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目的 探索瓜蒌薤白汤对肺纤维化的作用机制。方法 将SPF级SD大鼠分为空白组（Control）、模型组（Model）、吡非尼酮组（Pirfenidone0.15g·kg~(-1)）、瓜蒌薤白汤低剂量组（GLXB-L 2.4g·kg~(-1)）、瓜蒌薤白汤高剂量组（GLXB-H4.8g·kg~(-1)）。除空白组外，其余各组大鼠采用一次性向气管内滴注博来霉素复制特发性肺纤维化模型。造模第2天，开始灌胃给予各组大鼠相应药物，连续14d、28d。末次给药购买BYL719后，取材。ELISA（enzyme-linkedimmunosorbentassay）检测血清和肺泡灌洗液白细胞介素-4（interleukin-4， IL-4）、IL-6、IL-8水平；Masson染色检测大鼠肺组织中胶原纤维和肌纤维；免疫荧光法检测大鼠肺组织TGF-β、α-SMA蛋白表达；实时荧光定量PCR（quantitativereal-timePCR， RT-PCR）检测大鼠肺脏TNF-αmRNA、IL-4mRNA、IL-6mRNA表达。结果 博来霉素致大鼠肺纤维化模型制备成功，瓜蒌薤白汤可降低肺纤维化模型大鼠血清和肺泡灌洗液IL-4、IL-6、IL-8水平，下调肺组织TGF-β、α-SMA蛋白表达，降低TNF-αmRNA、IL-4mRNA、ILHIV- infected-6mRNA表达水平，缓解肺组织纤维化病变，且以瓜蒌薤白汤高剂量组效果明显。结论 瓜蒌薤白汤可以AMG510抑制剂通过抑制TGF-β信号通路，干预气道炎症反应，减少胶原沉积，从而干预肺纤维化进程。

目的铁死亡是2012年发现的一种新型细胞死亡的方式,与多种生理和病理过程有关。GPX4是GPX家族中关键的含硒半胱氨酸的抗氧化酶,通过抑制脂质过氧化物的形成,在保护细胞免受铁死亡过程中发挥关键作用。靶向蛋白降解方法的发现和快速发展受到了越来越多的关注,特别是蛋白水解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimeras,PROTACs)。本研究旨在合成靶向 GPX4 的PROTAC降解剂,来诱导GPX4蛋白的降解并促使细胞发生铁死亡,以实现肿瘤治疗的目的。方法分析GPX4与ML162的共晶,在确定结合位点的基础上对溶剂暴露区的结构进行改造,得到ML162的衍生物作为靶向GPX4的配体结合不同的连接子及E3泛素连接酶的配体,从而合成多个系列的PROTACs。用Western blotting法进行GPX4降解活性的初步评价,用CCK-8法测定相关化合物的细胞毒性。并用流式分析法测定脂质过氧化物ABT-263作用(LPO)水平来进一步确证铁死亡的表征。结果 在本研究中,我们利用ML162衍生物和CRBN/VHL E3连接酶的配体,设计、合成和评估了 32个不同结构类型的GOncological emergencyPX4-PROTACs。Western blotting检测结果显示,大多数PROTACs对GPX4的降解效率比较温和,其中GDC-22对GPX4的降解效率最高(10 μM降解率为45%)。然而GDC-22在后续实验中未观察到明显的细胞毒性和增强的细胞内脂质过氧化水平。另外,GDC-11在GPX4降解(10 μM降解率为33%)、细胞毒性(IC50=11.69 μM)和脂质过氧化物积累(与DMSO相比增加了 2倍)方面表现出相对平衡的生物学特征,显示出典型的铁死亡特征。鉴于它们对GPX4的降解作用比较温和,我们推测对GPX4配体ML162的修饰可能不适合与GPX4结合。为了证实这一假设,进行了分子对接和量子化学理论计算。这项工作为后续GPX4-PROCobimetinib生产商TACs的研究奠定了基础,同时,为我们课题组正在进一步设计和合成靶向GPX4降解剂提供了思路。结论 利用PROTAC技术来靶向降解GPX4是诱导细胞发生铁死亡的一种有效策略,本项工作合成了大量的、结构类型不同的PROTACs为后续的研究奠定了基础。

