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目的：探究水飞蓟宾对肺结核（TB）大鼠肺部炎症损伤、巨噬细胞凋亡的影响，及对死亡受体Fas及其配体FasL的调控作用。方法：采用尾静脉注射结核分枝杆菌（Mtb）法制备TB大鼠模型，并随机分为模型组、水飞蓟宾组、Fas过表达重组蛋白（pcDNA-Fas）组、pcDNA-Fas阴性对照（pcDNA-NC）组、水飞蓟宾+pcDNA-Fas组，每组15PF-03084014 MW只，另取15只大鼠为正常对照组。抗酸染色检测肺组织感染情况；HE染色观察肺组织病理变化；ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6表达；Annexin VFITC/PI双染结合流式细胞术检测肺泡巨噬细胞凋亡率；Western blot检测Fas、FasL、caspase8、caspase3、巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)表达水平。结果：与正常对照组相比，模型组大鼠肺组织炎症因子表达、肺泡巨噬细胞凋亡率升高，肺组织Mtb感染及干酪样坏死严重，Fas/FasL介导的caspase8/3凋亡途径活化（P<0.05）。与模型组相比，水飞蓟宾组大鼠肺组织炎症因子表达、肺泡巨噬细胞凋亡率降低，肺组织Mtb感染及干酪样坏死缓解，Fas/FasL介导的caspasechromatin immunoprecipitation8/3凋亡途径活性降低（P<0.05）。pc-DNA-FasPLX4032可进一步激活Fas/FasL介导的caspase8/3凋亡途径活化，加重肺组织Mtb感染及干酪样坏死，促进肺组织炎症损伤及巨噬细胞凋亡，并减弱水飞蓟宾发挥的抗Fas/FasL活化、抗炎及抗巨噬细胞凋亡作用（P<0.05）。结论：水飞蓟宾可能通过抑制Fas/FasL信号通路发挥抗Mtb感染、抗肺组织巨噬细胞凋亡及抗肺部炎症损伤作用。

目的克服癌症转移和化疗中的多药耐药性(MDR)在药物发现方面具有挑战性。新药设计的关键是筛选合适的药物靶点,其中,DNA结合蛋白为极其重要的药物靶点。鉴于DNA结合蛋白药物靶点的独特结合模式,开发DNA大沟结合型抗肿瘤药物具有特别意义。若该药物能稳定结合DNA大沟,理论上能同时阻断多个核蛋白与DNA结合,干扰它们基本功能,实现对肿瘤异常生物行为的多靶点调控。本论文开展纳米靶点识别及其纳米药物发现的探索性研究,旨在发现有效作用于DNA大沟并能克服各种细胞屏障的纳米活性药物,探究它们与”DNA纳米靶点”的互作方式及其干预肿瘤生长、转移与耐药相关信号通路的能力与机制,揭示纳米活性药物的临床应用潜力。材料和方法我们采用细胞毒性实验、WB、qPCR等实验研究石墨烯量子点(GQD)的逆转耐药活性,随后采用划痕实验、Transwell实验、活体成像实验探究GQD抑制癌症转移的活性。结果细胞毒性实验首先证实GQD对三种耐药细胞的生长均表现出明显的抑制作用,其对耐药细胞和药物敏感型细胞的IC_(50)是相当的。除此之外,GQD使得耐药细胞MCF-7/ADR和HCT-8/PTX对DOX和PTX的耐药指数分别从155.95和88.41下降为0.84和3.29。在分子水平上证实GQD高效逆转MDR1介导的耐药性是非传统方式的,即GQD通过对MDR1启动子活性的纳米界面抑制PCI-32765分子式导致MDR1表达显著下调的独特逆转方式,进而抑制耐药细胞中P-gp蛋白的表达。通过划痕实验和Transwell实验证实GQD可以抑制多种癌细胞的细胞迁移。在体内,生物发光成像证实GQD可以明显的抑制4T1-Luc细胞的Saxitoxin biosynthesis genes肺转移,抑制率高RSL3浓度达84%。在分子水平上我们证实GQD候选药物可以将4T1细胞中表达肿瘤干细胞标志物ALDH的细胞数量从37.43%下降到0.02%。利用Western blot和RT-PCR技术我们发现GQD候选药物可以明显抑制肿瘤干细胞标志基因(Notch1和Bmi1)和E-钙连蛋白的表达。结论本工作设计了一种完全不同于小分子药物的GQD纳米药物,其本身既是高活性抗癌药物又是超稳定荧光探针。GQD可设计成多靶点作用的新型抗癌药,其不仅可以通过抑制MDR1的启动子活性而逆转P-gp/MDR1介导的多药耐药,还可以通过消灭肿瘤干细胞而抑制肿瘤的转移,这使得GQD有利于克服传统单靶点抗癌药物临床应用的诸多局限。

