猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病病原,可导致人和猪的关节炎、败血症、脑膜炎等疾病,给养殖业带来巨大经济损失的同时严重威胁食品安全和公共卫生安全。SS疫苗接种是预防SS相关疾病的有效预防措施,但SS毒力因子众多,同时存在多种血清型,目前仍然缺乏能够提供交叉免疫保护能力的商品化疫苗。因此,寻找新的毒力因子对SS通用疫苗的研究工作和SS相关疾病的科学防控具有重要的意义。本研究首先采用转座子随机诱变技术和大蜡螟实验筛选和鉴定新的SS毒力相关基因SUT2,随后初步研究其对SS的毒力调控机制生物学特性,最后通过敲除SUT2基因构建弱毒疫苗株并对其进行了免疫效果评价。为了挖掘新Medical home毒力因子,本研究首先采用转座子TnYLB-1构建SS基因组转座子突变文库,随后用大蜡螟实验筛选毒力改变的突变株并分离鉴定毒力因子相关基因。结果显示:通过卡那霉素抗性和壮观霉素抗性筛选获得了450株转座子突变株文库,转座效率为83.33%;随后,利用大蜡螟毒性试验对文库进一步筛选,共获得18株SS毒力减弱突变株;最后,经反向PCR和突变株插入位点基因测序分析,共鉴定了8种毒力减弱相关基因,分别为二氨基庚酸脱羧酸、M24金属肽酶、两种假设蛋白、ABC转运通透酶亚基、磷酸吡哆醛依赖性氨基转移酶、ABC转运蛋白结合底物、核糖核酸G和E。随后,我们选择毒力下降最明显的SUT2基因,采用同源重组技术构建了靶向SUT2的基因敲除SS毒株及其回补株,研究该基因的功能。结果显示与野生型相比,ΔSUT2在BHI培养基中并不影响SS生长,但能够影响其链长形态;ΔSUT2显著降低了SS酸碱耐受能力,但显著升高了其生物被膜形成能力;体外实验结果显示ΔSUT2抗PAM(猪肺泡巨噬细胞)吞噬能力、全血存活、溶血活性等方面显著降低,但能通过上调粘附和侵袭相关的基因转录水平增强对人脑微血管内皮细胞(HBMEC/D3)的黏附和侵袭能力;体内实验结果显示ΔSUT2显著提高了小鼠存活率,说明SUT2能够影响SS毒力。综上,SUT2基因对SS2致病性至关重要,并存在多种生物学效应。最后,我们对自然分离的致病性较弱的猪链球菌2型菌株敲除SUT2基因,构建活疫苗JLY022ΔSUT2,探究对链球菌2型、7型的交叉免疫保护。结果显示JLY022ΔSUT2在无佐剂添加情况下单次免疫小鼠,对猪链球菌2型免疫保护率60%,对猪链3-MA体内球菌7型为40%。综上所述,本研究成功构建了SS2转座子文库,鉴定了8种未在SS中报道的毒力相关基因,并证实SUT2参与SS对宿主细胞的黏附侵袭、生物被膜形成、抗吞噬等过程。构建了JLY022ΔSUT2弱毒活疫苗,结果证实其具有一定的PR-171体内猪链球菌血清型2型和7型的交叉免疫保护作用。本研究对猪链球菌2型的致病性和疫苗研究提供了科学依据。