对17种石蒜属Lycoris植物的叶绿体全基因组序列基本特征及其系统发育关系进行分析。结果显示，石蒜属植物的叶绿体基因组具有典型的四分体环状结构，全长158 335～158 761 bp，总GC含量37.7%～37.8%。基因数量为133～137个，蛋白质编码基因、核糖体RNA基因、转运RNA基因数目稳定。含有散在重复序列41～57个，检测到66～74个SSR位点，其中单核苷酸A/TLEE011半抑制浓度重复最多。密码子偏好性分析发现，编码密码子数量在26 448～26 740个之间，共有31个密码子的RSCU值大于1，而其中29个密码子的第三位碱基为A或U，表明17个石蒜属植物偏好A或U结尾的密码子。叶绿体全基因组比对和共线性分析结果显示，石蒜属植物叶绿体基因组不存在重排和倒置，具有较高的保守性，非编码区的变异频率高于编码区。IR边界分析表明，由于IR区的收缩和扩张，部分物种中的rpl22、rps19、ndh F基因均出现跨过JLB或JSB边界的情况。核苷酸多态性分析筛选出trn G-UCC、atp F-atp H、psb C-trn S-UGA-psb Z、trn G-GCC-psb Z、rpl32、trn L-UAG-rpl32-ccs A、rps15-ycf1等高变PF-02341066价格基因和基因间隔区可作为分子标记用于系统发育分析。以叶绿体全基因组序列构建的分子系统树显示，石蒜属物种形成单系，支持该属独立的分类地位。传统的基于雄蕊和花冠形态划分的整齐花亚属和石蒜亚属plasma biomarkers的物种均未形成单系，基于雄蕊与花被片的位置关系对石蒜属植物属下物种进行分类仍值得商榷。同时，系统发育分析支持安徽石蒜L. anhuiensis、江苏石蒜L. houdyshelii、稻草石蒜L. straminea、玫瑰石蒜L. rosea杂交起源的观点，并揭示了它们可能的母本。

目的 探讨改良动静脉吻合及扩张头静脉对终末期肾功能衰竭血液透析患者细小血管内瘘成熟的影响。方法选取2014年1月至2022年4月连州市人民医院肾内科收治的43例前臂细小血管的维持性血液透析患者作研究对象，按随KPT-330机数字表法分成观察组（n=21）和对照组（n=22），观察组采用改良动静脉吻合及扩张头静脉的手术方法建立内瘘，对照组则采用传统内瘘手术方法，比较两组患者首次使用内瘘时头静脉直径、桡动脉流速、内瘘血流量、首次使用内瘘时间，以及两组的手术成功率、内瘘成熟率、术后1个月及1年的selleckchem通畅率。结果 观察组的头静脉直径大于对照组，桡动脉流速、内瘘流量高于对照组，首次使用内瘘时间短于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组的内瘘手术成功率、成熟率、术后1个月及1年通畅率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 改良动静脉吻合及扩张头静脉的手术方式有利于提高前臂细小血Virus de la hepatitis C管内瘘手术成功率、成熟率和通畅率，值得在临床上推广应用。

近年来,基于纳米酶的催化疗法已广泛应用MLN8237 IC50于肿瘤治疗。然而,如何精确调控纳米酶的催化活性,确保其高效杀伤肿瘤的同时不对周围正常组织产生毒性,是目前纳米酶领域仍面临的巨大挑战之一。通过调控纳米酶的结构特性,如形貌、缺陷位点等,能够精准地调节纳米酶的催化性质和抗肿瘤功能。基于此,本文拟通过控制纳米酶在肿瘤和正常组织中的结构,来实现抗肿瘤和生物安全的智能转换。本文采用溶剂热法制备了一种中空海胆状氧化钼纳米酶(Mo O_(3-x)nanourchins,Mo O_(3-x)NUs),其中间内核直径约为142.8±13.3 nm,表面长刺长约为116.7±24.6 nm,宽约为15.4±3.3 nm,其表面具有丰富的Mo~(5+)和活性反应位点。