目的 从桂枝茯苓胶囊（Guizhi Fuling Capsules,GZFLC）临床用于治疗痛经的功效出发，探索建立基于子宫平滑肌收缩活性测定medication beliefs的GZFLC质量生物活性评价方法。方法 通过注射雌激素增加小鼠子宫敏感性，建立缩宫素诱导的小鼠离体子宫平滑肌收缩模型，采集给药前后小鼠子宫平滑肌的收缩频率、幅值和峰面积，以收缩峰面积为指标进行统计并对药效进行归一化处理。考察小鼠离体子宫平滑肌收缩模型的主要影响因素如雌激素注射方式与天数、缩宫素浓度、动物周龄和GZFLC前处理方法。建立GZFLC质量生物活性评价方法并进行方法学考察，测定10个批次GZFLC合格样购买Z-VAD-FMK品及2个GZFLC高温破坏样品的生物活性。结果 连续3 d ip雌激素10 mg/(kg·d)后小鼠子宫平滑肌收缩峰面积较高且收缩节律较好；最适缩宫素造模质量浓度为0.050μg/mL；将GZFLC配制成质量浓度为0.125 g/mL的药液并超声溶解60 min有利于药效发挥；重复性考察RSD为11.298%，日内精密度RSD为12.452%，日间精密度RSD为10.438%;10批次GZFLC半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC_(50)）为1.526～1NSC 119875分子量.631 mg/mL，高温破坏后GZFLC的IC_(50)明显增大。结论 基于子宫平滑肌收缩活性测定的GZFLC质量评价方法重复性和精密度较好，为后续GZFLC的综合质量评价标准建立提供了科学依据。

目的:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的患病率高且发病率上升,造成了巨大的经济负担。酮酸类似物(ketoacid analogues,KA)可补充机体的必需氨基酸,同时不增加肾脏的负担,可延缓CKD进展,但作用机制不完全清楚。肠道菌群和肾脏之间呈现为复杂的相互作用关系,CKD会干扰宿主器官和肠道微生物区系的共生关系。因此本研究拟通过探索KA对CKD小鼠肠道菌群及血清代谢物的影响,为临床使用KA治疗CKD提供理论参考和科学依据,同时进一步探讨CKD的肠道菌群及代谢特点。方法:1、建立CKD小鼠模型:选取C57小鼠,分为对照组、LPD组及KA组,选取单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型结,干预28天后收集小鼠大便、血标本、肾脏标本,测定血肌酐、血尿素氮。2、肠道菌群分析:对大便标本进行16s RNA测序,通过多样性分析、物种组成分析、相关性分析等分析方法研究CKD小鼠肠道菌群的改变。3、血清代谢组学研究:基于超高效液相色谱-高清质谱联用(Liquid Chromatograph-Mass Spectrometer,LC-MS)技术鉴定小鼠血清中的差异代谢产物,随后进行代谢通路富集,筛选出差异代谢产物主要参与的代谢通路。4、肠道菌群与差异代谢物相关性研究:通过Pearson相关分析,探讨CKD小鼠的肠道菌群改变与差异代谢产物之间关系。结果:1、各组生化指标:对照组diABZI STING agonist抑制剂的血肌酐21.08±5.83μmol/L,血尿素氮3.75±1.89 mmol/L,LPD组的血肌酐85.73±14.21μmol/L,血尿素氮19.46±RAD001核磁3.36 mmol/L,KA组的血肌酐56.93±8.86μmol/L,血尿素氮16.70±5.58 mmol/L。