CRISPR/Cas9介导的KIFC1基因敲除对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨KIFC1基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法 设计靶向KIFC1基因的sgRNAs并基于p Sp Cas9(BB)-2A-GFP载体构建重组质粒,共转染至He La细胞。通过流式细胞Anticancer immunity分选、有限稀释和测序验证筛选单克隆敲除细胞株。采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测敲除细胞的KIFC1转录及蛋白表达水平,利用相差显微成像、荧光共聚焦显微成像观察细3-MA小鼠胞核、微管骨架等细胞表型。通过生长曲线绘制、EdU标记、吖啶橙染色分析细Transmembrane Transporters抑制剂胞增殖、细胞周期及细胞凋亡情况。结果KIFC1基因缺失导致He La细胞形态结构发生显著变化,多核、微核及异常微管骨架的细胞明显增加,细胞周期紊乱,细胞晚期凋亡数量显著升高,细胞增殖能力下降(均P<0.05)。结论KIFC1基因缺失影响He La细胞微管骨架的组装并形成异常延伸和细胞分裂,进而导致细胞核形态异常、染色质丢失、细胞周期停滞、凋亡增加。