夏枯草黄酮对骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡的影响及作用机制研究-摘要

目的:探讨夏枯草黄酮对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞凋亡及 Ras 同源基因家族成员 A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路的影响。方法:通过切断大鼠前交叉副韧带、内侧副韧带,摘除内侧半月板构建 OA 大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为 OA 组、夏枯草黄酮低、中、高剂量组和 RhoA 通路抑制剂(Y-27632)组;另取12GDC-0068体外只大鼠仅剪开皮肤暴露关节腔,作为假手术组;假手术组和 OA 组 大 鼠 均 给 予 生 理 盐 水 灌 胃,夏 枯 草 黄 酮 低、中、高 剂 量 组 分 别 给 予 6.125,12.250, 24.500 mg/kg夏枯草黄酮灌胃,Y-27632组给5 mg/kg 的 Y-27632 灌胃;1 次/d,连续8 周。末次给药后24h,检测大鼠压痛阈值、热痛阈值,酶联免疫吸附法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水 平,苏 木精-伊 红 (HE)染 色法观察大鼠关节软骨形态,一 步法原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠软骨细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测大鼠软骨组织凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及 RhoA/ROCK 通路蛋白的表达。结果:假手术组大鼠关节软骨结构清晰,排列规整,表层光滑无缺损,各层LY2835219采购细胞分布均匀;OA 组大鼠关节软骨表层粗糙且不完整,纤维化明显,各层细胞排列紊乱;夏枯草黄酮各剂量组、Y-27632 组大鼠表层结构相对正常,但部分区域仍存在细胞紊乱现象;夏枯草黄酮高剂量组与 Y-27632 组两组间大鼠骨关节软骨形态差异不明显。与假手术组比较,OA 组大鼠压痛阈值及热痛阈值显著降低,Mankin’s评分、血清 TNF-α 及IL-1β 水平、软骨细胞凋亡数、软骨组织 Caspase-3、RhoA、ROCK 蛋白表达显著升高(P<0.05);与 OA 组比较,夏枯草黄酮低、中、高剂量组压痛阈值及热痛阈值显著升高,Mankin’s评分、血清 TNF-α 及IL-1β水平、软骨细胞凋亡数、软骨组织 Caspase-3、RhoA、ROCKEPZ-6438分子量 蛋白表达显著降低,且呈现夏枯草黄酮剂量依赖性(P<0.05);夏枯草黄酮高剂量组和 Y-27632组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:夏枯草黄酮通过抑制 OA 大鼠软骨细胞凋亡改善大鼠关节软骨损伤,可能与抑制 RhoA/ROCK 信号通路有关。