可见KA组、LPD组的血肌酐、血尿素氮显著升高,具有统计学意义(F=60.03,p<0.001;F=27.48,p<0.001)。2、CKD小鼠肠道菌群改变:α多样性分析提示对照组、KA组和LPD组的Shannon指数分别为5.970±0.91、6.42±0.48、5.32±0.41,无统计学差异(F=3.76,p=0.05);Simpson指数分别为0.92±0.08、0.97±0.01、0.91±0.04,无统计学差异(Fhealth biomarker=0.67,p=0.527)。门水平上,KA组和LPD组的厚壁菌门(p=0.014,p=0.007)、脱硫菌门(p=0.04,p=0.01)显著升高。属水平上,与对照相比,KA组的脱硫弧菌属(p=0.001)、大肠埃希菌(p=0.003)水平显著升高,乳杆菌属(p=0.039)、普雷沃特拉菌(p=0.015)、梭状芽孢杆菌(p=0.005)明显减少。与LPD组相比,KA组的另枝菌属(p=0.021)水平明显升高,Odoribacter(p=0.003)显著减少。3、CKD小鼠血清代谢产物改变:与LPD组相比,KA组的柠檬酸、瓜氨酸、L-乙酰基肉碱、L-(+)-古洛糖、半乳糖、葡萄糖、谷胱甘肽、3-(3-吲哚基)-2-氧丙酸、Lyso PC(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z))、左棕榈酰肉碱、丙酰肉碱、二甲基精氨酸、神经节苷脂显著升高,磷酸丝氨酸、安替比林、黄嘌呤显著降低。这些代谢产物主要富集于癌症中的胆碱代谢、脂肪酸代谢(亚油酸、甘油磷脂)、氨基酸代谢(精氨酸生物合成、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢),柠檬酸循环(TCA循环)、GABA-神经突触等代谢通路。4、CKD小鼠肠道菌群改变及差异代谢产物的关系:另枝菌属与瓜氨酸(r=0.53,p=0.026)、PC(22:5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)/16:1(9Z))(r=0.49,p=0.041)水平正相关;文肯菌属-RC9肠道群与磷酸丝氨酸水平正相关(r=0.53,p=0.026),与瓜氨酸(r=-0.49,p=0.041)、氧戊二酸(r=-0.64,p=0.006)、葡萄糖(r=-0.49,p=0.041)、谷胱甘肽(r=-0.67,p=0.003)水平负相关;幽门螺杆菌与柠檬酸(r=-0.49,p=0.041)、瓜氨酸(r=-0.49,p=0.041)水平负相关。结论:1.UUO模型可作为CKD研究的动物模型。2.CKD小鼠的厚壁菌门、脱硫菌门显著升高;乳杆菌属、普雷沃特拉菌、水平降低,大肠埃希菌属增多。3.KA可影响CKD小鼠肠道菌群,改变血清代谢物水平,延缓CKD进展。4.KA可能通过上调瓜氨酸影响精氨酸的生物合成。5、KA可能通过上调柠檬酸来影响丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸代谢。

果蔬中农药残留超标问题的频发,严重威胁我国食品安全和居民身体健康。随着食品安全监管范围的不断扩大,传统的仪器分析技术难以满足高通量的现场检测需求,亟需研发快速、高效、廉价的检测手段,为基层食品安全监测提供有效工具。因此,本研究以果蔬中高频或超标检出的11种农药(灭多威、霜霉威、甲拌磷、乙霉威、苯醚甲环唑、咪鲜胺、恶霜灵、乙螨唑、哒螨灵、氯吡脲和二甲戊灵)为研究对象,设计并合成半抗原,制备单克隆抗体,开发胶体金免疫层析检测方法,应用于芹菜、黄瓜、柑橘和猕猴桃中上述农药残留的现场快速检测。1、通过引入苯环合成半抗原并制备单克隆抗体针对灭多威、霜霉威和甲拌磷的结构特征,通过引入刚性苯环作为连接臂合成半抗原,有效暴露各靶标农药的特异性化学结构。