目的建立尾静脉注射阿霉素联合灌胃甲状腺素片所致肾阴虚水肿模型大鼠,观察泽泻、盐泽泻防治肾阴虚水肿模型大鼠的药效差别,探讨其作用机制,并进行泽泻、盐泽泻饮片体内外的成分差异比较,初步阐述药效差异与成分的关系。方法1.泽泻、盐泽泻对肾阴虚水肿模型大鼠的药效评价:雄性SD大鼠适应性饲养后按体质量随机分为正常组、模型组(甲状腺素75 mg·kg~(-1)+阿霉素2 mg·kg~(-1)/次)、阳性药组[六味地黄丸,1.4 g·(kg~(-1)·d~(-1))]、泽泻低剂量组[1 g·(kg~(-1)·d~(-1))]、泽泻高剂量组[4 g·(kg~(-1)·d~(-1))]、盐泽泻低剂量组[1 g·(kg~(-1)·d~(-1))]、盐泽泻高剂量组[4 g·(kg~(-1)·d~(-1))],共计7组,每组6只。造模第1天开始灌胃给药,正常组和模型组灌胃等体积饮用水,其余组以相应药物进行灌胃给药,连续给药28天,灌胃体积为1 m L·(100 g~(-1)·d~(-1))。造模14 d及最后1 d称重给药结束后立即将各组大鼠置于代谢笼中,24 h后取出,记录各笼大鼠的饮水量、尿量,并留取各笼大鼠尿液适量,采用全自动生化分析仪测量尿液中尿蛋白、尿肌酐、尿白蛋白含量;同时检测最后1 d尿液中钠、钾、氯离子的浓度水平。采用全自动生化分析仪测定血清CREA、UREA、ALB、TP、CHOL、TG的含量。采用HE染色法观察肾脏病理变化情况,免疫组化法检测肾脏AQP-1、AQP-2、NHE3、γ-ENa C蛋白的表达量,Real-time PCR测定肾脏中AQP-1、AQP-2 m RNA的转录水平。2.泽泻、盐泽泻防治肾阴虚水肿模型大鼠的机制研究:基于Illumina Hi Seq X测序平台,对正常组、模型组、泽泻低剂量组和盐泽泻低剂量组的大鼠肾脏组织样本进行转录组学的测序分析。通过分析各个组别大鼠肾脏的基因的表达差异情况,构建差异基因集并对差异基因集进行GO和KEGG富集分析,同时对泽泻和盐泽泻的结果进行比较,筛选关键的信号通路,并分析泽泻和盐泽泻低剂量组两者共有的关键基因的互作情况。筛选出核心靶点,从分子层面探究泽泻及其炮制品改善肾阴虚水肿症的潜在机制,同时探讨泽泻盐炙后增效的潜在原因。3.泽泻、盐泽泻化学成分的变化研究:(1)对泽泻盐炙前后的体外差异成分分析,通过UHPLC-Q-TOF-MS对泽泻炮制前后的化学成分进行测定,并结合SIMCA14.1软件分析,比较泽泻、盐泽泻在化学成分上的异同。(2)对泽泻盐炙前后的血清药物化学进行比较分析,SD雄性大鼠适应性饲养后随机分为正常组、泽泻组和盐泽泻组,每组3只,给药组灌胃相应药物水提液,给药剂量为10 g·kg~(-1)(大鼠生物等效剂量10倍),早晚各1次,连续3 d,空白组给予等体积饮用水,末次给药60 min后进行眼眶取血收集样品,离心收集上清,将同一组别的血清样品混合均匀后采用乙腈沉淀蛋白法沉淀蛋白,离心浓缩后用乙腈复溶,取上清进UPLC-Q-TOF-MS检测获得各样品总离子流图,并利用UNIFI软件对数据进行分析处理。结果1.泽泻盐炙前后对肾阴虚水肿模型大鼠的药效评价:结果显示泽泻盐炙前后均可改善肾脏滤过率、T3、T4、c AMP、c GMP及脂代谢水平,相关评价指标有所回调,其作用机制可能与纠正HPG轴紊乱,抑制AQP-1、AQP-2相关水钠通道蛋白表达有关,并且在HPG轴、肾脏滤过率、阴虚程度及水钠通道等指标上发现盐泽泻低剂量组效果优于泽泻低剂量组。2.泽泻盐炙前后防治肾阴虚水肿模型大鼠的机制研究:转录组测序结果发现与模型组相比,泽泻continuing medical education、盐泽泻低剂量组分别有522、682个差异基因,并且分别有352、480个差异基因在给药后表达量有显著回调(P<0.05)。富集分析结果表明,泽泻、盐泽泻低剂量组均能调控相关炎症反应和免疫过程,且盐泽泻低剂量组调控的基因靶点数目远远多于泽泻低剂量组,两者在PI3K-获悉更多Akt signaling pathway均有显著富集,可能是泽泻、盐泽泻改善肾阴虚水肿症的重要通路,通过PPI蛋白网络互作结果筛选出PTPRC、CD4、LCP2等10个核selleckchem心靶点。3.泽泻盐炙前后化学成分的变化研究:(1)通过UPLC-Q-TOF-MS对泽泻炮制前后的化学成分进行了测定,比较发现泽泻盐炙前后萜类成分的种类改变并不明显,实验中尚未发现炮制后增加或减少的化学成分。以各化合物的峰面积作为变量进行多元统计分析,结果显示两者在化合物含量上发生了明显改变,呈现聚类分布,表明泽泻盐炙前后含量上有显著变化。(2)通过血清药物化学分析比较泽泻盐炙前后入血成分的差异,发现在给予泽泻、盐泽泻水提液大鼠血清中分别推测得到20、14个成分,其中两者共有成分13个,包括5个原型成分和8个代谢成分,猜测泽泻、盐泽泻发挥肾阴虚水肿症治疗效果的可能物质基础是16-氧代泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B、C和泽泻醇A、B、C 7个成分。结论1.泽泻盐炙前后对肾阴虚水肿模型大鼠均有治疗作用,且盐泽泻低剂量组疗效优于泽泻低剂量组。2.泽泻与盐泽泻可能通过调控PI3K-Akt signaling pathway改善肾阴虚水肿症,且盐泽泻低剂量组调控的靶点数目多于泽泻低剂量组,功能更加广泛,可能是盐泽泻低剂量组药效优于泽泻低剂量组的潜在原因。3.泽泻盐炙过程中对化学成分的种类影响较小,主要改变了化合物的含量;但两者体内入血成分的种类差别不大,泽泻的代谢产物较盐泽泻丰富,盐炙可能增加了某些入血成分的含量。