目的:1.使用香烟烟雾提取物(CSE)处理RAW264.7巨噬细胞,检测线粒体功能以及细胞焦亡过程中的相关分子水平,研究香烟烟雾对巨噬细胞线粒体功能和细胞焦亡的损伤作用及机制。2.探索胆红素在CSE导致的巨噬细胞线SCH727965体内实验剂量粒体功能损伤及细胞焦亡的保护效应及机制,为寻找新的靶点防治香烟烟雾暴露导致的儿童呼吸系统疾Forensic pathology病提供理论依据。方法:1.对CSE和胆红素的最佳处理条件进行摸索:设置不同浓度的CSE和胆红素处理RAW264.7巨噬细胞,使用CCK-8法检测细胞活性,观察CSE和胆红素对细胞活性的影响并确定CSE和胆红素对细胞的处理浓度和时间。2.细胞分组及处理:根据摸索出来的实验条件,将细胞分为四组:对照组(完全培养基)、CSE组(5%CSE或25%CSE)、胆红素组(0.2μM Bil)、胆红素+CSE组(0.2μM Bil+5%CSE或25%CSE)。3.细胞凋亡/坏死及细胞焦亡相关指标的检测:Annexin V-FITC/PI染色检测细胞坏死和凋亡情况;使用细胞免疫荧光检测NLRP3炎症小体的表达;ELISA检测细胞上清IL-1β和IL-18的表达。4.线粒体功能相关指标的检测:JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜受损情况;ROS特异性染料DCFH-DA对小鼠巨噬细胞进行染色后,使用流式细胞计数法测定荧光强度及ROS阳性巨噬细胞数目比例;增强型ATP检测试剂盒检测细胞内ATP浓度。结果:1.CCK-8结果显示:0.1μM Bil、0.2μM Bil和1μM Bil组分别和对照组(0μM Bil)相比,细胞活性的差异无统计学意义(P>0.05)。大于1μM胆红素处理组(5μM Bil、10μM Bil和20μM Bil),和对照组(0μM Bil)相比,细胞活性降低(P<0.05),尤其是20μM胆红素最为明显(P<0.05);0.2μM的胆红素对细胞活性的影响呈时间依赖性,处理的时间越长,抑制细胞活性的作用越强。CSE对巨噬细胞活性的影响呈浓度和时间依赖性,浓度越大,时间越长,对细胞活性的抑制作用越强;CSE处理细胞24小时,和对照组相比,1%CSE组巨噬细胞活性增加(P<0.05),5%CSE组和25%CSE组的细胞活性降低(P<0.05);0.2μM的胆红素预处理细胞24小时,能减轻5%CSE对细胞活性的抑制(P<0.05),而对25%CSE组的细胞活性的影响差异无统计学意义(P>0.05)。2.通过流式细胞术发现:和对照组相比,5%和25%CSE组细胞坏死率增加凋亡率降低;和5%CSE组相比,25%CSE组细胞坏死率增加,凋亡率降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。胆红素预处理细胞24小时,0.2μM Bil+5%CSE组和0.2μM Bil+25%CSE组和未被胆红素处理组(5%CSE组和25%CSE组)相比,细胞坏死率降低(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05)。3.和对照组相比,5%CSE组和25%CSE组NLRP3表达增加,IL-1β和IL-18水平增加;和未经胆红素预处理的组别(5%CSE和25%CSE)相比,胆红素预处理组(0.2μM Bil+5%CSE组和0.2μM Bil+25%CSE)NLRP3的表达量降低,IL-1β和IL-18水平降低。4.和对照组相比,CSE组(5%和25%CSE)巨噬细胞内ROS增加,线粒体膜电位降低,细胞内ATP浓度降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。和未被胆红素预处理的CSE组CP-456773采购(5%和25%CSE)相比,胆红素预处理组(0.2μM Bil+5%CSE和0.2μM Bil+25%CSE)细胞内ROS含量降低,线粒体膜电位增加,细胞内ATP浓度增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CSE可导致巨噬细胞线粒体功能障碍、细胞活性降低以及细胞焦亡的发生。胆红素能减轻CSE导致的巨噬细胞线粒体功能障碍及细胞焦亡。