在此基础上,与载体蛋白牛血清蛋白(BSA)偶联制备了完全抗原,并经小鼠免疫、血清筛选、细胞融合和杂交瘤筛选,获得了各农药的特异性杂交瘤细胞(灭多威1D10、霜霉威3G9和甲拌磷4C12),进一步获得各农药的单克隆抗体:半数抑制率(IC_(50))分别为49.83、3.24、8.61 ng/m L;抗体亚型分别Ig G2b、Ig G2b、Ig G2a;亲和力常数K_D分别为2.76×10~(10)、3.64×10~(10)、5.43×10~(10) L/mol;上述抗体与其结构类似物的交叉反应率<1%,均为高特异性抗体。2、从中间体出发合成半抗原并制备单克隆抗体根据苯醚甲iCCA intrahepatic cholangiocarcinoma环唑、咪鲜胺、恶霜灵和乙螨唑的合成路线,筛选其合成路线中的关键中间体,引入3～6碳原子长度的碳链作为间隔臂,使其抗原决定簇得以充分暴露,通过引入的羧基或氨基与载体蛋白BSA偶联,制备完全抗原,并以此为基础获得了高特异性单克隆抗体:苯醚甲环唑2F3、咪鲜胺2F2、恶霜灵4B8、乙螨唑2C6,IC_(50)分别为0.64、0.88、3.68、4.04 ng/m L;亲和力常数K_D分别为6.30×10~(10)、4.90×10~(10)、3.56×10~(11)、3.00×10~(10) L/mol,均为高亲和力抗体;抗体亚型分别是Ig G2b、Ig G2a、Ig G2a、Ig G2a。、3、用原药和类似物衍生合成半抗原并制备单克隆抗体针对哒螨灵、氯吡脲、乙霉威和二甲戊灵的结构特征,从原药或其类似物的母核结构衍生半抗原,最大程度保留原有结构完整性的同时,引入了羧基作为Gefitinib价格活性基团。在此基础上制备了单克隆抗体:乙霉威2H7、哒螨灵3C2、氯吡脲4H5和二甲戊灵1E3,IC_(50)分别为:2.93、2.36、0.13和0.46 ng/m L;亚型分别为Ig G1、Ig G2b、I此网站g G1和Ig G2a;亲和力常数K_D分别为2.96×10~(10)、1.40×10~(11)、3.83×10~(10)和1.85×10~(10) L/mol,均为高亲和力抗体;交叉反应实验表明,上述抗体与其结构类似物的交叉反应<1%,均为高特异性抗体。4、建立胶体金免疫分析方法以上述单克隆抗体为核心原料,优化抗体抗原工作浓度以及样品稀释液,制备了胶体金免疫层析试纸条。蔬菜样本用甲醇/水(v/v=1/4)溶液提取后用样本稀释液(0.01 M PBS,p H 7.4,含1%ON-870)稀释两倍后检测,水果样本用甲醇/水(v/v=1/4)溶液提取后,调节p H至中性再稀释三倍后检测,10 min内肉眼判读检测结果,结果显示试纸条在芹菜中苯醚甲环唑、咪鲜胺、甲拌磷、二甲戊灵、哒螨灵和灭多威的肉眼可视检测限(v LOD)低于100 ng/g;黄瓜中的霜霉威、苯醚甲环唑、咪鲜胺、乙霉威、哒螨灵和恶霜灵的v LOD低于25 ng/g;柑橘和猕猴桃中的苯醚甲环唑、乙螨唑、咪鲜胺、哒螨灵和氯吡脲的v LOD低于20 ng/g。更为重要的是通过在层析试纸条上设置5条检测线,优化胶体金标记抗体浓度以及包被抗原浓度,实现了黄瓜样本中咪鲜胺、乙霉威、苯醚甲环唑、霜霉威和恶霜灵的同时检测,v LOD值分别为:2、20、5、20、和2 ng/g;借助胶体金读数仪实现定量检测,对上述5种农药的检测限(LOD)分别为0.24、2.56、0.52、1.31和0.36 ng/g,均低于国家最大残留限量。综上,本论文建立了11种高特异性抗体,研制了满足果蔬中11种农药的免疫层析试纸条,其检测结果和仪器分析方法的结果一致,适合应用于现场快速检测,满足国家最大残留限量的检测要求,为我国食品安全领域的基层高通量快速检测提供了可靠、有效的检测工具。

