食用菌蛋白质具有免疫调节等多种功能活性。目前关于食用菌蛋白免疫调节活性方面的研究较少,缺少对珍稀和大宗食用菌蛋白质免疫调节活性高低的综合评价。本研究主要通过分离纯化、活性筛选、结构解析、活性评价等步骤,对珍稀和大宗食用菌蛋白质的免疫调节作用进行综合全面评价,并且筛选出免疫调节活性较好的蛹虫免疫调节蛋白进行进一步纯化、免疫活性评价和结构表征。本文主要结果如下:1.选取冬虫夏草、蛹虫草、云芝、桑黄、灵芝、灰树花、羊肚菌、桦树茸、牛肝菌、松茸、红菇、鸡枞菌、黑松露等十三种珍稀食用菌,茶树菇、杏鲍菇、金针菇、草菇、猴头菇、平菇、香菇、双孢菇、海鲜菇等九种大宗食用菌,分别提取了食用菌蛋白质,并使其纯度达到60%以上,对其组成成分进行分析,并且采用巨噬细胞免疫调节模型对食用菌蛋白质免疫调节活性进行评价。结果表明,二十二种食用菌粗蛋白均能提高小鼠巨噬细胞增殖和吞噬能力并且我们发现这些食用菌蛋白对小鼠巨噬细胞分泌活性氧和一氧化氮均有影响。通过进一步对小鼠巨噬细胞细胞因子分泌情Modern biotechnology况的研究,促炎细胞因子的显著增加证明食用菌蛋白促进巨噬细胞极化为经典的的M1型巨噬细胞,进一步证明了食用菌蛋白质能够增强免疫力。通过均一化模长法发现珍稀食用菌蛋白比大宗食用菌蛋白的免疫调节活性显著更高,其中最高的是蛹虫草,最低的是海鲜菇,十三种珍稀食用菌中,蛹虫草蛋白浓度在200μg/m L时,模长||X||~2最大为9.98±1.31,其次是云芝,在200μg/m L时,模长|X||~2达到了9.74±1.16,大宗食用菌中模长||X||~2最大为草菇,达到了1.65±0.31。因此蛹虫草蛋白质免疫调节活性较其他食selleck HPLC用菌相比显著更高。2.选取免疫调节活性最高的蛹虫草蛋白进行进一步的研究。采用碱溶酸沉法提取蛹虫草粗蛋白,采取DE-52阴离子交换色谱和G200葡聚糖凝胶色谱进行分离纯化,然后使用RAW 264.7免疫调节模型对分离出的不同组分进行免疫调节活性评价,筛选出一种免疫调节活性最佳的一个组分CMP 2b,由蛋白质谱测得它由196个氨基酸组成,明确其一级结构;利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术测定相对分子质量,其相对分子质量为22460 Da。3.构建巨噬细胞免疫调节模型,研究得出CMP 2b对巨噬细胞的增殖能力、吞噬能能力有显著提高,细胞增殖率最高达到了空白对照组的152.91±5.55%,吞噬能力提高了23.34%;并且促进巨噬细胞分泌NO、ROS、IL-1β、IL-6、IFN-γ及TNF-α,其中NO分泌水平分别达到了空白对照组的2.31倍,ROS分泌水平Pidnarulex作用达到阳性对照组LPS的82.33%,TNF-α、IL-1β、IFN-γ和IL-6分泌量分别为空白对照组的5.51倍、17.42倍、4.18倍和26.75倍,显著增强了巨噬细胞免疫调节能力。分别通过anti-SR、anti-NLRP1、anti-NLRP3、anti-NLRC4、anti-TLR1、anti-TLR2和anti-TLR4预处理再用CMP 2b进行刺激RAW 264.7,表明TLR1与NLRP3是小鼠巨噬细胞识别CMP 2b的膜受体。