目的:实验研究探讨黄芪配伍当归药对通过调控VEGF/PI3K/Akt通路相关mRNA的水平对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)大鼠相关生化指标及尿蛋白排泄率的影响,通过观察DKD大鼠肾脏组织的病理改变,通过免疫组化法及RT-PCR法(quantitative Real-time PCR,RT-PCR)检测VEGF/PI3K/Akt通路mRNA蛋白表达水平的变化,以此来探究黄芪-当归药对在VEGF/PI3K/Akt通路上的作用机制,为黄芪-当归药对应用于临床治疗糖尿病肾病提供实验依据。方法:实验研究1.采用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)30mg/kg腹腔注射进行DKD大鼠模型的构建,分为模型组、芪归药对组(黄芪:当归=3:2、5.40g/kg·d)、达格列净组(0.45mg/kg·d),每组各5只,以同周龄SD大鼠5只作为空白对照组。2.药期间分别测定各组大鼠体重、尿量、尿糖、尿酮、胰岛素,给药前和最后一次给药后进行糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,Hb A1c)检查。3.8周后处死,各组均选择3只分离肾脏,按病理组织学资料制作肾组织石蜡切片,用于进行肾组织病理学、超微结构形态学的观察,RT-PCR法检测DKD大鼠肾脏组织VEGF、PI3K及Akt的mRNA表达量,免疫组化法检测VEGF、PI3K及Akt蛋白的表达情况。对各组实验结果进行数据统计分析,探究芪归药干预VEGF/PI3K/Akt通路mRNA蛋白的表达对D KD大鼠肾脏组MCC950临床试验织纤维化进程的影响。结果:1.对DKD大鼠症状及体征的影响:(1)空白对照组大鼠自主活动正常。(2)模型组大鼠反应迟钝。(3)与模型组相比,给药后的芪归药对组及达格列净组的大鼠一般情况均有好转。2.对DKD大鼠体质量的影响:(1)与空白对照组相比,灌胃前其余三组大鼠体质量增长较快(P<0.05)。(2)灌胃治疗8周后,与模型组相比,芪归药对组与达格列净组大鼠体质量均增加明显(P<0.05)。(3)与达格列净组相比,芪归药对组大鼠体质量增加幅度稍大。3.对DKD大鼠血清的影响:(1)与空白对照Antidepressant medication组相比,模型组大鼠的空腹血糖(f asting plasma glucose,FPG)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、甘油三酯(trigly cerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、糖化血清蛋白(glycated serum protein,GSP)及Hb A1c水平均明显升高(P<0.05)。(2)与模型组相比较,芪归药对组与达格列净组Hb A1c、FPG、TC、T G、GSP、BUN及Scr均明显降低。(3)达格列净组降低TG、GSP、BUN的作用更为明显(P<0.01)。(4)与空白对照组相比,芪归药对组与达格列净组大鼠的胰岛素(inspiration,INS)指标水平均有明显下降(P<0.05),并且以达格列净组降低幅度较大(P<0.05)。4.对DKD大鼠尿微量白蛋白(microscale albuminuria,MAU)及β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)的影响:(1)与空白对照组相比较,芪归药对组及达格列净组大鼠的β2-MG、MAU指标均升高明显(P<0.01)。(2)与模型组相比较,芪归药对组及达格列净组大鼠的β2-MG、MAU指标则均明显降低,并且以达格列净组降低幅度更大(P<0.05)。5.对DKD大鼠肾脏组织病理学的影响:(1)与空白对照组比较,模型组大鼠可见肾小管上皮细胞出现了明显的颗粒样改变,肾小球囊腔出现硬化,毛细血管处可以观察到系膜细胞明显增生以及基底膜明显增厚,可见少量粒细胞浸润。(2)相比较于模型组,芪归药对组可见大鼠肾脏组织肾小球毛细血管清晰,少量肾小管上皮细胞出现空泡化改变,达格列净组也可见少量肾小管扩张与少量粒细胞浸润。6.对DKD大鼠肾脏组织纤维化的影响:(1)相比较于空白对照组,模型组组织中局部间质及血管周围可见较多蓝色着染胶原纤维。(2)在芪归药对组和达格列净组大鼠的局部肾小管间质中都发现了大量的蓝色着色胶原纤维。7.对DKD大鼠肾组织VEGF/PI3K/Akt信号通路mRNA表达量的影响:(1)VE GF、PI3K及Akt的mRNA在DKD模型组大鼠肾脏组织中的含量明显较少(P<0.01)。(2)与模型组相比较,芪归药对组与达格列净组VEGF、PI3K及Akt的mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。(3)各通路之间相比较,芪归药对与达格列净组m R NA的表达量从高到低依次是VEGF、Akt、PI3K。(4)达格列净组VEGF的mRNA表达量稍高于芪归药对组(P<0.01)。(5)芪归药对组Akt的mRNA的表达量要稍优于达格列净组。(6)芪归药对组与达格列净组间PI3K的mRNA表达量则无明显差异。8.对DKD大鼠肾组织VEGF/PI3K/Akt信号通路蛋白表达量的影响:(1)与空白对照组相比较,模型组VEGF、Akt及PI3K的蛋白表达量减少(P<0.05)。(2)与模型组相比较,芪归药对组及达格列净组大鼠组织中VEGF、PI3K及Akt的蛋白表达量则明显增多(P<0.01)。结论:1.黄芪-当归药对可以改善DKD大鼠的临床症状,提高生存质量,降低空腹血糖、糖化血红蛋白、胰岛素以及生化指标等检测水平,并且能够减少PD-0332991溶解度尿蛋白的排泄率,从而恢复部分肾功能,以延缓DKD的发生与发展。2.黄芪-当归药对可以通过干预VEGF/PI3K/Akt通路相关靶点mRNA蛋白的表达量从而改善肾脏组织的纤维化,保护肾脏组织,从而延缓DKD的发展进程。