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目的 研究青光眼动物模型应用情况，为其动物实验方法和模型完善提供参考。方法 以“青Berzosertib临床试验光眼”和“动物模型”为主题词，在中国知网、PubMed中收集2012年11月1Medical home日～2022年11月2日青光眼动物模型的相关文献，总结实验动物种类、性别、造模方法、检测指标等，建立数据库进行统计分析。结果 共筛选得到符合标准的400篇文献，其中实验动物多为C57BL/6LBH589核磁J小鼠，动物性别以雄性居多；造模方法多采用前房注射物质诱导型、转基因型和激光光凝诱导型；高频检测指标主要包括眼压测量、组织病理、蛋白免疫印迹和免疫组化。结论 目前青光眼动物模型造模方法种类较多，但是相关中医因素干预较少，建议增加病证结合的青光眼动物模型。本研究通过对青光眼动物模型实验进行挖掘分析，对不同动物模型进行评估，通过挖掘内容为构建造模成功率高、重现性好、与临床吻合度高的动物模型提供参考，为模型完善提供思路。

背景卵巢子宫内膜异位囊肿(OMA)对体外受精(IVF)中卵泡微环境、卵子、胚胎、内膜及妊娠的影响存争议,铁死亡是潜在机制之一。本研究从这五点分析未行手术的OBioactive CryptidesMA对IVF妊娠结局和卵泡颗粒细胞铁死亡的影响。目的1、探讨OMA是否影响卵巢功能下降(DOR)患者多次IVF累积妊娠结局和效率;2、探讨OMA是否影响DOR患者胚胎整倍体率及妊娠结局;3、探讨OMA是否增加种植失败者内膜炎(CE)和种植窗偏移的发生;4、检测OMA患者卵泡液铁死亡标志物及其与卵子质量的关系;5、探讨OMA对卵泡颗粒细胞铁死亡状态的影响。方法1、回顾Mirdametinib临床试验性分析493名DOR患者(OMA:90名;非OMA:403名)1079个IVF周期,比较妊娠结局及活产时间。2、回顾性配对分析100名DOR患者(按年龄、PGT类型及妊娠史1:4配对,OMA:20名;非OMA:80名)123个PGT周期,比较囊胚整倍体率及妊娠结局。3、回顾性分析:368名一次以上移植失败行CE检测者(OMA:40名;非OMA:328名),比较CE率及妊娠结局;30名反复种植失败者(OMA-ERA:10名;非OMA-ERA:20名)行内膜容受性评估(ERA),比较ERA类型占比、种植窗偏移率及结局。4、检测40名患者(按年龄及妊娠史配对,OMA组和非OMA组各20名)卵泡液铁离子、GSH及MDA,比较两组差异,并与卵子质量行相关性分析。5、检测并比较三组(OMA侧、OMA对侧和非OMA组,各8例)卵泡液铁死亡标志物和颗粒细胞线粒体形态、GSSG、MDA、ROS及通路蛋白Beclin-1、SLC7A11 及 GPX4 的水平。结果1、OMA和非OMA者在每取卵和每移植周期的种植率、活产率及每患者和每有优质胚胎者的累积活产率、活产时间的差异无统计学意义(P>0.05)。2、OMA和非OMA者在囊胚整倍体率、整倍体囊胚种植率、临床妊娠率、流产率及活产率上差异无统计学意义(P>0.05)。3、OMA组和非OMA组CE率、CD138转阴后累积妊娠率、活产率相似;OMA-ERA组和非OMA-ERA组种植窗偏移率及后续移植妊娠率相似(P>0.05)。4、OMA组首优势卵泡获卵率及总获卵率均明显低于非OMA组,OMA组卵泡液Fe2+及MDA升高,GSH降低,差异有统计学意义(P<0.05)。未获卵的卵泡液中GSH显著低于有获卵的卵泡液,GSH与OMA组D3优确认细节质胚胎率正相关(P<0.05)。5、OMA侧卵泡液Fe2+和MDA升高、GSH降低;OMA侧颗粒细胞线粒体改变、Beclin-1和SLC7A11高表达、GPX4抑制,伴ROS、GSSG和MDA升高;OMA对侧未出现以上改变。结论未行手术的卵巢子宫内膜异位囊肿可能并未影响卵巢储备功能下降患者IVF累积妊娠结局和达活产时间,未影响其PGT周期整倍体囊胚率和移植结局;在种植失败者中也可能并未增加其慢性子宫内膜炎和种植窗偏移的发生率;因此,对存在3-5 cm卵巢子宫内膜异位囊肿的DOR患者,在IVF前需慎重进行仅以改善妊娠结局为目的的手术治疗。但卵巢子宫内膜异位囊肿仍有可能通过诱导邻近的卵泡颗粒细胞铁死亡,产生氧化应激进而影响局部卵子的质量。