Mo O_(3-x) NUs在酸性环境下发挥类过氧化氢酶和类氧化酶活性,通过级联催化反应生成大量毒性的超氧阴离子(Superoxide anion,·O_2~-);而在中性和碱性环境下,Mo O_(3-x) NUs响应性降解为安全无毒的钼酸根离子。在细胞水平上确认了Mo O_(3-x) NU此网站s在p H 6.0环境下显著提高胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平并损伤线粒体,最终引起细胞凋亡;而在p H 7.4环境下,Mo O_(3-x)NUs因快速的氧化降解,不具备明显的细胞毒性snail medick。进一步在荷瘤裸鼠模型上通过光声成像验证了Mo O_(3-x) NUs可以在肿瘤部位实现长时间富集,显著提升了肿瘤组织ROS水平,并高效抑制肿瘤生长。此外,血液学评估和代谢研究表明了Mo O_(3-x) NUs具有良好的生物安全性。综上,本文通过调控纳米酶表面价态和缺陷位点,实现在肿瘤组织中高效催化而同时在正常组织中的生物降解,为构建在体内复杂疾病微环境中催化活性精准可控的纳米酶提供了新思路。

目的：探讨首发未经治疗青年重度抑郁症患者的脑功能网络变化特征。方法：收集24例首发重度抑郁症患者（抑郁症组）及年龄、性别VE-822溶解度、受教育年限相匹配的25例健康志愿者（健康对照组），采用汉密尔顿抑郁量表（HAMD）对2组进行抑郁严重程度评定，2组均行头颅磁共振弥散张量成像（DTI）扫描，通过图论方法构建大脑网络，计算相关网络指标，应用Gretna的对模块进行估计，比较2组脑网络属性和模块化特征。结果：抑郁症组同配性较健康对照组增高（t=2.391,P=0.024）；抑郁症组左侧补充运动区、右侧颞上回的介中心性值较健康对照组增高（t=selleck HPLC2.564,P=0.016;t=2.636,P=0.014）；抑郁症组左侧额上回、左侧颞中回、左侧枕中回、左侧中央旁小叶的节点效率较健康对照组降低（t=2.038,P=0.049;t=2.174,P=0.046;t=2.262,P=0.032;t=2.043,P=0.048）；抑郁症组右侧杏仁核、左侧脑岛、左侧缘上回的节点最短路径降低（t=2.079,P=0.047;t=2.086,P=0.047;t=2.244,P=0.034）。连边分析显示，抑郁症组右侧尾状核、右侧豆状Biomolecules壳核的连边强度较健康对照组下降（P=0.000;P=0.000）；右侧颞上回的介中心性值与HAMD评分呈负相关（r=-0.635,P=0.012）。结论：抑郁症组的脑网络发生异常，与抑郁症相关的某些脑区功能发生改变和重组有关，局部脑区功能可出现代偿。

研究背景与目的:早期肝脏发育和肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)发生中的共同特征是肝细胞快速增殖,阐明肝细胞增殖在发育过程中的调控机制有助于研究HCC的发生。尽管许多基因在肝脏发育早期参与了肝脏长大,但其机制还未被阐明。本研究发现,斑马鱼的肝脏从2dpf(day post fertilization,dpf)到5dpf快速长大。转录组分析显示,在不同阶段的肝细胞中,3dpf的肝脏中有813个肝细胞富集基因。其中,腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase proenzyme,AMD1)参与肝脏发育的机制未见报道。AMD1是多胺合成重要酶之一,而多胺是一种低分子量的简单脂肪胺,几乎存在于所有生物体中。多胺在哺乳动物中对于蛋白质及核酸的合成、抗氧化损伤、离子通道活性、细胞增殖、分化及凋亡中起着重要作用。