背景:急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)属于遗传异质性克隆性疾病,最常见于成人。化疗和造血干细胞移植是主要的治疗方式,部分患者经治疗后可达到长期无病生存甚至治愈。然而,AML的治疗方案仍存在较严重的毒副反应、相关治疗并发症,这是人们当前亟需解决的难题。因此,深入认识AML,通过现有药物的联用,开发新的治疗方案是必要的。根据本课题组既往研究发现二氢青蒿素通过铁蛋白降解并诱导AML细胞铁死亡,可以抑制其增殖。然而,AML与铁死亡的发生之间有无其他启动途径尚不清楚。目的:本研究主要探索氯尼达明(Lonidamine,LND)联合Ras选择性致死因子3(RAS-selective lethal 3,RSL3)的治疗方案诱导AML细胞铁AZD9291使用方法死亡的相关机制。旨在进一步理解诱导AML细胞铁死亡的治疗机制,从而为利用铁死亡治疗AML的临床策略提供microbe-mediated mineralization一定的理论依据。方法:本研究把AML细胞株HL-60和Kasumi-1作为研究对象。首先,利用CCK-8试剂盒检测LND与LND联合RSL3对HL-60和Kasumi-1的细胞活力的抑制效果,并利用免疫印迹分析测定细胞内蛋白质x CT表达的下调对LND有无剂量依赖性和时间依赖性,进一步结合零膨胀泊松(Zero-inflated poisson,ZIP)回归模型评估LND联合RSL3对抑制AML细胞的协同分数。其次,利用Calcein/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒和Annexin V-FITC/PI双染法具体评估LND与RSL3联合方案对HL-60细胞的杀伤效果。然后,利用Mito SOX探针染色法通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测LND与RSL3单独及联合应用于HL-60细胞所导致的细胞线粒体超氧化物水平的变化,进一步在LND联合RSL3的基础上加用线粒体靶向抗氧化剂米托蒽醌甲磺酸盐((Mitoquinol mesylate,Mito Q)观察HL-60细胞线粒体超氧化物以及线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)的变化。为验证铁死亡是否参与LND联合RSL3导致的细胞损伤,用LND与RSL3处理HL-60和Kasumi-1的细胞后,通过酶标仪测定细胞内谷胱甘肽(Glutathione,GSH)水平变化,进一步通过流式细胞仪利用BODIPY 581/591 C11探针染色法检测细胞内脂质过氧化物((Lipid peroxide,LPO)水平,并通过激光共聚焦显微镜利用DCFH-DA探针染色法检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平。最后,在LND和RSL3联合方案基础上,加用铁死亡等抑制剂,通过观察HL-60细胞的活力,及其ROS和LPO水平的变化以进一步验证由铁死亡途径导致的细胞死亡,小分子抑制剂包括Ferrostatin 1(Fer-1)、Deferoxamine(DFO)、GSH、Z-VAD-FMK、Necrosulfonamide(Necro),进一步利用免疫印迹分析检测LND、RSL3与Fer-1处理后的细胞内蛋白质x CT、GPX4的表达水平的变化。结果:首先,HL-60和Kasumi-1细胞经LND与RSL3处理后,细胞活力受到抑制并呈现出剂量依赖性的特点,并且LND能够下调细胞内蛋白质xCT的表达。经ZIP模型评分,LND联合RSL3抑制AML细胞的协同效果显著,并且两药联合对HL-60细胞具有协同杀伤效果。其次,LND与RSL3的方案可以增加HL-60细胞的线粒体超氧化物水平,而Mito Q可以缓解这一方案的毒性作用,并抑制MMP超极化。值得注意的是,用LND与RSL3方案处理AML细胞后,不仅减少了细胞内GSH水平,而且增加DNA Methyltransferas抑制剂了细胞内的ROS和LPO水平。为进一步明确上述现象的发生机制,在该方案的基础上加用铁死亡等抑制剂,发现细胞活力较两药联合处理时恢复,ROS、LPO水平降低,并且细胞内蛋白质x CT表达水平上调。结论:LND协同RSL3减少AML细胞的GSH水平,增加AML细胞的LPO、ROS及线粒体超氧化物水平,下调AML细胞xCT与GPX4的表达,并最终诱导AML细胞铁死亡。