目Galunisertib体内的 分析影响断指再植术治疗手指末节完全离断伤再植成活率的相关因素，为手指末节完全离断伤患者采取相应的干预措施提供有效依据。方法 回顾性分析2019年1月至2022年12月无锡虹桥医院收治的70例手指末节完全离断伤患者的临床资料，两组患者均行断指再植术治疗，根据治疗结果分为失败组（断指再植失败患者，21例）与成功组（断指再植成功患者，49例）。统计两组患者的临床基线资料，通过单因素分析、多因素Logistic回归分析断指再植术治疗手指末genetic evolution节完全离伤患者再植成活率的危险因素。结果 失败组损伤类型为绞伤、受伤至手术时间为>6 h、术后毛细血管反应差、术后抑郁、术后感染的患者占比均高于成功组，失败组患者血小板计数低于成功组；多因素Logistic回归分析结果显示，损伤类型为绞伤、受伤至手术时间>6 h、术后毛细血管反应差、术后抑郁、术后感染、血小板计数低均为影响断指再植治疗手指末节完全离伤患者再植GSK J4采购成活率的危险因素（OR=1.103、1.078、1.090、1.080、1.074、1.061，均P <0.05）。结论 损伤类型为绞伤、受伤至手术时间>6 h、术后毛细血管反应差、术后抑郁、术后感染、血小板计数低均为影响断指再植术治疗手指末节完全离伤患者再植成活率的危险因素，对于存在危险因素的患者需要采取相应的干预措施，从而提高断指再植术的成功率。

目的 探讨硫辛酸注射液对糖尿病周围神经病变患者氧化应激反应与神经host genetics传导速度的影响。方法 按照随机数字表法将2020年1月至2021年8月盱眙县中医院收治的90例糖尿病周围神经病变患者分为对照组（45例，Berzosertib浓度给予甲钴胺注射液治疗）和观察组（45例，给予硫辛酸注射液与甲钴胺Dolutegravir生产商注射液治疗），两组患者均进行为期4周的治疗。比较两组患者临床效果，治疗前后神经病变主觉症状问卷（TSS）评分和神经传导速度，以及氧化应激指标水平。结果 观察组患者临床总有效率高于对照组；治疗后两组患者疼痛、烧灼感、感觉异常、麻木评分及血清丙二醛（MDA）水平均下降，且观察组低于对照组，正中神经运动传导速度（MCV）、感觉传导速度（SCV）及腓总神经MCV、SCV、血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平均升高，且观察组高于对照组（均P<0.05）。结论 硫辛酸注射液与甲钴胺注射液联合治疗糖尿病周围神经病变患者，可有效缓解其疼痛、烧灼感、感觉异常等症状，加快神经感觉及运动传导速度，减轻机体氧化应激反应，疗效显著。

目的 探究MRTX1133 MW前列腺小体外泄蛋白(PSEP)检测试剂盒用于诊断良性前列腺增生(BPH)患者组织学前列腺炎(HP)的可行性，并探究其与该类患者前列腺体积、残余尿量、国际前列腺症状评分(IPsoft bioelectronicsSS)、游离前列腺特异性抗原(fPSA)、总前列腺特异性抗原(tPSA)、fPSA/tPSA比值之间的相关性。方法 选取2021年11月-2022年11月于徐州市中心医院就诊并行手术治疗且术后病理诊断为BPH或BPH伴HP的104例患者进行研究，术前指导患者独立填写IPSS评分表，收集其前列腺selleckchem RepSox体积、残余尿量、fPSA、tPSA、fPSA/tPSA等临床资料，同时收集其术前中段晨尿并进行PSEP检测。结果 PSEP诊断BPH患者HP的灵敏度为93.51%,特异度为70.37%,与术后病理诊断结果比较具有高度的一致性(Kappa=0.663),同时PSEP含量与血清中tPSA的含量呈正相关(r=0.242,P=0.040)。结论 PSEP在诊断HP方面同样具有较高的临床诊断价值，可为BPH患者HP的诊断提供可靠依据，有益于提高该类患者的诊断率。