有研究显示,amd1参与肝癌发生的调控,但其具体机制远未被阐明;在肝脏发育过程中,amd1是否参与肝脏的长大不得而知,所以我们以斑马鱼为模式动物意在揭示amd1在肝脏长大中的作用及分子调控机制及是否参与肝癌发生的调控,并探究肝脏长大与肝癌发生机制的异同。材料与方法:本研究以斑马鱼为模式动物,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建斑马鱼amd1突变体,构建Tg(fabp10:GFP)转基因鱼模型观察斑马鱼肝脏发育情况,运用整胚原位杂交技术分析amd1在野生型和突变体中的表达,结合免疫荧光等实验技术观察amd1突变体中肝脏长大是否收到影响。运用RNA-Sequence深度测序技术分析amd1影响肝脏发育的分子机制,通过原位杂交实验及荧光定量PCR确定下游具体的调控信号分子,并利用斑马鱼Kras~(G12V)肝癌模型,研究amd1在肝癌发生中的作用。最后使用药物处理及原位杂交等实验技术探究amd1在肝脏发育及肝癌发生之间分子机制的异同。结果:1.在肝脏快速长大过程中,amd1在肝细胞中高度表达利用Tg(fabp10:GFP)的转基因胚胎分离72小时、第7天及成鱼肝脏的肝细胞并进行RNA-Sequence测序分析,发现813个基因在3dpf肝细胞中高度表达,amd1是其中之一。amd1在3dpf肝细胞中的表达高于成年肝细胞,在7dpf肝细胞中表达下降,可能是肝脏长大控制的候选基因。2.amd1在斑马鱼早期发育中的详细表达模式原位杂交数据显示,amd1为母源性因子,24hpf以前普遍表达,24hpf后,amd1主要局限表达在头部及内胚层细胞。重要的是,amd1在3dpf和4dpf肝脏区域高表达。3.amd1突变体的构建使用CRISPR/Cas9技术构建amd1突变体,在F1成年斑马鱼中,我们筛选出了两种有用的突变体:突变1中碱基“CCCG”改为“TT”,这种编辑导致CDs区168bp处出现终止密码子(我们将其命名为amd1~(168));突变体SB2035802中,7个碱基“CGGCAGG”被删除,CDS区141bp处出现了终止密码子(我们将其命名为amd1~7)。4.在amd1突变体中肝脏长大受抑通过Tg(fabp10:GFP)的转基因背景的胚胎以及原位杂交实验发现,从3dpf到5dpf,amd1~(7-/-)胚胎肝脏体积小于对照组。细胞增殖及凋亡实验表明,在amd1~(7-/-)胚胎中肝细胞增殖大幅下降,而肝细胞凋亡未显著增加。该结果表明,在肝脏长大过程中,肝细胞增殖需要amd1。5.在amd1~(7-/-)胚胎中skp2表达下降利用RNA-Sequence分析amd1~(7-/-)胚胎在4dpf被干扰时的基因发现,在下调的基因中,有4个基因位于m TOR信号通路中,包括skp2。荧光定量PCR实验发现,skp2及其下游基因表达均下调。原位杂交实验显示,skp2在amd1~(7-/-)胚胎中的表达显著下调,包括在肝脏中的表达。6.skp2在肝脏发育中起关键作用,并介导amd1调节肝脏长大原位杂交实验显示,skp2为母系表达基因,在24hpf前普遍表达,24hpf后局限于肝脏、肠道、眼、后脑及中脑边界。利用CRISPR/Cas9技术产生skp2嵌合体突变胚胎,发现skp2表达下调后,早期胚胎发育和肝脏长大受到抑制。在Tg(fabp10:GFP)转基因胚胎和野生型胚胎中,使用skp2抑制剂SMIP004在肝脏快速长大过程处理胚胎,发现在4dpf时肝脏体积变小。此外,细胞增殖实验表明,skp2抑制降低了肝细胞增殖,过表达skp2 m RNA恢复了肝脏大小。7.skp2介导amd1调节斑马鱼HCC模型中的肝细胞增殖使用流式细胞仪从正常肝脏和肝癌模型中分选GFP标记的肝细胞,分析amd1及skp2的表达,荧光定量PCR显示amd1和skp2在HCC模型中表达均上调。在肝癌模型中,amd1的功能丧失降低了肝脏的大小及肝细胞的增殖,使用SMIP00KD025纯度4阻断skp2后,amd1~(7-/-)胚胎中肝脏体积减小,肝细胞增殖水平下降。结论:本研究系统地鉴定了一些可能参与斑马鱼发育过程中肝脏长大的未表征基因,并揭示了amd1-skp2轴在肝脏长大和HCC进展过程中调in vivo biocompatibility节肝细胞增殖的作用。这项工作还提供了一个数据库,这将有助于阐明肝细胞增殖在肝脏长大和HCC进程中是如何调节的机制。

