虫媒病毒是通过嗜血节肢动物叮咬脊椎动物进行传播,引起人畜共患疾病,不仅会对畜牧业造成严重影响还对人类的生命健康造成威胁。云南位于中国西南部,属于热带-亚热带,较高的年均气温和充沛的降水为节肢动物的繁殖提供了有利条件。云南接壤的东南亚是登革病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒等多种虫媒病毒的高发地,便利的交通位置更加促进了虫媒病毒跨境传入云南,增加我省虫媒疾病的流行风险。本研究在云南部分地州进行广泛的媒介昆虫的样本采集,通过一代测序和宏病毒组学方法进行虫媒病毒的筛查。研究发现云南磨憨口岸附近的活牛牛蜱的荆门蜱病毒携带率为56.67%(68/120)。经过对其4段基因全长的核酸序列同源关系进化分析显示,该毒株与邻近国家老挝的荆门蜱病毒株表现出更密切的亲缘关系提示荆门蜱病毒传播的可能性较大。本研究在2020年7月份至2022年7月份间采集到的云南7个州/市3510只蚊样本中一代测序筛查结果表明:筛查到了7种病毒,其中人畜共患病毒3种分别是乙脑病毒、芒市病毒和骚扰阿蚊整体病毒,昆虫特异性病毒3种,分别是库蚊黄病毒、广平病毒、和YS63845说明书unnan Picorna-like virus。每种病毒的阳性标本批感染率为乙脑病毒5.41%(2/37)、芒市病毒2.70%(1/37)、骚扰阿蚊整体病毒2.70%(1/37)、库蚊黄病毒2.70%(1/37)、广平病毒2.70%(1/37)、Yunnan Picorna-like virus 5.41%(2/37)。其中在构建的乙脑病毒E基因同源关系进化树中发现本研究筛查到的乙脑病毒与广东三带喙库蚊中发现的乙脑病毒表现出更密切的亲缘关系,芒市病毒与最原始的德宏分离株DH13M041相似度最高。对库蚊黄病毒E基因分析发现,可能是一株新亚型的库蚊黄病毒。通过广平病毒构建的NS5基因进化树发现来自广州的JM17156病毒株与本研究中检测到的病毒株亲缘关系较近,骚扰阿蚊整体病毒与Sa X06-AK20病毒株全长相似度为91.89%,且数据库中仅有一株相似毒株。使用C6/36细胞对37组蚊样本进行病毒分离,分离到2株可以稳定传代的病毒株,一株骚扰阿蚊整Annual risk of tuberculosis infection体病毒和一株库蚊黄病毒,这是云南第一次分离得到骚扰阿蚊整体病毒。本研究选取10个蚊样本库,进行宏病毒组学分析,其中丰度最高的病毒科为分体病毒科、整体病毒科以及金色病毒科,一代测序筛查到的病毒在宏病毒组测序结果中均被检测到。本研究中Picorna-like virus疑似新型病毒,为了进一步阐明该病毒株的基因组和病原学特征,本研究着重对该病毒进行了基因注释和分离培养。结果显示:通过开放阅读框的搜索以及保守结构域的鉴定,绘制了该病毒基因组图谱。该病毒基因组全长为9035 bp,包括3个开放阅读框以及3个结构域,分别是RNA解旋酶,杯状病毒科衣壳蛋白,RNA依赖性RNA聚合酶。基于这三个结构域构建了进化树,分析其病毒类型及同源关系,结果显示该病毒属于小RNA病毒样超家族中的病毒,独立于小核糖核酸目中目前所分类的家族中。本研究建立了该病毒q RCR的检测方法,评估该病毒在C6/36细胞中的增殖情况,发现该病毒不在C6/36细胞中增殖,但可以感染C6/36细胞,并且不感染Vero E6细胞,综合先前研究提示该病毒属于昆虫特异性病毒。综上所述,本研究在蜱中检测到荆门蜱病毒,蚊中检测到乙脑病毒、芒市病毒库蚊黄病毒、广平病毒、骚扰阿蚊整体病毒和Yunnan Picorna-like virus,其中检测到荆门蜱病毒与来自东南亚老挝地区的病毒株有着更密切的进化关系。云南蚊和蜱中携带的虫媒病毒有较高的多样性,应该加强对入Fulvestrant作用境虫媒病毒的检测,同时也应该对云南地区的虫媒病毒进行持续监测,预防云南新发和再发虫媒病毒的爆发,保证云南地区人民的健康以及牲畜的安全。