目的 探究MRTX1133 MW前列腺小体外泄蛋白(PSEP)检测试剂盒用于诊断良性前列腺增生(BPH)患者组织学前列腺炎(HP)的可行性，并探究其与该类患者前列腺体积、残余尿量、国际前列腺症状评分(IPsoft bioelectronicsSS)、游离前列腺特异性抗原(fPSA)、总前列腺特异性抗原(tPSA)、fPSA/tPSA比值之间的相关性。方法 选取2021年11月-2022年11月于徐州市中心医院就诊并行手术治疗且术后病理诊断为BPH或BPH伴HP的104例患者进行研究，术前指导患者独立填写IPSS评分表，收集其前列腺selleckchem RepSox体积、残余尿量、fPSA、tPSA、fPSA/tPSA等临床资料，同时收集其术前中段晨尿并进行PSEP检测。结果 PSEP诊断BPH患者HP的灵敏度为93.51%,特异度为70.37%,与术后病理诊断结果比较具有高度的一致性(Kappa=0.663),同时PSEP含量与血清中tPSA的含量呈正相关(r=0.242,P=0.040)。结论 PSEP在诊断HP方面同样具有较高的临床诊断价值，可为BPH患者HP的诊断提供可靠依据，有益于提高该类患者的诊断率。

我国西南地区蔬菜系统氮肥用量大、产量水平不高，优化氮肥管理和筛选适宜的蔬菜品种对西南地区蔬菜提质增产具有重要的意义。但是目前基于优化氮管理策略对该地区不同蔬菜类型的影响尚不清楚，因此，以西南地区典型的6个大白菜品种为研究对象，设置不施氮和优化施氮两个氮水平，明确优化氮管理对不同大白菜产量、氮肥利用率、品质的影响，并比较不同品种间的差异，以期筛选出适宜西南地区种植的高产优质大白菜品种，为西南地区乃至全国大白菜种植提供参考。结果表明，与不施氮肥处理相比，优化施氮条件下，大白菜总产量提高了130%～289%，显著提高了植株养分吸收，同时维生素C含量提高了5.0%～38.3%，类黄酮含量降低了4.5%～275.0%，显著提高了大白菜营养质量指数。优化氮肥管理条件下，不同大白菜品种对氮肥的响应程度不同，山东四号和丰抗70大白菜品种对氮肥Fer-1临床试验响应程度最大，属于氮素高效型品种，其产量、氮肥利用率、氮素累积量、磷素累积量和维生素C含量均分别显著高于其他品种4.0%～Antineoplastic and I抑制剂42.0%、44%～225%、10.6%～61.4%、12.9%～52.6%和1.2%～8.3%，且对中Angioimmunoblastic T cell lymphoma微量营养元素也有较好地吸收，其中丰抗70品种的钙、镁、锌累积量最高，山东四号品种的铁、锰累积量最高。总体来看，山东四号和丰抗70品种在产量、养分吸收、氮肥利用率和品质方面均明显优于其他品种。因此，这两种大白菜品种适宜在西南地区推广种植。

目的 分析外用生长因子用于脉管畸形患儿介入术后的皮肤护理效果。方法 将60例行脉管畸形介入治疗的患儿随机分为对照组和观察组各30例，对照组术后涂抹多磺酸粘多糖乳膏进行皮肤护理，观察组术后涂抹外用生host immunity长因子进行皮肤护理，对比两组护理效果、红肿时间、保湿时间及创面愈合时间、瘢痕增生、感染等发生IACS-010759溶解度情况。结果 观察组护理总有效率高于对照组(P<0.05);观察组护理后红肿时间及创面愈合时间均短于对照组，保湿时间长于对照组(P<0.05);观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.05);观察组护理满意度高于对照组(P<0.05)。结论 外用生长因子用于脉管畸形患儿介入术后皮肤护理中可有效减出血、水肿等情况，缩短创面愈合时间，促进创面修复，减少色素沉着、瘢痕增生PCI-32765使用方法等情况，满意度高，具有较高应用价值。

目的：探讨石斛合剂含药血清对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制。方法：体外培养小鼠肾小球足细胞（MPC5），筛选高糖造模浓度和时间及石斛合剂含药血清最佳给药浓度；将细Handshake antibiotic stewardship胞分为正常组（5.5 mmol·L~(-1)葡萄糖+10%空白血清）、模型组（30 mmol·L~(-1)葡萄糖+10%空白血清）、石斛合剂含药血清组（30 mmol·L~(-1)葡萄糖+10%石斛合剂含药血清），更多铁死亡抑制剂（Fer-1）组（30 mmol·L~(-1)葡萄糖+10%空白血清+1μmol·L~(-1) Fer-1）。