目的:非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是目前困扰全球一部分人的一种代谢性疾病,减重手术已经明确可以缓解NAFLD。在疾病的发展过程中,线粒体发挥着重要作用,但具体机制不明。本研究通过临床样本、小鼠减重模型以及相应细胞模型,运用多种实验技术手段,探究减重代谢手术对线粒体功能的影响,研究线粒体在NAFLD发生发展中的具体作用。研究方法:第一部分是采用患者标本进行相关研究,首先对患者的肝脏组织进行HE染色,根据结果分为肥胖无肝组织变性组(OB CON)和肥胖NASH组(OB NASH)两组。采用每组的肝组织进行蛋白免疫印迹以及聚合酶链式反应实验技术,检测相应指标-死亡相关蛋白激酶2(DRAK2)的蛋白表达水平,以及相应m RNA层面的转录水平。第二部分是通过构建小鼠模型来进行相关研究,采用高脂饲料喂养小鼠,构建高脂模型,分别为正常组、高脂组、假手术组和胃袖状手术组。其中正常组的小鼠采用正常饮食喂养,其余三组均采用高脂饲料喂养,待造膜成功后继续高脂饲料喂养8周。到时间后取各组小鼠肝脏组织以及血清,对肝组织进行HE染色以及油红O染色,并且检测肝脏组织和血清中的TC、TG,观察模型是否构建成功。采用蛋白免疫印迹以及聚合酶链式反应检测相关指标DRAK2的蛋白表达水平以及相应m RNA转录水平。第三部分为细胞实验,首先使用棕榈酸(PA)对L02以及Hep G2细胞系进行造膜,构建高脂模型,通过油红O染色观察PA是否造膜成功。待造膜成功后,分别从蛋白水平和RNA水平检测DRAK2的变化。下一步进行设计PKD的小干扰RNA序列,对L02以及Hep G2细胞系进行转染,分别检测相应转染效率;待确定Si-PKD是有效链后,重新进行转染以及PA造膜,分为正常组,PA组和转染组。分别对上述3组进行DRAK2的检测,应用蛋白免疫印迹以及聚合酶链式反应检Lapatinib说明书测相蛋白表达水平以及相应m RNA转录水平。除此之外,对上述三组,即正常组,PA组和转染组进行线粒体膜电位检测,以此来反映线粒体功能。另外,使用荧光探针来检测正常组,PA组和转染组的ROS含量,以此来反映ROS与DRAK2以及线粒体功能之间的具体关系。除此之外,使用流式细胞仪来检测正常组,PA组和转染组的细胞凋亡情况,通过此方式来说明DRAK2与凋亡之间的关系。结果:在第一部分中,OB NASH组患者的HE切片相比于OB CON组能观察到明显的气球样变;在相关指标DRAK2检测方面,不管是在蛋白水平还是转录水平,OB NASH组患者的表达量均高于OB CON组。在第二部分中,在小鼠的HE染色里,我们发现NC组切片中,肝组织中并没有太多的气球样变,属于是正常肝组织切片;HFD组和SHAM组切片中,肝脏气球样变明显,并且有一定程度的纤维化改变;在SG组中的切片,气球样变的程度要比HFD组和SHAM组的轻,肝脏脂肪变程度有所缓解。小鼠肝组织油红O染色中,NC组几乎无红色脂滴,HFD组与SHAM组有一定数量的红色脂滴,布满切片;SG组中也有红色脂滴,但是较HFD组与SHAM组则有所减轻。我们在小鼠肝组织中进行相关蛋白的检测,与NC组相比,DRAK2的蛋白水平表达量在HFD组与SHAM组得到增加,在进行SG手术之后得到一定程度的下降。在小鼠肝组织中进行相关指标RNA的检测中,与NC组相比,HFD组与SHAM组中DRAK2的转录水平的含量要更高,在SG组中得到下降。我们对小鼠肝组织和血清分别测量了TC、TG的含量。首先在肝组织中,NC组的TC、TG含量均低于HFD和SHAM组,同样,与HFD与SHAM组相比,SG组的TC、TG含量也有所下降。其次,在血清中我们也发现,与NC组相比,HFD组与SHAM组血清中TC、TG的含量要更高,在SG组的含量要有所下降。在第三部分中,我们对L02和Hep G2细胞系中使用PA构建高脂模型,PA组关于DRAK2的表达量,不管是在蛋白水平还是在转录水平均高于NC组。在第三部分实验中,我们使用小干扰RNA对L02和Hep G2细胞分别进行转染,进行敲Genomic and biochemical potential低PKD,转染效率均在50%以上。我们使用小干扰RNA对L02和Hep G2细胞分别进行转染,将PKD进行敲低,对目的基因DRAK2进行蛋白和转录水平的检测,PA组DRAK2的表达增加,在给予两组细胞转Cell Cycle抑制剂染后,转染组的表达量有一定程度的下降。在凋亡检测中,三个分组中PA组的凋亡率最高,在给予转染后,凋亡率有所下降,但依然高于NC组。在线粒体膜电位的检测过程中,PA组绿色荧光的占比要高于NC组,在转染组中,绿色荧光占比下降;即PA组膜电位较NC组降低,在转染之后,膜电位升高。我们还使用荧光探针检测ROS含量,红色荧光即为探针所结合的ROS,PA组中红色荧光远大于NC组和转染组,即细胞经过PA处理后,ROS含量增加,在转染组中ROS含量则下降。结论:在患有非酒精性脂肪性肝病的患者中,脂肪变程度越高,DRAK2的表达量越高。非酒精性脂肪性肝病的发生伴随着氧化应激、炎症等变化,体内产生的ROS通过刺激PKD促进DRAK2的表达,进而影响线粒体功能;从而无法将肝细胞中的脂滴转运出去。然而减重手术可以通过降低体内的氧化应激水平减少ROS的释放,从而改善线粒体功能,缓解肝脏脂肪变程度。