果蔬中农药残留超标问题的频发,严重威胁我国食品安全和居民身体健康。随着食品安全监管范围的不断扩大,传统的仪器分析技术难以满足高通量的现场检测需求,亟需研发快速、高效、廉价的检测手段,为基层食品安全监测提供有效工具。因此,本研究以果蔬中高频或超标检出的11种农药(灭多威、霜霉威、甲拌磷、乙霉威、苯醚甲环唑、咪鲜胺、恶霜灵、乙螨唑、哒螨灵、氯吡脲和二甲戊灵)为研究对象,设计并合成半抗原,制备单克隆抗体,开发胶体金免疫层析检测方法,应用于芹菜、黄瓜、柑橘和猕猴桃中上述农药残留的现场快速检测。1、通过引入苯环合成半抗原并制备单克隆抗体针对灭多威、霜霉威和甲拌磷的结构特征,通过引入刚性苯环作为连接臂合成半抗原,有效暴露各靶标农药的特异性化学结构。在此基础上,与载体蛋白牛血清蛋白(BSA)偶联制备了完全抗原,并经小鼠免疫、血清筛选、细胞融合和杂交瘤筛选,获得了各农药的特异性杂交瘤细胞(灭多威1D10、霜霉威3G9和甲拌磷4C12),进一步获得各农药的单克隆抗体:半数抑制率(IC_(50))分别为49.83、3.24、8.61 ng/m L;抗体亚型分别Ig G2b、Ig G2b、Ig G2a;亲和力常数K_D分别为2.76×10~(10)、3.64×10~(10)、5.43×10~(10) L/mol;上述抗体与其结构类似物的交叉反应率<1%,均为高特异性抗体。2、从中间体出发合成半抗原并制备单克隆抗体根据苯醚甲iCCA intrahepatic cholangiocarcinoma环唑、咪鲜胺、恶霜灵和乙螨唑的合成路线,筛选其合成路线中的关键中间体,引入3～6碳原子长度的碳链作为间隔臂,使其抗原决定簇得以充分暴露,通过引入的羧基或氨基与载体蛋白BSA偶联,制备完全抗原,并以此为基础获得了高特异性单克隆抗体:苯醚甲环唑2F3、咪鲜胺2F2、恶霜灵4B8、乙螨唑2C6,IC_(50)分别为0.64、0.88、3.68、4.04 ng/m L;亲和力常数K_D分别为6.30×10~(10)、4.90×10~(10)、3.56×10~(11)、3.00×10~(10) L/mol,均为高亲和力抗体;抗体亚型分别是Ig G2b、Ig G2a、Ig G2a、Ig G2a。、3、用原药和类似物衍生合成半抗原并制备单克隆抗体针对哒螨灵、氯吡脲、乙霉威和二甲戊灵的结构特征,从原药或其类似物的母核结构衍生半抗原,最大程度保留原有结构完整性的同时,引入了羧基作为Gefitinib价格活性基团。在此基础上制备了单克隆抗体:乙霉威2H7、哒螨灵3C2、氯吡脲4H5和二甲戊灵1E3,IC_(50)分别为:2.93、2.36、0.13和0.46 ng/m L;亚型分别为Ig G1、Ig G2b、I此网站g G1和Ig G2a;亲和力常数K_D分别为2.96×10~(10)、1.40×10~(11)、3.83×10~(10)和1.85×10~(10) L/mol,均为高亲和力抗体;交叉反应实验表明,上述抗体与其结构类似物的交叉反应<1%,均为高特异性抗体。4、建立胶体金免疫分析方法以上述单克隆抗体为核心原料,优化抗体抗原工作浓度以及样品稀释液,制备了胶体金免疫层析试纸条。蔬菜样本用甲醇/水(v/v=1/4)溶液提取后用样本稀释液(0.01 M PBS,p H 7.4,含1%ON-870)稀释两倍后检测,水果样本用甲醇/水(v/v=1/4)溶液提取后,调节p H至中性再稀释三倍后检测,10 min内肉眼判读检测结果,结果显示试纸条在芹菜中苯醚甲环唑、咪鲜胺、甲拌磷、二甲戊灵、哒螨灵和灭多威的肉眼可视检测限(v LOD)低于100 ng/g;黄瓜中的霜霉威、苯醚甲环唑、咪鲜胺、乙霉威、哒螨灵和恶霜灵的v LOD低于25 ng/g;柑橘和猕猴桃中的苯醚甲环唑、乙螨唑、咪鲜胺、哒螨灵和氯吡脲的v LOD低于20 ng/g。更为重要的是通过在层析试纸条上设置5条检测线,优化胶体金标记抗体浓度以及包被抗原浓度,实现了黄瓜样本中咪鲜胺、乙霉威、苯醚甲环唑、霜霉威和恶霜灵的同时检测,v LOD值分别为:2、20、5、20、和2 ng/g;借助胶体金读数仪实现定量检测,对上述5种农药的检测限(LOD)分别为0.24、2.56、0.52、1.31和0.36 ng/g,均低于国家最大残留限量。综上,本论文建立了11种高特异性抗体,研制了满足果蔬中11种农药的免疫层析试纸条,其检测结果和仪器分析方法的结果一致,适合应用于现场快速检测,满足国家最大残留限量的检测要求,为我国食品安全领域的基层高通量快速检测提供了可靠、有效的检测工具。