采用试剂盒检测细胞中Fe~(2+)、乳酸脱氢酶（LDH）水平；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞谷胱甘肽（GSH）、过氧化脂质（LPO）含量；荧光探针检测活性氧（ROS）水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测足细胞中肾母细胞瘤基因-1(WT-1）、结蛋白（Desmin）、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4）和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4) m RNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测足细胞中WT-1、Desmin、ACSL4和GPX4蛋白表达水平。结果：与空白组比较，30 mmol·L~(-1)高糖干预48 h可显著降低足细胞活力（P<0.01),10%石斛合剂含药血清改善高糖诱导的足细胞活力最为显著（P<0.01）。与正常组比较，模型组足细胞内Fe~(2+)、LDH、LPO、ROS水平及Desmin、ACSL4 m RNA和蛋白表达显著升高（P<0.01),GSH水平及WT-1、GPX4 m RNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，石斛合剂含药血清组足细胞内Fe~(2+)、LDH、VX-765生产商LPO、ROS水平及Desmin、ACSL4 m RNA和蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01),GSH水平及WT-1、GPX4 m RNA和蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论：石斛合剂含药血清对高糖诱导的足细胞损伤具有保护作用，与其抑制铁死亡有关。

目的终末期肝病(end-stage liver diseases,ESLDs)是一种以肝功能异常及全身表现为特点的临床综合征,急性肝衰竭与慢性肝病均可导致终末期肝病。据世界卫生组织统计,全球每年因终末期肝病死亡者约300万。我国作为乙肝大国,其中20%~30%的患者将发展为终末期肝病。终末期肝病已经成为一个高发病率、高死亡率的全球性公共卫生问题,是危害国民健康和经济负担的重大疾病之一。原位肝移植是Alisertib价格目前临床治疗肝衰竭最有效的方案,然而供体肝脏来源短缺使得只有很少患者可能得到肝移植治疗,甚至许多患者在等待肝源的过程中死亡。其他问题还包括移植后出现排斥、手术风险大及手术成本高等,这些缺点很大程度上限制其在临床上终末期肝病治疗的应用和推广。近几年,再生医学的研究开展迅速,细胞移植,尤其是肝细胞移植已经在终末期肝病的治疗中取得了一定的效果。然而,由于肝细胞体外难以扩增的特点,所以同样无法解决供体受限的瓶颈。越来越多的研究开始关注干细胞在肝病治疗中的应用。干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞类型。目前,通过干细胞移植治疗肝衰竭的基础研究取得了令人可喜的进展。筛选和确定可以用在疾病治疗的干细胞类型,是开展基于干细胞的治疗终末期肝病的基础。目前可供移植治疗终末期肝病的干细胞包括:多能干细胞即人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,ESCs)和人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hi PSCs),和成体干细胞,包括胆管树干细胞(biliary tree stem cells,BTSCs)、间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)、造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)等。BTSCs是治疗ESLDs的理想候选细胞。并且BTSCs具有向成熟肝细胞、胆管上皮细胞或功能性胰岛分化的潜能,是一类存在于胆道树管壁上的胆周腺体内的干细胞。与成熟肝细胞相比,BTSCs具有体外增殖能力,和具有组织获取来源广泛等优点;研究发现通过将胎儿来源的BTSCs移植到患者体内,3个月后患者术后MELD评分下降、肝功能改善,并且不需要持续的免疫抑制治疗。与ESCs等多能干细胞相比,BTSCs具有应用安全性,且可实现向功能性细胞的高效诱导分化成熟的能力;比脐带MSCs相比,BTSCs移植后可定植入受体肝脏,在体内分化成熟,发挥组织功能性修复和替代的功能。