抗菌肽(AMPs,Antimicrobial Peptides)是一种具有抗菌活性的小分子多肽,因其抗菌活性强,毒性低,在临床市场上具有广泛的应用前景。然而,由于抗菌肽在生物体内含量较少,提纯工艺较为复杂,生物提取产量不能满足临床需求,而化学合成法虽然可以快速获取抗菌肽,但成本较高,难以实现产业化,导致目前已上市的应用于临床的抗菌肽较少。大肠杆菌表达系统是基因工程领域中应用最广的表达系统,具有遗传图谱明确、操作简单、表达周期短、产量高等优点。鉴于大肠杆菌表达系统具备的优良特性,本研究采用基因工程手段利用该表达系统对拮抗革兰氏阴性细菌的抗菌肽LR_(GG)进行表达,以期达到抗菌肽量化生产的目的,为后续临床应用提供理论参考。研究结果如下:(1)本研究成功构建了融合蛋白表达载体p QE-GFP-LR_(GG),通过IPTG诱导表达及镍柱纯化,获得分子量约为31 k Da的融合蛋白GFP-LR_(GG)。经TEV酶切纯化后,获得较纯的抗菌肽LR_(GG),分子量约为1.9 k Da,大小与理论值相符。(2)融合蛋白GFP-LR_(GG)的最优表达条件为:采用2×YT培养基培养大肠杆菌至对数生长期,加入1.2 m M IPTG,在37.27℃条件下诱导4.18 h。在该条件,融合蛋白GFP-LR_(GG)产量提高了35.6%。(3)原核表达的抗菌肽LR_(GG)对革兰氏阴性细菌仍具有广谱的抑菌作用,可以在100min内杀灭超过99.99%的E.coli ATCC25922。同时,原核表达的抗菌肽LR_(GG)Structural systems biology具有良好的温度、p H、盐离子和血清稳定性,与化学合成的LR_(GG)特性基本相同。(4)原核表达以及化学合成的抗菌肽LR_(GG)均具有细胞选择性,无胚胎毒性,且原PF-03084014 MW核表达的抗菌肽LR_(GG)对大蜡螟感染模型有较好的治疗效果。(5)原核表达的抗菌肽LR_(GG)通过破坏革兰氏阴性菌细胞膜导致细菌死亡。综上所述,Y-27632溶解度本研究利用原核表达系统成功表达了抗菌肽LR_(GG),不仅提高了抗菌肽LR_(GG)产量,表达后的抗菌肽仍然具有抑菌活性,并维持原有的生理生化特性。该研究将为抗菌肽的广泛应用奠定了基础。