Cytochalasin H对小鼠脾细胞增殖的抑制作用及其对Ca~(2+)/CaN/NFAT信号通路的影响

【目的】研究红树林植物大红树内生真菌Phomopsis asparagi DHS-48得到的次级代谢产物cytochalasin H对小鼠（Mus musculus）脾细胞的免疫抑制活性及其作用机制。【方法】用不同浓度（3、6、12、25、30μmol/L）cytochalaselleck化学sin H处理小鼠脾细胞，通过CCK-8活力测定法检测其对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA）诱导小鼠脾细胞增殖的抑制作用；流式细胞术检测cytochalasin H对小鼠脾细胞凋亡的影响；免疫荧光实验检测cytochalasin H对细胞中NFAT入核及钙离子内流的影响；酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA）和免疫蛋白印迹法（Western blotting）测定cytBoard Certified oncology pharmacistsochalasin H对脾细胞中NFAT信号通路的影响。【结果】CCK-8实验表明，cytochalasin H对于正常小鼠脾淋巴细胞的毒性比环孢菌素（Cyclosporin A,Cs A）弱，半抑制浓度IC_(50)=(35.07±1.16）μmol/L；流式细胞术显示，cytochalasin H对ConA刺激的脾淋巴细胞无促凋亡作用；cytochalasin H对ConA诱导增殖的小鼠脾淋巴细胞具有显著的抑制效果，IC_(50)=(14.81±0.81）μmol/L，且呈剂量依赖性；免疫荧光结果表明，cytochalasin H在浓度为15μmol/L时显著地抑制了钙离子内流；Western Blotting结果显示cytochalasin H对脾淋巴细胞中CaN、NFAT蛋白（nuclNaporafenibear factor of activated T-cells,NFAT）的表达具有显著的抑制作用；免疫荧光结果显示，cytochalasin H抑制细胞浆内的NFAT转移到细胞核；ELISA测试结果证明，cytochalasin H能显著抑制下游细胞因子白介素-2(IL-2）的分泌（α=0.05）。【结论】Cytochalasin H通过抑制Ca~(2+)/CaN/NFAT信号通路转导显著抑制T细胞增殖和活化。