目的 研究克霉唑联合维selleck SCH727965生素D治疗孕早期念珠菌性阴道炎的疗效及对妊娠结局的影响。方法 选取2017年5月～2020年5月本院收治孕早期念珠菌性阴道炎患者100例。按治疗方式的不同分为对照组（n=50）和观察组（n=50）。对照组给予克霉唑阴道片治疗,实验组在对照组的基础上,同时每天口服维生素D胶囊。比较selleckchem CH-223191两组疗效。结果 观察组患者总有效率显著高于对照组（P <0.05）。治疗前两组CRP、TNF-α、IL-6、25-羟维生素D水平比较,P>0.05,与治疗前相比,治疗后两组CRP、TNF-α和IL-6水平均显著降低（P <0.05）,25-羟维生素D水平显著上升（P<0Biotinidase defect.05）,观察组CRP、TNF-α和IL～6水平显著低于对照组（P <0.05）,观察组25-羟维生素D水平显著高于对照组（P <0.05）。结论 克霉唑联合维生素D治疗孕早期念珠菌性阴道炎的疗效较为显著,可降低炎症反应及妊娠不良结局发生率。

光学成像,如近红外荧光成像,能够以高灵敏度和特异性实现疾病相关生物标志物的非侵入性和实时可视化。然而,近红外荧光成像的穿透深度通常有限,使得光学成像只能观察到浅表的疾病相关分子的变化。尽管荧光成像的穿透深度有限,但和光声技术结合,可以解决穿透深度有限的问题。因此,具有荧光和光声效应互补优势的近红外荧光/光声双模成像有望改善活体疾病相关生物标志物的成像输出。此外,组织自身荧光、光漂白和探针浓度的变化会引起一定的假信号,这使得仅在单通道开启近红外荧光或光声成像不可靠。比率型的检测通过引入参考信号代替绝对的信号输出,极大地提高了信号的稳定性和准确性,对活性分子的准确定量检测具有很大的潜力。因此,近红外荧光/光声双比率分子探针是活体定量分析检测的强有力分子工具。然而,由于以下原因,目前常用的近红外染料还远远不能成为开发高性能近红外荧光/光声双比率型分子探针的理想支架:(1)普通荧光/光声性能易调控的近红外染料,如含氧半花菁,其吸收和发射波长不够长,在构vitamin biosynthesis建近红外双比率探针时无法与目前商业化的活体荧光成像和光声成像仪器相匹配;(2)很多近红外染料是高荧光发射分子,然而其荧光产生途径(辐射跃迁)和光声产生途径(非辐射跃迁)总是相互竞争的,这将不可避免地影响荧光信号与光声信号的输出,所以很难在单个近红外染料母体中平衡荧光与光声的能量分布。本文针对以上近红外荧光/光声双比率分子探针所面临的棘手问题,通过平衡辐射跃迁与非辐射跃迁的能量分布以及增加染料分子的吸收和发射波长,构筑了一系列双比率近红外荧光/光声染料支架,并设计了近红外荧光/光声双比率分子探针用于肿瘤乏氧的定量检测、肿瘤诊疗与定量预测研究。主要内容如下:(1)针对单个近红外染料所吸收的激发能是固定的,其荧光产生途径(辐射跃迁)和光声产生途径(非辐射跃迁)总是相互竞争的问题,本工作提出能量平衡策略,在经典含氧半花菁染料分子结构中,通过硫取代氧原子的简单设计,巧妙地调控了荧光辐射跃迁和光声非辐射跃迁之间的能量平衡,构建双比率型近红外荧光/光声染料支架。由于硫原子取代氧原子,使得该类半花菁染料,展现出双比率型近红外荧光/光声性能;与经典的含GDC-0973分子量氧半花菁染料相比,其吸收与发射波长明显红移,且荧光量子产率明显下降和光声性能明显上升,这一升一降显示探针分子中荧光的辐射跃迁与光声的非辐射跃迁之间达到能量平衡。(2)基于第二章优化此网站的新型含硫半花菁支架,本章设计合成了近红外荧光/光声双比率型硝基还原酶探针AS?Cy?NO_2,这使得肿瘤乏氧在体内的深度定量可视化成为可能。