目的:胰腺癌(Pancreatic adenocarcinoma,PAAD)是恶性程度极高的消化道系统肿瘤之一,是癌症死亡的第四大原因。虽然目前已经确定了胰腺癌部分发病的危险因素,如肥胖、糖尿病等,但具体病因仍不清楚。因胰腺癌发病隐蔽,恶性程度高,且预后差,因此进一步了解胰腺癌发生发展机制,寻找潜在的诊断标志物或治疗靶标仍然尤为重要。MYEOV是一种肿瘤相关基因,在多种肿瘤中异常表达,并且与肿瘤的发生发展密切相关。Rho GTP酶活化蛋白1(ARHGAP1)在多种肿瘤中异常表达,在胰腺癌中与MYEOV的表达具有相关性,并且与肿瘤的发生发展密切相关。MYEOV与ARHGAP1在胰腺癌的生物学功能及潜在机制尚未完全清楚,因此,有待于进一步的研究。方法:1、利用UCSC Xena数据库分析MYEOV在胰腺癌及正常组织中的表达水平,利用ICGC数据库分析MYEOV与胰腺癌患者预后的关系。2、利用荧光定量PCR检测MYEOV在胰腺癌细胞中的表达情况。3、设计过表达质粒和敲低质粒,分别转染至状态良好的胰腺癌细胞中,分别进行MYEOV表达上调及表达下调实验,空载质粒作对照组。4、探究MYEOV生物学功能:上调或下调MYEOV的表达,进行细胞增殖、迁移和侵袭等细胞生物学功能研究。5、探究MYEOV的作用机制:Western blot方法检测基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达水平。Western blot检测MYEOV在上皮间充质转化中的作用;Western blot方法检测了TGFβ/Smad信号通路中的p-Smad2/3和TGFβ-1的表达水平。6、探究MYEOV与ARHGAP1的作用机制:查阅相关RNAseq及数据库分析MYEOV与ARHGAP1的相关性,免疫共沉淀检测两者相关性。7、应用Western blot方法检测ARHGAP1在胰腺癌细胞中的表达。8、设计ARHGAP1小干扰RNA,分别转染至胰腺癌细胞株中,进行ARHGAP表达下调实验,转染NControl-si RNA设为无意义序列对照组。9、探究ARHGAP1生物学功能:下调ARHGAP1的表达,进行细胞增殖、迁移和侵袭等功能研究。10、探究ARHGAP1的作用机制:Western blot方法检测基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达水平。Western blot检测ARHGAP1在上皮-间充质转化(EMT)中的作用。结果:1、通过UCSC Xena数据库分析了MYEOV的表达,结果显示在胰腺癌样本中MYEOV表达量明显增高;通过ICGC数据库Kaplan-Meier分析发现MYEOV表达越高,胰腺癌患者中位生存时间越短。2、在Pa Tu8988,SW1990,BXPC3,Mia Pa Ca-2和PANC1这5种细胞株中,MYEOV在Pa Tu8988细胞中表达较高,在Mia Pa Ca-2细胞中表达最低。因此,在胰腺癌细胞Pa Tu898敲低MYEOV、在Mia Pa Ca-2细胞中研究过表达MYEOV对胰腺癌的影响。3、敲低MYEOV后细胞功能实验显示可以抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。过表达MYEOV后功能实验则表现出了相反的趋势。4、Western blot结果显示敲低MYEOV后基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达水平显著降低。Weselleck MDV3100stern blot结果显示敲低MYEOV后上皮标志物E-cadherin的蛋白表达水平上调,而间充质标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白表达下调。相反,过表达MYEOV后则表现出相反的趋势。5、Western blot结果显示敲低MYEOV后p-Smad2/3和TGFβ-1的表达水平显著下调,而过表达MYEOV后p-Smad2/3和TGFβ-1的表达水平显著上调。6、相关文献报道及数据库分析表明MYEOV与ARHGAP1的表达具有相关,免疫共沉淀结果显示MYEOV能与ARHGAP1相互作用,且MYEOV影响ARHGAP1蛋白水平的Tofacitinib表达。7、在Pa Tu8988,SW1990,BPrimary biological aerosol particlesXPC3,Mia Pa Ca-2和PANC1?1这5种胰腺癌细胞株中ARHGAP1在SW1990、BXPC3细胞中表达相对较高。因此,在胰腺癌SW1990、BXPC3中敲低ARHGAP1对胰腺癌的影响的影响。8、敲低ARHGAP1后细胞功能实验显示可以抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。9、Western blot结果显示敲低ARHGAP1后基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达水平显著降低,Western blot结果显示敲低ARHGAP1后上皮标志物E-cadherin的蛋白表达水平增高,而间充质标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白表达表现出了下调的趋势。结论:综上,MYEOV在胰腺癌组织以及细胞中表达上调,且表达水平与患者的预后生存状况相关。MYEOV促进胰腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并且MYEOV可能通过了影响TGFβ/Smad信号通路激活胰腺癌细胞上皮间充质转化(EMT)。MYEOV与ARHGAP1的表达在胰腺癌中具有相关,且在胰腺癌细胞中MYEOV可影响ARHGAP1蛋白表达水平。ARHGAP1在胰腺癌组织中表达上调。ARHGAP1促进胰腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,这些实验结果提示,MYEOV可能与ARHGAP1相互作用影响胰腺癌的发生发展,并可能为胰腺癌的潜在生物标志物和胰腺癌治疗的新靶点。图[15]表[30]参[47]