目的:探究中国汉族人群细胞色素P4502C9酶(CYP2C9)基因遗传多态性的分布规律,基于多重PCR及二代测序技术开发出全新的CYP2C9基因的基因分型检测体系,并通过构建完整的体外表达系统对新发现的CYP2C9变体进行生物学功能研究及药物代谢活性研究。方法:本研究招募了 163例中国汉族人群进行血液样本采集,然后通过磁珠法提取出各样本Telaglenastat临床试验的基因组DNA以便进行后续的基因筛查工作。同时成功地开发出了一种基于多重PCR靶向捕获测序技术的新的基因分型检测体系,高效地实现了 CYP2C9基因遗传信息数据库的建立。应用酵母细胞体外表达系统,将新发现的CYP2C9变体与CYPOR在酿酒酵母细胞微粒体中共表达,并通过Western Blot技术及定量分析验证目的蛋白的表达。利用药物代谢研究平台开展了 10种新型CYP2C9变体对两种探针药物氯沙坦及格列美脲的体外代谢活性测定。结果:1、除野生型CYP2C9*1外,本研究还检测到40个CYP2C9基因的等位基因变体,其中包括17个以前报道过的非同义突变(CYP2C9*2、*3、*8、*13、*16、*29、*31、*34、*36、*37、*39、*45、*48、*53、*56、*60、*75),13 个同义突变和 10个未在PharmVar网站上列出的新的非同义突变(L71R、P163S、T301M、E326K、C372R、I389V、Himmunizing pharmacy technicians (IPT)396Y、N398H、G431R、I488F)。2、本研究结果显示,中国汉族人群中最常见的缺陷等位基因是CYP2C9*3,等位基因频率为3.998%,7.57%的研究对象为*1/*3的杂合子;其余非同义等位基因变体大多与野生型杂合,总基因型频率小于4.5%,说明这些等位基因在中国汉族人群中罕见。3、Western Blot 及定量分析结果显示,除 Pro163Ser、Thr301Met、Glu326Lys、Gly431 Arg和Ile488Phe在酵母细胞中的蛋白表达水平显著低于野生型外(p<0.05),其余新发现的CYP2C9变体的蛋白表达水平与野生型相当。4、使用两种典型CYP2C9探针药物氯沙坦和格列美脲评价变异体的代谢活性,结果显示,Thr301Met、Glu326Lys和Gly431Arg3个变体几乎失去了催化活性,其余大部分变体的体外药物代谢活性显著升高。结论:1、本研究成功开发出了一种新的CYP2C9基因分型检测体系,快速、准确、低成本地实现了CYP2C9基因遗传信息数据库的建立。2、中国汉族人群CYP2C9基因多态性的分布特点是少见突变只有*3,同时存在多种频率极低的罕见突变,且多与野生型杂合,总基因型频率小于4.5%。3、本研究发现了 10种新的非同义突变,其中7种尚未登记在公共数据库中,可被视为国际首次报道。4、体外生物学功能研究显示,在10种新的非同义等位基因变体中,除Pro163Ser、Thr301Met、Glu326Lys、Gly431Arg和IlPS-341体内实验剂量e488Phe外,其余变体的蛋白表达水平与野生型相当;除Thr301Met、Glu326Lys和Gly431Arg 3个变体几乎失去了催化活性外,其余大部分变体均为快速代谢型。