探针AS?Cy?NO_2,由一个新的近红外荧光/光声硫杂半花菁(AS?Cy?1)和一个4?硝基苯部分组成,当被与肿瘤乏氧相关的生物标志物(硝基还原酶)激活时,表现出10倍的近红外荧光信号增强(I_(773)/I_(733))和2.4倍的光声信号增强(PA_(730)/PA_(670))。体内实验结果表明,通过比率光声的3D最大强度投影光声图像对异种移植乳腺癌模型中精确区分实体瘤中高度异质性的氧分布,展示出双比率近红外荧光/光声在活体成像定量分析方面的可行性。(3)从单分子诊疗一体化探针出发,针对单个近红外染料分子的高效光热治疗功能与荧光成像产生路径相冲突的问题,本章在近红外荧光/光声双比率染料骨架中引入对光吸收增强的分子转子用于同时增强其光热、光声性能和保留荧光性能,设计合成了一系列近红外荧光/光声双比率诊疗一体化分子染料。实验结果证明分子转子的引入能有效提高半花菁染料的摩尔消光系数(PBS中ε_(max)=6.7×10~4,提高了1.9倍相比于对照PBS中ε_(max)=3.5×10~4)。通过测试这些染料的光热与荧光性能,结果表明,相比于对照染料,修饰改造后的染料如AF?1F的光热转化效率(photothermal conversion efficiency,PCE)提高了1.4倍(63%,对照染料BS?Cy?1,45%);荧光量子产率不变(PBS中AF?1F,Φ=0.019;BS?Cy?1,Φ=0.020)。幸运的是,p H诱导的吸收光谱和发射光谱的最大吸收和发射波长都发生了相应的红移,这将为实现荧光/光声双比率成像提供良好的前提条件。设计合成的双比率单分子诊疗探针在肿瘤精准治疗方面具有潜在的应用前景。(4)基于设计合成的双比率单分子诊疗探针,本章报道了首个特异性激活其比率荧光(FL_(850)/FL_(750))、比率光声(PA_(770)/PA_(670))和光热信号的单分子诊疗探针(AF?1F?NO_2),响应肿瘤过表达酶(硝基还原酶)启动光热治疗并定量评估光热治疗在体内的疗效。利用FL_(850)/FL_(750)和PA_(770)/PA_(670)对硝基还原酶反应的不同开关,AF?1F?NO_2可以实现体内硝基还原酶的非侵入性和定量双模成像,确认乏氧诱导光热治疗后4T1肿瘤中硝基还原酶水平的降低。特别是探针的三维(3D)图像可以精确地验证光热治疗后4T1荷瘤小鼠中较小的非均匀性氧分布。通过协同调控平衡策略构筑双比率型诊疗分子探针为精准医学其他治疗方式的体内诊断、治疗和疗效定量预测提供了新的思路。

目的:本研究旨在探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins,GSP)的不同干预时长对孤独症(autism spectrum disorder,ASD)模型鼠的行为以及海马中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-protein kinase,PI3K)、蛋白激GSI-IX核磁酶B(protein kinase B,PKB或AKT)及其磷酸化水平的影响,探究葡萄籽原花青素改善孤独症模型鼠行为的最佳干预时长及潜在的药物作用机制,从而为葡萄籽原花青素治疗ASD提供新思路和新方向。方法:本研究选取30只清洁级Wistar大鼠(其中雄性大鼠10只,雌性大鼠20只),在参考了Schneider孤独症模型鼠的造模方法之后,以雌雄2:1的比例进行合笼,次日清晨以查到阴栓记为妊娠第1天(E1),随后分笼单独饲养。对怀孕12.5天的Wistar大鼠腹腔注射丙戊酸钠(valproic acid,VPA),剂量为600mg/kg(依250g/L溶于生理盐水中),从而来进行孤独症模型鼠的制备,正常组腹腔注射等量生理盐水。通过记录仔鼠的发育学与行为学来对大鼠进行鉴定。