幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染是导致胃癌发生的主要因素,同时也是其它很多疾病的致病因素,因此进行HP抗体检测对于大规模国民胃癌以及HP流行病普筛具有重要临床意义。目前市场主流的HP抗体检测试剂盒为定性检测(定性检测指判断是否感染,即阳性或阴性),但是预防HP感染的关键是定量检测(定量检测是指检测出标本中所含有的某一特定物质具体的量),同时,定量检测也对HLY-188011纯度P治疗过程中的评估起重要作用。所以本实验旨在开发HP抗体定量检测试剂盒,以实现快速准确测量血清样本中HP抗体浓度的目标。课题组将重组表达的HP上的Ure B蛋白与Hpa A蛋白通过化学反应,偶联到聚苯乙烯微球上,并置换到保存液中,制备出幽门螺杆菌抗体检测试剂2(R2)。结合抗原抗体反应特性及降低血清中非特异性吸附,制备出幽门螺杆菌抗体检测试剂1(R1)。R1与R2搭配使用构成了定量检测人血清中幽门螺杆菌抗体检测胶乳试剂盒。实验结果发现,在10 m L胶乳制备中,200μL(固含量Puromycin配制10%)Bangs微球(粒径190 nm)加上1.6 mg上海桂康抗原和p H 8.0 Tris缓冲液,与活化剂EDC(用量为1.5 m M)共同作用1小时后,制备出的胶乳试剂,表现出较好的检测性能。试验中,通过单因素参数优化,并通过TEM、DLS和Zeta-电位分析仪对胶乳的稳定性进行了深入研究。通过功能性试验评价后,结果表明该试剂具有良好的线性关系,通过自制试剂与日本进口试剂的临床检测值的比对,两者测值基本一致,说明自制试剂符合临床检测需求。当主波长为660 nm(副波长为800 nm),试剂检测纯化水时的空白吸光度为10000;试剂检测临床样本MEM modified Eagle’s medium时的线性范围为0-100IU/m L;自制试剂与常州市第二人民医院(阳湖二院)的日本进口试剂对临床血清样本进行检测,实验数据进行临床比对。以自制试剂所测数值为横坐标,以常州市第二人民医院采用日本进口试剂所测数据为纵坐标,绘图后线性拟合得到回归方程:Y=0.9953X+0.5439,r=0.9922>0.95,结果表明自制试剂与日本进口试剂的测值基本一致,自制试剂初步满足临床检测的要求。综上,本实验成功地开发出适用于临床血清样本中HP抗体检测的检测试剂盒,具有准确定量、灵敏度高、稳定性好的特点,可为临床医生提供参考,有望广泛应用于HP的筛查与诊断。