恶性胸膜间皮瘤细胞培养条件及CDKN2B对癌细胞的作用

目的 探讨不同培养条件(RPMI-1 640、DMEM和DMEM/F12培养液)对人AY-22989配制恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)组织中分离的MPM细胞传代的影响以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(cyclin dependent kinase inhibitor 2B,CDKN2B)对MPM细胞增殖、侵袭和凋亡的作用。方法 从MPM组织中分离细胞分别用RPMI-1 640、DMEM和DMEM/F12培养液培养。CCK-8检测细胞增殖,细胞核及染色体利用瑞氏-吉姆萨染色观察,免疫荧光实验检测MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1荧光强度。RT-qPCR和Western blot分别检测CDKN2B的mRNA和蛋白表达能力。Transwell检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 建立的MPM细胞在RPMI-1 640、DMEM和DMEM/F12培养液中传至第10代仍具有较好的活力,且MPM标志物Calretinin、CD141Dorsomorphin、CK5、EMA和WT-1在细胞中均表达,MPM细胞在RPMI-1 640培养液中活力较为稳定。CDKN2B在MPM细胞中低表达(P <0.05),过表达CDKN2B显著抑制MPM细胞的增殖(P <0.05)、侵袭(P <0.05)和上皮间质转化(P <0.01),促进细胞凋亡(P Paired immunoglobulin-like receptor-B<0.01)。结论 建立的MPM细胞可在RPMI-1 640培养液中稳定传代,CDKN2B可作为MPM诊断和治疗的潜在靶标。