背景:肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一种严重的心血管病理生理综合征,肺血管重构、右心室功能障碍是PAH的主要病理特征。持续性的血管收缩,血管腔狭窄或闭塞,导致肺血管阻力进行性增加,肺动脉压力持续升高,进而继发右心室衰竭甚至死亡。PAH在临床上引起了广泛关注,目前PAH的临床治疗药物主要通过改善血管舒张功能而实现,包括前列环素及其类似物、内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶抑制剂、鸟苷酸环化酶激动剂、钙离子通道阻滞剂等。这些药物虽然可以在一定程度上减轻患者的临床症状,延缓疾病进展,但尚不能从根本上抑制PAH的发生。因此,深入探究PAH发生发展的病理机制,探求新的具有高效稳定治疗效果的药物分子靶点迫在眉睫。近年来,研究表明,肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)过度增殖和线粒体功能异常可以促进肺血管重构,在PAH中发挥重要作用,是PAH发生发展的重要病理因素之一,抑制PASMCs过度增殖已成为逆转肺血管重构和治疗PAH的新靶点。新型抗炎介质Maresin-1(macrophage mediators in resolving inflammation,MaR1)是巨噬细胞在炎症消退阶段由内源性二十二碳六烯酸(docosahexenoicacid,DHA)通过脂氧酶等氧化途径合成的具有强烈抗炎作用的脂质介质。MaR1可以抑制炎性因子释放、中性粒细胞浸润、氧化应激反应,促进巨噬细胞吞噬、组织再生,减轻组织损伤,在众多心血管疾病中具有保护作用,例如动脉粥样硬化、腹主动脉瘤、高血压、糖尿病以及心室重构和心律不齐等。本课题旨在探究MaR1在PAH发生发展中的作用并明确其作用机制,为PAH的干预和治疗提供新思路。目的:明确MaR1在PAH发生发展过程中的作用并探究其作用机制。方法:体内实验,使用野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导大鼠肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)模型或低氧联合SU5416(HySu)诱导小鼠PH模型,分别在造Lapatinib分子量模全程或造模最后一周,给与MaR1(100mg/day)和(或)BOC-2(ALXR的特异性拮抗剂,50μg/kg)腹腔注射,探究MaR1及其受体ALXR在PAH发生发展中的作用及MaR1对PAH的治疗作用。采用血流动力学检测,即直接经右心室插管测量右心室收缩压,评估肺高压程度。取心脏组织剥离右心室及左心室和室间隔称重,计VX-661化学结构算右心室肥厚指数。形态学评估肺血管重构,主要包括肺组织切片HE染色及α-SMA染色及血管肌化程度评估。肺组织切片行DHE和MitSOX Red染色,检测肺组织内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生。使用ATP检测试剂盒和SOD酶活性检测试剂盒,检测肺组织匀浆中ATP含量和SOD酶活性。提取肺组织蛋白,Western blot检测增殖相关蛋白PCNA和CyclinD1以及线粒体稳态信号通路相关蛋白的表达。细胞实验,使用原代提取的大鼠PASMCs,3%低氧处理后,给予MaR1和(或)LGR6、ALXR、RORα的特异性拮抗剂或shRNA腺病毒处理,明确MaR1及其三种受体在低氧诱导的PASMCs增殖和线粒体氧化应激损伤中的作用。结合RNA-seq高通量测序寻找可能的分子机制并进行验证。细胞功能检测主要包括:CCK-8实验用于检测细胞活力,Western blot检测增殖相关蛋白线粒体稳态信号通路相关蛋白表达,DHE和Mito SOX Red荧光探针检测ROS产生,JC-1和TMRM探针检测细胞线粒体膜电位的变化,ATP检测试剂盒和SOD酶活性检测试剂盒检测ATP含量和SOD酶活性等。结果:低氧诱导的PASMCs给与MaR1处理发现,MaR1可显著抑制低氧诱导的PASMCs增殖和线粒体氧化应激损伤,提示MaR1可能会通过改善PASMCs的线粒体稳态,进而减轻血管重构,降低肺动脉高压。体内实验结果证实,PH模型动物血清中MaR1的含量显著下降。而且,无论是MCT大鼠PH模型,还是HySu小鼠PH模型,与单纯造模组相比,造模全程给与MaR1处理均可显著降低模型动物的右心室收缩压和右心室肥厚指数,并抑制肺血管重构,减轻氧化应激损伤,改善线粒体稳态。此外,即使仅在PH造模最后一周给与MaR1处理,MaR1也同样可以显著降低MCT大鼠的右心室收缩压和右心室肥厚指数,并减轻肺血管重构,提示MaR1对已形成的PH也具有一定治疗作用。进一步,在HySu小鼠PH模型中给与MaR1受体ALXR的特异性拮抗剂BOC-2预处理,我们发现MaR1对PH的保护作用可被BOC-2明显阻断,表明MaR1是通过ALXR受体在PH中发挥保护作用。为探索MaR1/ALXR参与PH和肺血管重构的具体分子机制,我们对MaR1处理的PASMCs进行RNA-seq高通量测序分析发现,MaR1可显著抑制低氧诱导的与线粒体功能密切相关的热休克蛋白HSP90的表达增高,而BOC-2抑制剂则可以阻断MaR1对HSP90的抑制作用。体内和体外实验进一步证实,使用HSP90线粒体特异性拮抗剂可部分恢复被BOC-2阻断的MaR1对PASMCs增殖和线粒体氧化应激损伤的保护作用,提示线粒体HSP90可能是MaR1/ALXR保护PH和肺血管重构的重要分子靶点。结论:新型抗炎介质MaR1对肺动脉高压的发生发展具有延缓和治疗作用,其具体机制为MaR1可作用于PASMCs上的ALXR受体,抑制低氧诱导的热休克蛋白HSP90的表达,从而改善线粒体molybdenum cofactor biosynthesis稳态,减轻氧化应激损伤,抑制PASMCs的过度增殖,减轻肺血管重构。靶向MaR1/ALXR/HSP90轴有望为肺动脉高压的防治提供新思路。