目的:瘙痒是常见于多种疾病的一种顽固症状,严重影响患者健康和生活质量,其治疗和护理已成为重点关注的临床问题。《本草纲目》等典籍记载,构树根皮被广泛用于治疗皮炎、癣症等皮肤病。现代研究亦表明构树根皮具有抗炎、抗菌等多种作用,但其止痒作用及相关机制尚未明确。本研究旨在考察构树根皮的止痒作用,并探讨可能的作用机制,为临床治疗和护理瘙痒患者提供理论依据和新的可能。方法:1.构树根皮的乙醇回流提取及工艺优化采用乙醇回流法提取构树根皮;以总黄酮和多酚为指标,采用响应面法优化构树根皮乙醇提取物的提取工艺。2.构树根皮乙醇提取物的止痒有效萃取部位筛选依次采用乙酸乙酯、水饱和正丁醇对构树根皮乙醇提取物进行萃取;将小鼠分为正常组、模型组、乙醇提取物组、乙酸乙酯萃取物组、正丁醇萃取物组和水部位萃取物组,将不同E7080提取物制备成水凝胶,连续在小鼠皮肤局部涂抹7天。末次给药后,除正常组外,其余组小鼠通过皮下注射4-氨基吡啶(4-Aminopyridine,4-AP)诱导急性瘙痒,观察小鼠抓挠行为变化,记录并统计其30 min抓挠总次数,比较构树根皮乙醇提取物不同萃取部位的止痒效果;采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)和超高液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(Ultra-High performance liquid chromatography and quadrupole time-of-flight mass spectromete,UPLC-QTOF-MS/MS)初步分析有效萃取部位的物质成分。3.有效萃取部位止痒作用的评价及作用机制研究将小鼠分为正常组、模型组和高中低剂量有效萃取部位组,连续局部皮肤涂抹相应水凝胶7天,末次给药后除正常组,其余组小鼠通过皮下注射4-AP和氯喹(Chloroquine,CQ)分别诱发组胺依赖性痒和非组胺依赖性痒,观察小鼠抓挠行为变化,记录并统计其30 min抓挠总次数。将小鼠分为正常组、模型组和高低剂量有效萃取部位组,除正常组,其余组小鼠通过局部连续7天涂抹丙酮、乙醚混合液和蒸馏水(Acetone-ether-water,AEW)建立小鼠慢性瘙痒模型,从造模第4天开始连续涂抹相应水凝胶4天,记录并统计实验第1、3、5和7天小鼠1 h内抓挠总次数;拍照记录小鼠背部造模处皮肤外观变化,采用苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色进行皮肤病理组织学分析;采用酶联免疫法检测小鼠血清和皮肤中白介素(Interleukin-4,IL-4)、IL-6、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量;Western blot法分析核因子κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)亚体p65、磷酸化p65(p-p65)和瞬时受体电位香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)的表达情况;在此基础上再次建立AEW诱导小鼠慢性瘙痒模型,分为正常组、模型组、TRPV1抑制剂组和有效萃取部位联合TRPV1抑制剂组,记录统计各组抓挠次数并采用Western blot检测TRPV1的表marine-derived biomolecules达。结果:1.构树根皮乙醇回流提取的最佳工艺构树根皮乙醇回流提取的最佳工艺为:提取温度75°C、提取时间117 min、料液比1:16(g/m L)、乙醇浓度70%。在该条件下,总黄酮、多酚的实际提取量分别为(23.93±0.30)mg/g和(14.69±0.56)mg/g。2.构树根皮乙醇提取物的止痒有效萃取部位对构树根皮乙醇提取物进一步萃取,得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水部位萃取物。与正常组相比,模型组小鼠30 min抓挠总次数明显增多(P<0.05);与模型组相比,构树根皮乙醇提取物组和正丁醇萃取物组小鼠从第10 min开始抓挠行为明显减少,且30 min抓挠总次数显著低于模型组(P<0.05);而乙酸乙酯萃取物组和水部位萃取物组小鼠的抓挠次数与模型组相比没有明显差异(P>0.05)。正丁醇萃取物的指纹图谱中存在10个主要峰,其中7号峰保留面积最大,占36.01%,经UPLC-QTOF-MS/MS分析,该物质为绿原酸。3.有效萃取部位的止痒作用及作用机制在4-AP和CQ分别诱导的两种急性瘙痒模型中,模型组小鼠高频次的抓挠行为明显多于正常组,且25 min后抓挠次数才开始出现减少,其30 min抓挠总次数显著高于正常组小鼠(P<0.05);外用正丁醇萃取获悉更多物中、高剂量后,小鼠抓挠现象明显缓解,第10 min或第15 min抓挠次数开始下降,30 min抓挠总次数均显著低于模型组(P<0.05),且该作用随剂量增加而增强;而低剂量正丁醇萃取物组小鼠的抓挠次数与模型组相比没有明显差异(P>0.05)。AEW诱导的慢性瘙痒实验中,与正常组相比,模型组小鼠7天内抓挠次数持续增加(P<0.05),皮肤干燥起皮且表皮厚度明显增加(P<0.05),同时小鼠血清和皮肤中IL-4、IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05),皮肤中p-p65和TRPV1的表达明显上升(P<0.05)。与模型组比,正丁醇不同剂量干预后小鼠的抓挠次数从第5天开始明显下降,皮肤干燥程度减轻,且表皮厚度明显减少(P<0.05);小鼠血清和皮肤IL-4、IL-6和TNF-α含量也明显降低(P<0.05),皮肤中p-p65和TRPV1的表达明显减少(P<0.05)。与单独使用TRPV1抑制剂组相比,TRPV1抑制剂联合正丁醇萃取物组的小鼠实验末期1 h内的抓挠次数更少(P<0.05),但两组皮肤中TRPV1表达无差异(P>0.05)。结论:1.正丁醇萃取物是构树根皮止痒的有效萃取部位,其含量最高的物质成分为绿原酸。2.构树根皮正丁醇萃取物对4-AP和CQ引起的组胺依赖性及非组胺依赖性急性瘙痒均有抑制作用,同时还可缓解AEW引起的慢性瘙痒,并减轻小鼠皮肤干燥程度和表皮增厚,这可能与抑制NF-κB通路、调节炎症反应,以及减少皮肤TRPV1表达和痒觉传导有关。