目的 探讨C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6（CTRP6）对阿霉cholesterol biosynthesis素（DOX）诱导的心肌细胞凋亡及氧化应激损伤的影响及其相关作用机制。方法 H9C2心肌细胞损伤模型建立如下：设对照组（NS组），DOX（1μmol/L）组，DOX（1μmol/L）+浓度梯度CTRP6组（CTRP6浓度分别为0.5μg/mL、1μg/mL、3μg/mL、5μg/mL），培养24h后检测心肌细胞生存率，结果表明CTRP6浓度3μg/mL时心肌细胞的生存率提高最显著，因此后续实验CTRP6浓度选择3μg/mL。后续H9C2心肌细胞实验分组为：对照组（NS组），CTRP6组，DOX（1μmol/L）组，DOX（1μmol/L）+CTRP6（3μg/mL）组。荧光实时定量PCR（real-timePCR）技术和WesternBlot技术检测DOX刺激后CTRP6转录及翻译水平改变，TUNEL检测细胞凋亡水平，使用ELISA试剂盒检测细胞总谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，WesternBlot检测脂联素受体1（AdipoR1）蛋白水平改变，检测AKT/GSK-3β信号通路蛋白表达改变。结果 与对照组（NC）相比Secretase抑制剂，DOX组细胞CTRP6蛋白表达水平及转录水平显著降低（分别降低46.26%及67.74%，P＜0.05）；与DOX组相比，DOX+CTRP6组CTRP6蛋白表达水平显著提高（P＜0.05）；加入不同浓度梯度的CTRP6蛋白，其中DOX+3μg/mselleck激酶抑制剂LCTRP6处理组心肌细胞存活率显著提高了26.48%（P＜0.05）；TUNEL染色显示凋亡减少，Bcl-2表达升高；抗氧化分子GSH-Px及SOD活性分别升高20.49%及36.89%，MDA水平受到显著抑制（降低47.09%，P＜0.05）；AdipoR1蛋白水平显著提高（P＜0.05）；AKT/GSK-3β信号通路蛋白磷酸化水平显著升高。结论 CTRP6改善DOX诱导的心肌细胞凋亡及氧化应激损伤，可能是通过AKT/GSK-3β通路发挥的保护作用。

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种急性高度接触性胃肠道传染病。近年来,PEDV的广泛流行及高致病性给我国养猪业造成了巨大的经济损失immune memory。目前,相关研究报道汉黄芩素(Wogonin)对冠状病毒主蛋白酶(Main protein,Mpro,又名3CL蛋白酶)表现出较好的抗病毒活性。研究表明,Mphttps://www.selleck.cn/products/smoothened-agonist-sag-hcl.htmlro在PEDV的复制中起着至关重要的作用,已成为抗PEDV药物设计的重要靶点。本试验首先确定了汉黄芩素的抗PEDV活性,并进一步解析其具体的分子机制。试验方法和结果如下:1.汉黄芩素安全用药浓度的筛选:本试验以Vero和IPEC-J2细胞为研究对象,用不同浓度的汉黄芩素(6.25～400μM)3-MA作用处理细胞,48h后收集细胞样本,通过检测CCK-8含量分析汉黄芩素对细胞活力的影响。结果表明,汉黄芩素对Vero和IPEC-J2细胞的安全浓度为6.25～100μM,其CC_(50)值分别为475.3μM和499.4μM。2.汉黄芩素抗PEDV活性研究:以12.5～100μM浓度的汉黄芩素处理感染PEDV的Vero和IPEC-J2细胞,分析汉黄岑素抗PEDV活性。免疫荧光、RT-PCR和病毒载量结果表明,25～100μM浓度的汉黄芩素均极显著抑制PEDV的感染(P<0.01),其IC_(50)值分别为54.87μM和114.55μM。