这些基础和应用研究都证明了BTSCs是一类具有低免疫原性、可在体内和体外分化成为功能性的肝细胞的干细胞类型。然而,BTSCs是成体干细胞,在供体组织中数量有限。前期研究中,无血清(Kubota`s Medium,KM)培养基可获得纯化的原代BTSCs,呈克隆样生长,但该体系下未能实现BTSCs的传代扩增。因此,BTSCs开展临床应用过程中存在的细胞数量有限问题亟需解决。建立良好的体外扩增体系被认为是维持细胞干性和细胞正常生理功能的关键。目前BTSCs的培养和扩增还主要借鉴早期已经建立的内胚层器官干细胞(如肠干细胞、肝干细胞等)的体外扩增方案,主要有共培养和Matrigel培养两种体系。由于共培养体系操作的繁琐复杂及饲养层制备过程可能出现污染等问题,基于水凝胶的三维培养方法逐渐变成了实现内胚层器官来源的上皮干细胞体外扩增的首选方法案。目前的水凝胶的三维体系主要基于Matrigel基底胶,是从小鼠软骨肉瘤中提取的基质成分。Matrigel基底胶的主要成分包括层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、硫酸肝素糖蛋白、基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)等。通过在Matrigel基底胶基础上添加多种生长因子的方法已经被证实可用于多种内胚层干细胞的长期培养扩增中。Huch M等人使用Matrigel基底胶体系在体外对肝干细胞进行培养并克隆为类器官,此种条件下培养的时间可长达数月之久,实现肝干细胞的长期培养。小分子化合物是内胚层干细胞体外扩增发挥的作用的关键成分。小分子化合物是分子量小于500道尔顿的单体物质,在i PSCs相关研究中已被证实可有效提高体细胞重编程的效率。Wang等人利用小分子化合物(转化生长因子-超家族I型激活素受体样激酶受体ALK4、ALK5和ALK7的抑制剂SB431542、非ATP竞争性MEK抑制剂PD0325901、G9a样蛋白和G9a组蛋白赖氨酸甲基转移酶抑制剂Bix01294、DNA甲基转移酶的非核苷抑制剂RG108、钙离子通道抑制剂Bay K8644等)实现了将消化道上皮细胞重编程获得类似定型内胚层的诱导内胚层干/祖细胞,并在该体系下实现对该内胚层干细胞长期传代扩增。这种基于小分子化合物替代生长因子的方式,极大的增加了干细胞扩增过程中的安全性,也同时有效降低了干细胞扩增所需的成本。因此,通过构建Matrigel基底胶和小分子化合物组合的体系,可为BTSCs的体外扩增提供可行方案。针对BTSCs临床应用数量MRTX849体外有限的问题,我们考虑对原KM培养基进行优化并构建体外传代扩增体系——粘多糖胶Glycogel体系,通过筛选促进BTSCs扩增的细胞因子和小分子化合物组分构成改良扩增培养基p KM,并且额外添加细胞外基质成分以实现BTSCs的传代扩增。本Glycogel体系中骨架基质是化学限定的,例如胶原蛋白或致密的胶原蛋白水凝胶;或非化学限定的,例如复合蛋白水凝胶。适合的复合蛋白水凝胶包含细胞外基质组分,如层粘连蛋白、胶原蛋白IV、透明质酸、硫酸肝素蛋白聚糖。这里我们使用2种:一种是可铺板、包埋的A骨架基质:来自小鼠肉瘤细胞的细胞外基质蛋白质的水凝胶。其可从商业来源获得,如Matrigel(Corning)。另一种是自制的添加到培养基中的B骨架基质,由适当比例的透明质酸(HA)和硫酸乙酰肝素(HS)混合使用的HAHS水凝胶。在本课题组前期的研究基础上,我们建立了一种基于粘多糖胶Glycogel的BTSCs培养体系。此体系提供的BTSCs扩增方法,不仅能够为BTSCs提供稳定的3D微环境,还增加了细胞扩增空间,减少外界刺激对干细胞的不良影响;在保证细胞大量扩增的同时,维持胆管树干细胞的干性,实现为h BTSCs治疗终末期肝病提供充足数量且功能稳定的种子细胞。同时,该体系的建立也可为其他干细胞来源肝细胞临床应用提供参考实验方案,最终实现细胞移植治疗肝病的突破性进展。方法1、根据人BTSCs的实验方法,对小鼠肝外胆管组织进行分离消化,使用KM培养基进行培养,确定小鼠BTSCs的细胞属性,为小鼠BTSCs的体外扩增体系提供金标准。并且通过转录组测序分析小鼠BTSCs与人BTSCs的相似性。