目的:通过临床研究与动物实验相结合的方式,探讨解毒通络祛风法治疗早期糖尿病肾脏病的作用机制。方法:1.临床研究:采用随机对照研究,纳入早期糖尿病肾脏病(气阴亏虚,肾风内扰证)患者72例,对照组36例予厄贝沙坦片,治疗组36例在对照组基础上予解毒通络祛风方。12周后比较两组中医证候积分、尿蛋白水平(UACR)、血糖水平(FPG、Hb A1c)、氧化应激指标(SOD、MDA)以及miR-200a含量。2.实验研究:雄性SD大鼠60只,随机选10只为对照组(Control),予基础饲料。余下50只予高糖高脂饲料4周后,以35mg/kg STZ溶液腹腔注射诱导糖尿病肾脏病大鼠模型。造模成功后,按体重随机分为模型组(Model)、解毒通络祛风方组(JDTLQF)、解毒通络祛风方+miR-200a模拟剂组(JDTLQF+miR-200a agomir)、解毒通络祛风方+miR-200a抑制剂组(JDTLQF+miR-200a antagomir)各10只。对大鼠进行连续8周药物灌胃,JDTLQF+miR-200a agomir组、JDTLQF+miR-200a antagomir组在给药的第1、4、7、10、13天分别尾静脉注射5nmol miR-200a模拟剂及抑制剂。给药第8周末,收集大鼠24小时尿液和腹主动脉血,检测24小时尿蛋白(24h-Upro)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD);HE染色观察肾脏病理形态变化,q RT-PCR检测肾组织miR-200a及Nrf2、Keap1、NQO1 m RNA水平,Western Blot检测肾脏组织Nrf2信号通路蛋白表达水平。结果:1.临床研究:本研究治疗组有效率86.67%,对照组有效率67.74%。治疗组有效率显著高于对照组(P<0.05);(1)治疗组和对照组各中医症状均明显改善,具有统计学差异(P<0.05);组间比较,治疗组对各症状的改善均优于对照组(P<0.05);(2)疗后治疗组UACR、FPG、Hb A1c均低于对照组(P<0.05);(3)疗后治疗组MDA水平低于对照组,SOD水平高于对照组(P<0.05);(4)两组血清miR-200a均较疗前上升(P<0.05);治疗组优于对照组(P<0.05)。治疗前后安全性指标未见异常。2.实验研究:(1)与模型组相比,各给药组大鼠24h-Upro、Scr均下降(P<0.05),JDTLQF组和JDTLQF+miR-200a agomir组BUN水平下降(P<0.05);JDTLQF+miR-200a agomir组低于JDTLQF组,JDTLQF+miR-200a antagomir组高于JDTLQF组(P<0.05);(2)与模型组相比,JDTLQF各组从第4周末开始FPG水平较模型组降低(P<0.01);JDTLQF+miR-200a agomir组低于JDTLQF组,JDTLQF+miR-200a antagomir组高于JDTLQF组(P<0.05)。(3)与模型组相比,各给药组均能升高SOD水平,降低MDA水平,其中JDTLQF+miR-200a agomir组SOD水平高于JDTLQF组,MDA水平低于JDTLQF组,JDTLQF+miR-200a antagomir组SOD水平低于JDTLQF组,MDA水平高于JDTLQF组(P<0.05)。(4)模型组大鼠肾组织出现囊腔狭窄,甚至出现球囊粘连,钙化和部分坏死,肾小球基底膜增厚,肾小管上皮细胞肥大、扩张明显。其余给药各组大鼠肾组织病变相对较轻,其中JDTLQF组和JDTLQF+miR-200a agomir组肾小球的体积更接近于对照组,基底膜增厚较少,JDTLQF+miR-200a agomir组的病变程度最轻。(5)q RT-PCR结果:与对照组相比,模型组Keap1 m RNA水平升高(P<0.01),Nrf2、NQO1 m RNA及miR-200a水平下降(P<0.001);与模型组相比,JDTLQF和JDTLQF+miR-200a agomir组Keap1 mmedical ultrasound RNA水平均降低(P<0.05),JDTLQF+miR-200a antagomir组无显著差异(P>0.05);各给药组Nrf2、NQO1 m RNA及miR-Crizotinib200a水平均上升(P<0.05),其中JDTLQF+miR-200a agomir组上升程度优于JDTLQF组,JDTLQF+miR-200a antagomir组的上升程度不及JDTLQF组(P<0.05)。(6)Western blot结果:与对照组相比,模型组Keap1蛋白水平升高(P<0.001),Nrf2、NQO1蛋白水平下降(P<0.001);与模型组相比,JDTLQF各组Keap1蛋白水平均降低(P<0.05),JDTLQF+miR-200a agomir组降低趋势最明显(P<0.05)。与模型组相比,各给药组Nrf2、NQO1蛋白水平均上升(P<0.001),其中JDTLQF+miR-200a agomir组Nrf2、NQO1蛋白水平高于JDTLQF组,JDTLQF+miR-200a antagomir组低于JDTLQF组(P<0.05)。结论:1.临床研究:解毒通络祛风方能有效降低早期DKD患者气阴亏虚,肾风内扰证的中医证候积GSK126体内分、尿蛋白及血糖水平,改善氧化应激,保护肾脏功能,其机制可能与上调miR-200a相关。2.实验研究:解毒通络祛风方可以通过调控miR-200a降低早期DKD大鼠的24hUpro、FPG,Scr、BUN,改善肾组织病理损伤,进一步干预Nrf2信号通路,以改善大鼠氧化应激损伤,提高抗氧化能力。