示,小粒径AgNPs一方面可以引起溶酶体渗透膨胀和溶酶体应激的结构损伤;另一方面可以影响溶酶体膜上质子泵H+-ATPase功能,诱发溶酶体碱化和内部酶活下降的功能损伤;而溶酶体的重新酸化可以一定程度上降低AgNPs诱导产生的遗传毒性。最后,在细胞自噬的层面上,发现了 AgNPs能够诱导产生粒径依赖的细胞自噬。其中,5 nm粒径AgNPs诱导了自噬流的阻断,并通过抑制自噬小体与溶酶体的融合,诱导产生自噬功能障碍;而溶酶体保护剂对自噬功能的重新激活降低了 5 nm粒径AgNPs诱导的遗传毒性。综上,AgNPs的内化途径,线粒体与溶酶体的交互作用及细胞自噬共同参与了 AgNPs诱导的基因多位点缺失突变。一方面,AgNPs诱导了粒径依赖的Keratoconus genetics溶酶体和线粒体的损伤;另一方面,其诱导产生的受损的细胞自噬无法清除损伤细胞器的积累和ROS的堆积,继而加剧了 AgNPs引起的DNA损伤、染色体畸变和CD59基因突变。本研究揭示了 AgNPs诱导基因多位点缺失突变的作用机制,为开发有效的纳米毒性评估方法开辟MLN8237细胞培养了新的思路和途径。

在“碳中和”的大背景下，污水生物处理过程中氧化亚氮（N_2O）的释放已经引起了人们的广泛关注，探究N_2O的产生机理和寻找缓解N_2O释放的策略也成为研究Auto-immune disease的热点.分析污水处理过程中能够产生N_2O的微生物及其特性，以及硝化过程和反硝化过程N_2O的产生机理，并从N_2O释放影响因素的角度总结缓解污水生物处理过程中N_2O释放的策略.随着对N_2O产生和消耗的研究不断深入，N_2O缓解释放的策略不再局限于工艺参数优化，微生物群落结构调控和Fer-1体内完全反硝化过程强化也成为N_2O减排策略研究的热点.生物处理硝化过程不能消耗N_2O，只能通过减少N_2O产生的方式来降低N_2O的排放；与硝化不同，N_2O是反硝化过程的中间产物，这也就意味着反硝化过程能够消耗N_2O，因此反硝化GW-572016使用方法过程作为N_2O的汇已经成为共识，如何有效促进反硝化过程是N_2O减量的重要途径.因此，可以通过改变微生物群落结构提高氧化亚氮还原酶（NOS）基因丰度来提升N_2O还原效率，添加生物炭调节电子分配实现完全反硝化过程，利用石墨烯促进反硝化酶活性提高N_2O的消耗等，以实现污水生物处理N_2O的减量排放.（图1表2参84）

目的 观察低剂量艾司氯胺酮(ESK)预处理对于肢体缺血再灌注损伤(LI/R)的作用。方法 对大鼠进行如下分组：sham组occult hepatitis B infection(即假手术组)、I/R组(即缺血再灌注组，对单侧肢体先实施3 h缺血处理，再实施2 h灌注)、ESK组(即ESK预处理组，经腹腔注入ESK,用量是5 mg/kg)。切取部分骨骼肌用于湿干重比检测；经由比色法测定血清内肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的水平；再对部分骨骼肌行冻存处理(-80℃),用于测定丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)及Western bselleckchem VX-445lot检测胞核核因子E2相关因子2(Nrf2)、胞质血红素加氧酶购买NSC 127716(HO-1)蛋白的表达；通过免疫组化染色(IHC),对胞核Nrf2和胞质HO-1蛋白进行检测。结果 相较sham组，I/R组湿干比、CK、LDH、MDA、Nrf2和HO-1均上调，SOD下调(P<0.05);相较I/R组，ESK组湿干比、CK、LDH与MDA皆明显降低；而SOD、Nrf2和HO-1明显升高(P<0.05)。结论 艾司氯胺酮减轻骨骼肌缺血再灌注损伤，可能是通过提高细胞核内Nrf2水平，增强HO-1蛋白的表达来提升抗氧化的能力。

目的 对比研究耳穴压豆、针刺治疗肝郁化火型Erastin作用抑郁障碍合并失眠的临床疗效。方法 90例肝郁化火型抑郁障碍合并失眠患者,根据治疗方法不同分为药物对照组、耳穴压豆组、针刺组,各30例。药物对照组给予常规西药治疗,耳穴压豆组给予耳穴压豆治疗,针刺组给予针刺治疗。比较三组治疗前后的匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评分、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分、副反应发生情况。结果 治疗后1、2、4周,耳穴压豆组PSQI评分分别为(12.11±1.37)、(9.85±1.33)、(5.34±0.98)分,针刺组PSQI评分分别为(12.16±1.71)、(9.76±1.41)、(5.32±1.03)分,均低于药物对照组的(13.01±1.25)、(11.42±1.56)、(9.17±1.21)分,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1、2、4周,耳穴压豆组与针刺组PSQI评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后1、2、4周,耳穴压豆组HAMD评分分别为(15.55±1.36)、(9.75±1.34)、(3.65±1.22)分,针刺组HAMD评分分别为(15.53±1.21)、(10.17±1.20)、(3.78±1.17)分GSI-IX MW,均低于药物对照组的(19.76±3.34)、(13.56±1.7mediastinal cyst9)、(6.43±1.87)分,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1、2、4周,针刺组与耳穴压豆组HAMD评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后1、2、4周,耳穴压豆组、针刺组副反应发生率低于药物对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1、2、4周,耳穴压豆组与针刺组副反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 耳穴压豆、针刺治疗肝郁化火型抑郁障碍合并失眠疗效相当,患者耐受性均较好,值得推广。