2、查阅相关研究并结合实验室前期研究结果,筛选得到促进BTSCs扩增的细胞因子和小分子化合物的Glycogel组分以进行构建扩增培养基。观察更换培养基后细胞的生长状态。通过q PCR、免疫组化、流式分析、等实验技术比较,验证扩增培养基的效果,同时鉴定是否在该体系快速扩增时仍维持BTSCs干性的稳定。3、探索Glycogel细胞外基质组分的使用条件,实现小鼠BTSCs的2D和3D传代扩增,并观察传代后的细胞状态。4、借助活死染色试剂盒判断BTSC organoids的生存状态。5、原代BTSCs扩增的p KM成分,包括4种生长因子和6种小分子化合物,包括:EGF、R-Spindin1(RSPO1)、Noggin、Wnt3a、Bix01294、Bay K8644、RG108、SB431542、A83-01、Forskolin,这里简命名为10P(p KM)。按照涉及信号通路进行分组,通过类器官的形成效率和数量对10P进行评价,探索对于BTSCs扩增重要的细胞因子/小分子化合物。6、通过转录组测序结果分析研究3D Glycogel较2D Glgluteus mediusycogel促进BTSCs扩增的原因。7、利用硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶(HS3ST1)等研究3-O-硫酸乙酰肝素对BTSCs干性维持和体外扩增的作用机制。结果1、分离得到的小鼠原代BTSCs在KM培养基中呈克隆生长,表达BTSCs特异性基因Ep CAM、SOX17、PDX1,且免疫组化染色表达Ep CAM、CK19。第21天进行流式分析显示培养的细胞中Ep CAM+比例约为为84%±10.6%。第14天进行细胞计数,每只小鼠约获得2×104个目的细胞。2、分离得到的小鼠原代BTSCs在10p KM扩增培养基中快速扩增,第7天进行细胞计数可获得4.2×105个目的细胞,细胞数量大大增加。细胞形态呈上皮样细胞贴壁生长,核质比较高,同样表达胆管树干细胞特异性基因Ep CAM、SOX17、PDX1,且免疫组化染色表达Ep CAM+、CK19+。第7天进行流式分析显示培养的细胞中Ep CAM+比例约为82%±6.3%。3、对扩增培养基中的10P进行评价,发现RG108、A83-01、Forskolin、Bay K8644、RSPO1对于BTSCs的扩增和干性维持极其重要,并确定5p KM为最终使用的扩增培养基。4、传代时使用Matrigel包埋法形成囊状类器官可实现快速传代扩增,这种3D类器官传代扩增的方法至少可传代6代,可实现3×107细胞的获得。且通过转录组测序验证BTSCs特异性表达基因表达维持稳定。5、对于细胞外基质成分的研究发现,在不使用Matrigel的情况下,单独使用透明质酸水凝胶不足以支持BTSCs的体外扩增和维持,但是添加硫酸乙酰肝素和透明质酸的水凝胶,可以促进BTSCs的附着,实现BTSCs的传代扩增。6、生信数据表明在BTSCs体内3-O修饰硫酸乙酰肝素的酶(HS3ST1、HS3ST3A)表达。通过q PCR实验验证,其中HS3ST1的表达结果与生信结果一致。结论1、通过KM培养基培养可获得小鼠BTSCs克隆,且其中目的细胞比例为84%±10.58%。2、通过生长因子和小分子化合物(10p)构成的BTSCs扩增培养基10p KM,可有效扩增原代BTSCs,获得大量细胞且维持干性稳定。3、通过逐步筛选确定对BTSCs的干性维持和体外增殖有关键作用的5p KM。4、筛选获得了适合BTSCs体外扩增的Glycogel成分。建立了基于Glycogel体系BTSCs的二维和三维的传代扩增方法。通过基于Matrigel的Glycogel体系能够获得BTSC organoids,可至少传代6代。5、在透明质酸水凝胶加硫酸乙酰肝素(HAHS)的Glycogel中,硫酸乙酰肝素是HAHS中支持BTSCs体外增殖的关键。6、HS3ST1在BTSCs高表达,确定3-O-硫酸乙酰肝素是硫酸乙酰肝素中支持BTSCs体外增殖的关键亚型。综上,我们通过小鼠BTSCs建立了一种Glycogel体系,并且提供了胆管树干细胞2D和3D的两种培养方法,且通过3D类器官培养能够实现稳定传代扩增,这为将来人的BTSCs的扩增提供参考和借鉴。本课题将解决BTSCs临床应用数量不足的问题,为胆管树干细胞应用于临床创造条件。