采用随机数字表法,将14日龄仔鼠模型组仔鼠随机分成葡萄籽原花青素干预组GSP-I组、GSP-II组以及孤独症模型对照组VPA-I组、VPA-II组,将正常组大鼠随机分成NS-I组、NS-II组。GSP-I组与GSP-II组从P14开始每日灌胃葡萄籽原花青素100 mg/kg(葡萄籽原花青素用生理盐水配成10mg/m L的溶液),分别持续14天和21天;分别对模型对照组(VPA-I组、VPA-II组)和正常组(NS-I组、NS-II组)每日灌胃等量生理盐水,每组内两小组分别持续14天和21天。各组所有仔鼠均在相同环境下给予充足的饲料和水进行饲养,观察并记录生长发育及行为学数据。于P28、P35进行发育与行为学检测,采用HE染色检测海马神经元形态学变化,应用免疫荧光进行PI3K、AKT蛋白定位和定量的检测,采用蛋白质印迹法WB来检测海马PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达情况。结果:1.孤独症模型组孕鼠产LY2835219浓度仔数量减少,且存在流产现象;2.模型组与正常组相比,各日龄体重均较低;睁眼时间较晚,出现延迟的情况,并且完成方向趋向性测试所需的时间较长。模型组与正常组相比,出现重复刻板行为、社会交流、社会交往障碍以及学习记忆障碍,逃避潜伏期增加,但穿越平台次数无明显差异。与正常组相比,VPA-I组仔鼠海马组织CA3区神经元细胞肿胀,出现空泡情况,杂乱无序,排列疏松;VPA-II组散在个别海马神经元细胞肿胀,排列无序。对于PI3K的平均荧光强度,VPA-I组略高于NS-I组,VPA-II组略高于NS-II组,对于AKT的平均荧光强度,VPA-I组与NS-I组相似,VPA-II组略低于NS-II组,但均无Medicopsis romeroi明显差异。与正常组相比,VPA-I组PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT较正常组表达增高,除AKT蛋白表达无明显差异外,其余均存在统计学差异;VPA-II组PI3K、AKT较正常组表达降低,而pPI3K和p-AKT较正常组表达升高,除p-AKT蛋白表达无统计学差异外,其余均存在统计学差异。3.葡萄籽原花青素干预后,与VPA-I组相比,GSP-I组体重增加、重复刻板行为的累计时间缩短,嗅闻社会性液体气味时间增加,逃避潜伏期降低,然而尽管脑重,穿越平台次数,在目标象限停留的时间有所增加,但均无统计学意义;与VPA-II组相比,GSP-II组体重、脑重增加,重复刻板行为的累计时间缩短,嗅闻社会性液体气味时间增加,第1、2天的逃避潜伏期降低,但第3、4天逃避潜伏期均无明显差异,此外,目标象限停留时间增加,穿越平台次数有所增加。4.葡萄籽原花青素干预后,GSPI组海马组织CA3区神经元较VPA-I组细胞间隙减小,排列相对整齐,GSP-II组海马组织CA3区神经元较VPA-II组则无明显区别。在免疫荧光检测中,GSP-I组PI3K的平均荧光强度较VPA-I组略低,GSP-I组AKT的平均荧光强度较VPA-I组高,GSPII组PI3K与AKT的平均荧光强度较VPA-II组略高,但以上均无明显区别。5.葡萄籽原花青素干预后,28日龄时,GSP-I组PI3K、AKT、p-PI3K较VPA-I组降低,GSPI组p-AKT较VPA-I组升高,然而GSP-I组AKT较VPA-I组降低但无统计学意义;35日龄时,GSP-II组PI3K较VPA-II组降低,而GSP-II组AKT、p-PI3K、p-AKT较VPA-II组升高,仅PI3K和p-PI3K存在统计学意义。结论:1.葡萄籽原花青素干预能够改善孤独症模型鼠的重复刻板行为以及学习记忆能力;2.葡萄籽原花青素干预后,孤独症模型鼠海马PI3K蛋白表达降低;3.不同葡萄籽原花青素干预时间对孤独症模型鼠的行为和海马PI3K/AKT的影响也不同,28日龄与35日龄均存在一定的改善效果,本研究中,28日龄对行为以及PI3K的干预效果相对较好。