目的观察推拿对脑瘫幼鼠脑白质中少突胶质前体细胞分化及促白质修复的作用,并分析其与Notch1/Hes5信号通路的关系,以期揭示推拿治疗脑瘫脑白质修复可能的作用机制。方法实验一:将自然分娩的52只Sprague Dawley幼鼠,于出生后第三天(P3),剔除体重过高和过低的幼鼠2只,将剩余的50只9g左右的幼鼠随机分为空白组(n=12)、假手术组(n=12)、模型组(n=26)。模型组采用左侧颈总动脉熔断联合缺氧法进行模型制备,于造模后第二天(P4)进行翻正反射验证模型后,剔除2只造模不成功的幼鼠,再将造模成功的24只幼鼠随机分为推拿组(n=12)、CP组(n=12)。空白组不进行任何处理;假手术组幼鼠仅切开左侧颈部皮肤,分离颈总动脉和迷走神经,不熔断血管及不缺氧处理。于造模后第三天(P5)对推拿组进行推拿干预,每只幼鼠每次干预15分钟,每天干预1次,每周干预6天,共干预8周;其他三组幼鼠与母鼠分笼饲养,不予干预。在固定时间点监测记录四组幼鼠的体重;干预8周后(P61)采用Foot-Fault实验、疲劳转棒实验测试四组幼鼠的运动功能和平衡功能,随后处死取脑白质检测。通过Luxol Fast Blue染色和透射电镜检测脑Influenza infection白质髓鞘情况,免疫荧光和Western Blot实验检测MBP的定位及表达,Western Blot实验检测Notch1、Hes5蛋白的表达情况。实验二:将造模成功的36只幼鼠随机分为生理盐水组(n=9)、生理盐水+推拿组(n=9)、DAPT组(n=9)和DAPT+推拿组(n=9)。生理盐水组和生理盐水+推拿组在造模后第一天(P4)以10mg/kg/只剂量腹腔注射生理盐水,1日1次,连续注射6天;DAPT组和DAPT+推拿组以同等计量、方式、时程注射DAPT。生理盐水+推拿组、DAPT+推拿组在造模后第二天(P5)进行推拿干预,同时其余两组幼鼠与母鼠分笼饲养,不予干预。四组幼鼠在干预结束后(P61)处死取脑白质检测。通过透射电镜检测脑白质髓鞘情况,免疫荧光和Western Blot实验检测PDGFR-α和MBP的定位及表达情况。结果1.脑瘫模型幼鼠的体重下降明显,推拿加快脑瘫幼鼠的体重增长,且随着时间延长,体重增加程度更加显著(P<0.001)。2.推拿后脑瘫幼鼠的F-F评分和疲劳转棒评分明显增加,脑瘫幼鼠的运动功能和平衡功能显著增强(P<0.001)。3.脑瘫幼鼠过度激活Notch1/Hes5通路,推拿后Notch1/Hes5通路被抑制,Notch1、Hes5蛋白表达量显著降低(P<0.001)。4.推拿后脑瘫幼鼠的髓鞘占比、有髓神经纤维的数量(P<0.05)和髓鞘的厚度明显增加(P<0.001),且显著改善了髓鞘结构松散、形状不规则、胞质浑浊的现象;DAPT抑制剂条件下,脑瘫幼鼠的有髓神经纤维的数量(P<0.05)、髓鞘的厚度明显增加(P<0.001),且髓鞘结构得到改善,与推拿的效果一致。5.推购买Belnacasan拿后脑瘫幼鼠的MBP平均荧光强度略微增加但差异没有统计学意义(P>0.05);而MBP的蛋白表达量显著提高(P<0.0001);DAPT抑制剂条件下,脑瘫幼鼠PDGFR-α的平均荧光强度和蛋白表达AMG510小鼠量明显降低,与推拿的效果一致(P<0.001、P<0.05);MBP的平均荧光强度(P<0.01)和蛋白表达量显著增加(P<0.001),与推拿的效果一致。结论1.推拿可以促进脑瘫幼鼠的生长发育,改善脑瘫幼鼠的运动和平衡功能,促进脑瘫幼鼠脑白质中少突胶质细胞髓鞘化,修复脑瘫幼鼠的脑白质损伤。2.推拿促进脑瘫幼鼠脑白质修复,可能的机制是通过抑制Notch1/Hes5信号通路,增强少突胶质前体细胞的分化成熟完成的。