二抗物种特异性对双色STORM成像的影响

随机光学重建显微术（Stochastic Optical Reconstruction Microscopy,STORM）基于免疫荧光标记技术，具有原理易懂、光路简单、分辨率极高等特点，一直受到科研工作者的青睐，但分辨率的提升也对抗体的特异性提出了更高的要求。相较一抗直接标记，“一抗+二抗”的间mice infection接标记法在实际应用中普适性更强。由于二抗相对一抗存在物种特异性的问题，生产时需要对其进行预吸附来提升物种特异性。为了探究二抗物种特异性对双色STORM成像的影响，本文基于经典的红细胞骨架模型中血影蛋白N端和C端的互斥位置关系，对二者使用高、低吸附二抗标记后分别进行双色STORM成像，对照模拟中有无信号窜扰条件下的互相关分析结果Trichostatin A生产商，表明低吸附二抗会造成二者共定位的假象。进一步，分别通过高、低吸附二抗对MDA-MB-231乳腺癌细胞CD47和PD-L1两种膜蛋白进行双色STORM成像，揭示出两种D-Lin-MC3-DMA MW蛋白无共定位关系。本研究为二抗物种特异性的评估提供了一种基于红细胞骨架结构模型的超分辨成像新策略，助力双色STORM成像精准阐明蛋白分子互作关系。