进一步检测汉黄芩素对PEDV复制周期的影响,结果表明汉黄芩素可以显著抑制PEDV的复制(P<0.05),极显著抑制PEDV的内化和释放(P<0.001),并可以直接体外灭活PEDV(P<0.01)。3.汉黄芩素抗PEDV活性的分子机制研究:通过同源建模和分子对接技术发现汉黄芩素能稳定嵌入到Mpro蛋白活性口袋的凹槽中,从而抑制Mpro结合底物。首先通过表达纯化的PEDV-Mpro蛋白与汉黄芩素的体外结合试验,包括差式扫描荧光法(DSF)、微尺度热泳(MST)和表面等离子体共振技术(SPR),验证了汉黄芩素与PEDV-Mpro之间的稳定性和中等亲和力;其次荧光共振能量转移分析技术(FRET)验证了表达纯化的PEDV-Mpro蛋白的酶活并证实汉黄芩素能够抑制PEDV-Mpro酶活性。综上:汉黄芩素表现出对PEDV的抗病毒活性,能够显著抑制PEDV内化、复制和释放,同时能够直接体外灭活PEDV。通过靶向PEDV-Mpro蛋白底物结合位点抑制Mpro酶活性介导PEDV感染。本研究为深入了解汉黄芩素的抗病毒活性以及抗PEDV药物的研究提供了新方向。

目的 观察益母草注射液联合缩宫素治疗产后出血的临床效果。方法 选取2019年1月—2020年12月CX-5461 MW在江西省都昌县妇幼保健院进行分娩的产后出血产妇84例，采用随机数字表法分为研究组和常规组，各42例。常规组采用缩宫素治疗，研究组采用益母草注射液联合缩宫素治疗。比较2组产妇产后1 h、3 h和24 h出血量、产前和产后24 h凝血功能指标、血压水平及产后子宫收缩能力。结果 研究组产妇的产后1 h、3 h和24 https://www.selleck.cn/products/gsk126.htmlh出血量少于常规组(P<0.01);产后24 h, 2组产妇的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及纤维蛋白(Fib)水平与产前比较无明显变化，且2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。产后24 h, 2组产妇的收缩压、舒张压均高于产前，但infective endaortitis研究组低于常规组(P<0.01)。研究组产妇的子宫收缩幅度、强度和张力明显大于常规组，子宫收缩频率少于常规组(P<0.01)。结论 益母草注射液联合缩宫素治疗产后出血可有效减少产后出血量，维持血压水平稳定，改善子宫收缩能力，且对产妇的凝血功能无明显影响。

桃褐腐病是一种世界性分布的真菌病害,RNA Isolation严重危害桃果实产量与品质,对我国的桃产业造成巨大的损失。桃褐腐病发病迅速,化学防治是控制桃褐腐病的重要手段之一,经过多年使用,病原菌对广泛用于防治其的DMI类杀菌剂逐渐产生抗性,其机理为DMI靶标基因CYP51的过量表达。因此为进一步探究桃褐腐病菌产生DMI抗性的原因,前期通过DNA pull-down数据比对分析,筛到一些Bucladesine分子式候选的MfCYP51调控蛋白,其中包括Homeobox转录因子MfHOX1。笔者通过同源重组技术敲除了桃褐腐病菌中的MfHOX1基因,构建了该基因的敲除突变体(ΔMfHOX1)。对转化子的生长发育情况、胁迫表型、抗药性等进行测定,结果显示:ΔMfHOX1突变体生长速率显著下降,其对盐胁迫敏感性显著降低,且对DMI类杀菌剂戊唑醇的抗性显著增强。与此同时,致病力试验结果表明,ΔMfHOX1突变体致病力显著降低。转录因子磷酸化/去磷酸化修饰对于其发挥功能具有重要意义,因此更多本研究通过同源重组技术敲除了桃褐腐病菌中的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)基因Pmk1。抗药性试验表明,ΔMfPmk1突变体对DMI类杀菌剂的抗性也有所增强。综上所述,MfHOX1是桃褐腐病菌生长发育、盐胁迫、DMI抗性、致病性的关键调控因子。