研究目的:旨在研究胃袖状切除术(Sleeve Gastrectomy,SG)调控铁死亡在改善非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的作用和调控机制,探讨SG治疗NAFLD的潜在靶点。研究方法:1.通过先前的文献调研结果得知ACSL4基因高度保守且在NAFLD中起着重要作用。通过生物信息学方法在接受减重手术的NAFLD患者中,分析ACSL4基因的差异表达及临床相关性。2.采用实时蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)及免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)在SG大鼠模型中,检测ACSL4及GPX4的表达。检测铁死亡相关指标谷胱甘肽(Glutathione,GSH)及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)。苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)及油红O染色(Oil Rhepatic diseasesed O)评估NAFLD。3.使用油酸和棕榈酸诱导Hep G2细胞发生脂肪变性,构建NAFLD细胞模型。在NAFLD细胞模型中,采用实时荧光定量PCR分析(Real Time Quantitative PCR,RT-q PCR)和WB检测ACSL4及GPX4的表达。4.诱导Hep G2细胞脂肪变性后更换正常培养基模拟减重手术治疗,采用RT-q PCR和WB检测ACSL4、GPX4的表达。5.设计合成ACSL4的小干扰RNA,并通过RT-q PCR验证其在Hep G2中的敲低效率。6.在Hep G2细胞系中使用小干扰RNA敲低ACSL4后使用油酸和棕榈酸刺激,采用RT-q PCR及WB检测GPX4表达。检测铁死亡相关指selleck CX-5461标GSH、MDA及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)。7.设计ACSL4过表达质粒,并通过q RT-PCR验证其过表达效率。8.在ACSL4过表达的Hep G2中,通过RT-q PCR及WB检测GPX4表达,同时检测铁死亡相关指标GSH、MDA及ROS。研究结果:1.ACSL4与AST和NAFLD活动度积分(NAFLD act寻找更多ivity score,NAS)成正相关。并且,ACSL4在SG之后表达下降。2.HE及油红O染色结果表明,SG可以减少NAFLD大鼠肝脏炎性浸润、空泡化和脂质沉积。免疫组化实验结果显示在SG后,大鼠肝脏中ACSL4表达水平下降,GPX4表达增加,铁死亡减少。3.油酸和棕榈酸可以刺激Hep G2细胞铁死亡的增加,而在体外模拟减重手术治疗后可以减少Hep G2细胞的铁死亡。4.RT-q PCR验证ACSL4小干扰RNA和过表达质粒转染效果良好(P<0.05)。5.沉默ACSL4可以减少油酸和棕榈酸刺激导致的铁死亡。6.过表达ACSL4可以引起Hep G2细胞发生铁死亡。实验结论:本研究发现SG对铁死亡具有一定的调控作用。SG通过调控ACSL4基因的表达,调控NAFLD的铁死亡,从而改善肝脏脂肪变性。本研究丰富了SG在治疗NALFD中的调控机制,为NAFLD的诊治提供了潜在治疗靶标。