鹿鞭(Penis et Testis Cervi)为鹿科动物梅花鹿(Cervusnippon Temminck)或马鹿(Cervuselaphus Linnaeus)的阴茎和睾丸。宰杀后,割取阴茎及睾丸,除去残肉及油脂、固定于木板上风干。亦可用沸水浇烫后置烤箱80℃烤干。具有补肾精、壮肾阳、强腰膝的功效。目的:为了挖掘鹿鞭中潜在的活性成分;研究鹿鞭治疗肾阳虚大鼠生精功能障碍的生物学机制;探讨鹿鞭治疗肾阳虚生精功能障碍的作用及疗效;为推广和应用鹿鞭治疗肾阳虚生精功能障碍提供理论基础。方法:1.首先使用BCA蛋白浓度试剂盒对鹿鞭水提物进行蛋白浓度的测定;再利用凝胶渗透色谱仪对鹿鞭水提物蛋白分子量分布检测;最后利用液相色谱法,超高效液相色谱-串联质谱法,气相色谱-质谱联用法对鹿鞭水提物的中的氨基酸类成分,固醇类成分,长链脂肪酸类成分,短链脂肪酸类成分,核苷酸类成分,生物胺类成分进行分析。2.通过Genecards数据库获取疾病主要靶点,利用BAT-MAN数据库收集鹿鞭的活性成分、作用靶点,并用STRING数据库对靶点基因进行GO与KEGG富集,同时构建“药物-成分-靶点-通路”网络。利用Cytoscape对网络进行可视化分析。筛选出鹿鞭治疗肾阳虚潜在的生精功能障碍的通路与靶点;利用分子对接进行验证分析。3.通过氢化可的松诱导肾阳虚模型;通过H&E染色观察睾丸、肾脏和肾上腺的病理变化;ELISA法测定大鼠血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT);使用q RT-PCR检测生殖相关基因的表达水平;通过免疫组化检测睾丸中ARG1的表达量;使用湿片法检测大鼠精子浓度与活力。结果:1.鹿鞭水提物的蛋白含量为50.7%。在70-130k Da蛋白占10.71%,小于70k Da蛋白占82.7%;鹿鞭水提物中有16种氨基酸,排名前五的是甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸、丙氨酸、精氨酸;鹿鞭水提物中有15种激素,排名前五的是17-羟基孕烯醇酮、雌三醇、17-羟孕酮、21-羟孕酮、雌二醇;鹿鞭水提物中24种长链脂肪酸,排名前5的是棕榈酸、硬脂酸、油酸、二十二碳六烯酸甲酯、花生四烯酸;鹿鞭水提物中含有8中短链脂肪酸,有乙酸、己酸、正丁酸、丙酸、异戊酸、异丁酸、正戊酸;鹿鞭水提物中含有5种核苷酸,有鸟嘌呤核苷酸、腺嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、次黄嘌呤核苷酸、胞嘧啶核苷酸;鹿鞭水提物中含有4种生物胺,有酪胺、β-苯乙胺、色胺、组胺。2.网络药理学分析结果显示鹿鞭潜在化合物与疾病的交叉靶www.selleck.cn/products/INCB18424点一共有303个;鹿鞭能调控2802个GO条目与206条KEGG条目发挥治疗生精功能障碍的作用;精氨酸生物合成通路是治疗肾阳虚生精功能障碍的潜在通路;分子对接结果显示精氨酸生物合成通路中的NOS1,NOS2,NOS3,ARBest medical therapyG1,CPS1,GLUL与雌二醇具有强烈的结合能。3.鹿鞭水提物能够显著恢肾阳虚大鼠血清中睾酮,黄体生成素,卵泡刺激素,促肾上腺皮质激素、皮质醇五种激素水平,同时鹿鞭能够激活精氨酸生物合成通路,能改善肾阳虚大鼠睾丸,肾,肾上腺的病理状态;显著恢复睾丸中生殖相关标志物的表达水平,抑制睾丸中ARG1蛋白表达水平;鹿鞭水提物能显著恢复肾阳虚大鼠精子浓度与精子活力。结论:鹿鞭水提物中蛋白含量高IDN-6556 MW达50.7%并且富含16种氨基酸,15种激素,24种长链脂肪酸,8种短链脂肪酸,5种核苷酸,4种生物胺,是一种高营养膳食补充剂,为治疗肾阳虚生精功能障碍提供物质基础。鹿鞭潜在化合物与疾病的交叉靶点一共有303个,鹿鞭中能够通过2802个GO条目与206条KEGG条目发挥治疗生精功能障碍的作用鹿鞭潜在化合物众多,调控肾阳虚大鼠生精功能障碍的生物学机制复杂,为治疗肾阳虚生精功能障碍提供理论依据。鹿鞭水提物能够改善肾阳虚大鼠睾丸,肾,肾上腺的病理变化;恢复肾阳虚大鼠睾酮,黄体生成素,卵泡刺激素,促肾上腺皮质激素、皮质醇激素水平,恢复睾丸中生殖相关标志物的表达水平。为治疗肾阳虚生精功能障碍提供数据支撑。鹿鞭水提物可能通过精氨酸生物合成通路来调控肾阳虚生精功能障碍大鼠,恢复大鼠的精子活力与浓度。