论文纲要慢性子宫内膜炎(Chronic Endometritis,CE)是子宫内膜感染病原体而发生的炎症反应。育龄期女性除了伴有腹痛、发热、月经异常等症状,还可能患有不孕症或者习惯性流产。当子宫内膜发生炎症时,免疫细胞和炎症因子可干扰胚胎与子宫内膜的信号交流,进而影响胚胎着床。抗生素管理目前仍是CE的主要治疗方式,虽然抗生素可以治愈部分CE进而改善患者的妊娠结局,但临床治疗中仍有部分患者在规律抗生素管理后内膜炎症仍持续存在。因此,避免滥用抗生素,寻求有效提高生育力的CE的治疗方法是当前亟待解决的问题。为了探究CE的发病机制,本文首先开展蛋白质免疫印迹实验和免疫组化实验,结果发现CE患者的子宫内膜与健康内膜相比,存在cGAS-STING-TBK1-IRF3通路的激活,随CL13900使用方法后通过real time PCR技术发现子宫内膜炎中存在IL-6,IL-8,IL-1β,IFN-β1这四种炎症因子的表达升高。分析转染小干扰RNA STING到子宫内膜基质细胞的体外实验结果和使用STING基因全敲小鼠建立CE模型的结果,我们发现上述四种炎症因子的升高与STING相关联。另外,通过细胞免疫荧光实验和蛋白质免疫印迹实验,我们发现cGAS-STING-TBK1-IRF3通路激活时STING和IRF3在子宫内膜基质细胞中的定位发生改变。为了进一步探究LPS如何激活该通路,我们检测了线粒体功能,发现LPS可以引起子宫内膜基质细胞活性氧生成,降低线粒体膜电位,并引起线粒体DNA逃逸进入胞浆。并且,我们发现转染线粒体DNA到子宫内膜基质细胞后也可以激活cGAS-STING-TBK1-IRF3通路。本研究首次揭示了子宫内膜multidrug-resistant infection炎中存在线粒体的损伤,线粒体释放DNA到细胞浆激活cGAS-STING-TBK1-IRF3通路引起炎症因子的生成。线粒体功能障碍调控cGAS-STING-TBK1-IRF3通路在慢性子宫内膜炎中的作用研究目的:明确cGAS-STING-TBK1-IRF3通路和线粒体功能障碍在慢性子宫内膜炎中的作用。研究方法:(1)本研究纳入9对CE患者内膜和正常内膜,用6对样本进行WB实验和real time PCR实验,检测cGAS-STING-TBK1-IRF3通路和CE相关细胞因子表达水平,另外3组样本制作石蜡切片,用IHMK-2206 MWC实验探究STING在子宫内膜中的表达情况。(2)在体外实验中,用LPS刺激人子宫内膜基质细胞(human endometrial stromal cells,HESCs),使用 WB 实验探究 cGAS-STING-TBK1-IRF3 通路的激活、real time PCR实验探究CE相关细胞因子的改变。并用免疫荧光实验和WB实验(分离胞质和胞核蛋白)探究LPS刺激HESCs后STING和IRF3在细胞中的定位变化。(3)LPS刺激HESCs后,使用DCFH-DA试剂盒和JC-10试剂盒检测活性氧ROS和线粒体膜电位MMP的变化。并使用免疫荧光实验检测LPS刺激HESCs后dsDNA在细胞中的变化。(4)提取HESCs中的mtDNA并转染入同种细胞中,WB实验验证cGAS-STING-TBK1-IRF3通路的改变。(5)C57BL/6JGpt小鼠宫腔灌注LPS,建立子宫内膜炎小鼠模型,观察小鼠子宫组织的大体变化,并使用WB实验和real time PCR实验探究STING-TBK1通路的激活和CE相关细胞因子的改变。研究结果:(1)WB结果显示cGAS-STING-TBK1-IRF3通路在CE患者内膜组织中被激活,IHC实验表明STING在子宫内膜炎组表达升高,real-time PCR发现子宫内膜炎组存在IL-6,IL-8,IL-1β,IFN-β1 高表达。(2)细胞实验中,WB实验表明LPS刺激HESCs后cGAS-STING-TBK1-IRF3被激活,real-time PCR 实验发现 LPS 刺激 HESCs 后 IL-6,IL-8,IL-1β,IFN-β1 高表达。同时WB实验和免疫荧光实验发现LPS刺激HESCs后,IRF3由胞质向胞核转移以及STING向核周聚集。(3)LPS刺激HESCs后,免疫荧光实验发现细胞中ROS升高,MMP降低,胞浆中dsDNA增多。(4)WB实验发现HESCs中转染mtDNA可以激活cGAS-STING-TBK1-IRF3通路。(5)小鼠宫腔灌注LPS后,小鼠子宫充血持续时间与STING相关,STING KO小鼠宫腔灌注LPS后较WT小鼠充血持续时间短。WB实验发现小鼠宫腔灌注LPS后存在Pho-TBK1高表达,real time PCR实验发现小鼠宫腔灌注LPS后子宫发生由STING 调控的 IL-6,IL-8,IL-1β,IFN-β1 高表达。研究结论:子宫内膜炎发生线粒体功能障碍,线粒体DNA释放后激活cGAS-STING-TBK1-IRF3通路继而诱导炎症因子包括IL-6,IL-8,IL-1β,IFN-β1的生成。